Hepatik Metabolizmayı İncelemek için Fare Karaciğer Operasyonu ve Perfüzyonu

Başlamak için anestezi uygulanmış C57 Black/6 JRj fareyi yerleştirin. Isıtılmış bir ameliyat masasında sırtüstü yatın. Ayak parmağını sıkıştırmak için refleks tepkilerinin olmadığını onaylayın.

Saçın makasa yapışmasını önlemek için fareye %70 etanol püskürtün. Makas kullanarak, karın boşluğunu ortaya çıkarmak için her iki taraftan göğüs kafesine yukarı doğru keserek tabanda bir karın kesisi yapın. Bağırsakları sağa doğru hareket ettirmek için bir pamuklu çubuk kullanın ve portal damarı açığa çıkarın.

Kavisli forseps kullanarak, portal damarın altına iki bağ yerleştirin ve her bir bağı gevşek bir şekilde bağlayın. Ardından, portal vene 0.7 milimetrelik bir kateter yerleştirin. Delindiğinde, iğneyi kateterden çıkarın ve kateterin ucu karaciğere yakın olana kadar kateteri damar boyunca yönlendirin.

Ardından bağları sıkın. Karaciğeri gözlemleyin. Silindir pompadan akış hızını ayarlayın ve füzyon tüpünü takın.

Karaciğerin bolluğunu 37 santigrat derecede başlatın. Karaciğer soluklaştığında, göğüs kafesini ve diyaframı kesmek için makas kullanın. Daha sonra, ince uçlu forseps kullanarak, suprahepatik inferior vena kava altına ligatür yerleştirin.

Daha sonra, kalbin sağ atriyumundan suprahepatik inferior vena kavaya bir kateter yerleştirin. Delindiğinde, iğneyi çıkarın ve kateteri karaciğere daha yakın damardan geçirin. Ardından bağı sıkın.

Perfüzyon atık suyunun toplanması için bir tüp takın ve tüm tüpleri su geçirmez bantla sabitleyin. Bir damar kelepçesi adaptörü kullanarak, ölü karışımı önlemek için sağ böbrek damarının hemen üzerindeki infrahepatik vena kava boyunca bir damar kelepçesi yerleştirin. Ardından, perfüzyon akış hızını dakikada 3,5 mililitreye yükseltin.

Zamanlayıcıyı ve basınç kaydını başlatın. Karaciğeri tuzlu suyla nemlendirilmiş steril bir örtü ile örtün, 30 dakika dengeleyin ve atık su hacmini ölçün. 30 dakikalık dengelemeden sonra, fraksiyon toplayıcıda ilk temel numune toplama için deneyi başlatın.

Kabarcık kapanını düzenli olarak izleyin ve boşalmaya yakın olduğunda perfüzyon tamponu ile yeniden doldurun. Organa girmeden hemen önce ve inferior vena kavaya yerleştirilen toplama kateterinden üç bir musluk aracılığıyla bir tampon örneği alın. Bir kan gazı analizörü kullanarak, organın metabolik olarak aktif olduğunu doğrulamak için toplanan numuneyi ölçün.

15 dakikalık başlangıç perfüzyonundan sonra, bir şırınga pompası kullanarak, bir test maddesini istenen akış hızında üç bir musluktan infüze ederek ilk stimülasyonu başlatın. Simülasyondan sonra, ikinci stimülasyona başlamadan önce 20 ila 30 dakika boyunca temel örnekler toplayın. Perfüze karaciğerde üre üretimi, iki stimülasyon periyodunun her birinden önce sabit başlangıç periyotları ile ürenin karışık amino asitlerle iki ardışık stimülasyona yanıtının tutarlı olduğunu göstermiştir.

Glikoz ve esterleşmemiş yağ asitlerinin sabit bir bazal salınımı gözlendi. Glukagon infüzyonu sırasında glikoz ve ED olmayan yağ asitlerinde güçlü bir artıştan önce. Bazal durumdaki ve glukagon infüzyonu sırasındaki ortalama değer, glukagonun hepatik glikojenoliz ve lipolizi hızla uyardığını göstermektedir.

Bununla birlikte, sabit bazal dönemler olmadan, bir üre tepkisini diğerinden ayırt etmek imkansız hale gelir.