İntratorasik Enjeksiyon: Yetişkin Zebra Balığı Kalbine Bileşik Teslimat

- Başlamak için, bir Petri kabına yarık olan ıslak bir sünger yerleştirin. Daha sonra, yetişkin bir balığı tricaine solüsyonu ile uyuşturun ve ventral tarafı yukarı bakacak şekilde dikkatlice yarığa aktarın. Petri kabını stereo mikroskop altına yerleştirin ve atan kalbin cilt altındaki hareketini gözlemleyin.

Bir minkroenjeksiyon iğnesini, operkulum ile göğüs kuşağı arasında bulunan atan kalbin üzerine vücut ekseninden 45 derecelik bir açıyla yerleştirin. Nazikçe, iğneyi deriden kalbi çevreleyen ince bir zar olan perikardın içine ilerletin. Enjeksiyon karışımını perikard içine verin.

Atış, çözelti hareketini izlemek için fenol kırmızısı gibi bir izleyici boya içerir. İğneyi torakstan çekin. Balıkları hemen sistem suyu içeren geri kazanım tankına aktarın ve anesteziden tamamen iyileşmesi için izleyin. Aşağıdaki protokolde, bir test bileşiği vermek ve kalp rejenerasyonu üzerindeki etkilerini incelemek için intratorasik bir enjeksiyon gerçekleştireceğiz.

- Yetişkin bir balığı yakalamak için bir ağ kullanın ve anestezik solüsyona aktarın. Bir ila iki dakika sonra, balık yüzmeyi bıraktığında ve operkulumun hareketi azaldığında, herhangi bir temasa tepki vermediğinden emin olmak için balığa plastik bir kaşıkla dokunun. Daha sonra, balığı ventral tarafı yukarı bakacak şekilde hızlı ve dikkatli bir şekilde ıslak süngerin oluğuna aktarın. Balığın başı, operatörün baskın elinden uzağa bakmalıdır.

Stereo mikroskop altında, atan kalbin balık derisi altındaki hareketini dikkatlice gözlemleyin. Görsel olarak, atan kalbin üzerindeki ve ventral kıkırdaklı plakalar tarafından tanımlanan üçgenin ortasındaki enjeksiyon noktasını belirleyin. Kılcal damarın ucunu vücut eksenine göre 30 ila 45 derece arasında bir açıyla yerleştirin. Mikrokılcal damarın ucu ile cilde nazikçe perikard içine nüfuz edin.

İğne perikardın içine girdikten sonra, enjeksiyonu tamamlamak için mikroenjektör cihazının pedalına basın. Enjeksiyondan sonra, kılcal damarı göğüsten yavaşça çekin ve balığı hemen geri kazanım için sistem suyu ile bir tanka aktarın. Anesteziden tamamen iyileşene kadar balıkları izleyin. Enjeksiyonun etkilerini analiz etmek için, kalbi istenen zaman noktasında toplayın ve daha ileri analizler için hazırlayın.