Meme Yağ Yastığına Ortotopik Enjeksiyon: Farelerde Meme Kanseri Oluşumu

İlk olarak, kültürde istenen meme kanseri hücre hattını oluşturun. Ameliyattan bir gün önce, farenin karnını tıraş edin ve kürkü çıkarmak ve kasık meme uçlarını ortaya çıkarmak için tüy dökücü krem kullanın. Ameliyat günü, hücreleri toplayın, fareyi uyuşturun ve ayak parmağınızın sıkışmasına yanıt verilmediğini onaylayın. Cımbız kullanarak, yukarı kaldırılmış bir tünel oluşturmak için cildi meme ucunun etrafına sıkıştırın.

Daha sonra, toplanan hücrelerin şırıngası ile cildi delin. İğne, uç meme ucuna yaklaşana kadar tüneli takip etmelidir. İğne ucunu nazikçe meme ucunun hemen altındaki meme yağ yastığına doğru hareket ettirin. İğne ile bir cilt çadırı oluşturmak için cımbızı çıkarın ve ardından hücreleri yavaşça enjekte edin.

Son olarak, meme ucunu çevreleyen yuvarlak yumruyu rahatsız etmemeye dikkat ederek şırıngayı geri çekin. Enjekte edilen hücreler ve sonraki tümörler lusiferazı eksprese eder ve biyolüminesan görüntüleme kullanılarak izlenebilir. Örnek protokolde murin ortotopik meme kanserinin oluşumunu göstereceğiz. Ameliyattan bir gün önce, alıcı fareyi manuel olarak dizginleyin ve hayvanın göbek tarafını dördüncü meme uçlarının etrafında traş edilecek kürke doğru çevirin.

Kürkü ince bir tüy dökücü krem tabakasıyla silin. Kremayı 30 ila 60 saniye sonra çıkarmak için damıtılmış su kullanılır. Ve fareyi yumuşak kağıt havluyla kurulayın. Ameliyat günü, murin meme kanseri hücre süspansiyonunu buz üzerinde steril bir mikrosantrifüj tüpünde mililitre PBS konsantrasyonu başına 2 x 10 ila 5. hücrelere seyreltin.

Her enjeksiyondan önce, fare başına 50 mikrolitre hücre ile .45 x 16 iğne ile donatılmış bir mililitre şırınga yükleyin. Ve her sedasyonlu hayvanda ayak parmağını çimdiklemeye tepki eksikliğini onaylayın. Hayvanların gözlerine merhem sürün ve şırınganın takip etmesi için bir tünel oluşturmak üzere cildi ilk farenin dördüncü meme ucunun etrafına sarmak için cımbız kullanın.

Şırıngayı, eğim yukarı bakacak şekilde tutun ve iğne ucu neredeyse meme ucuna ulaşana kadar tüneli takip ederek meme başından beş ila 10 mililitre uzakta deri altından cilde girin. - Cildi ilk meme ucunun etrafına yerleştirmek için cımbız kullanmak, şırınganın takip etmesi için bir tünel oluşturur. İğne cımbız uçları arasına girilmeli ve dokuya bastırmak yerine yukarı doğru sürülmelidir. Eğim meme ucunun altına gelene kadar iğne ucunu dikkatlice meme yağ yastığının içine doğru hareket ettirin.

Ve kanser hücrelerinin yavaş bir şekilde enjekte edilmesine izin vermek için cilt çadırını serbest bırakın. - Yerleştirildikten sonra, eğim meme ucunun altına gelene ve hücrelerin doğru yere iletilmesini sağlamak için direnç hissedene kadar iğne ucunu dikkatlice meme yağ yastığının içine doğru hareket ettirin. Tüm hücreler enjekte edildiğinde, iğneyi hafifçe yana çevirin ve şırıngayı yavaşça geri çekin. Sıvı sızıntısı olmadığından emin olmak için iğne yarasına 10 ila 20 saniye boyunca baskı uygulamak için pamuklu çubuk kullanın.

Enjekte edilen meme ucu, meme başı merkezde olacak şekilde şeffaf beyaz düz bir küre şeklinde görünmelidir