Ultrason Kılavuzluğunda İmplantasyon: Pankreatik Duktal Adenokarsinom Hücrelerini Yetişkin Bir Fareye İmplante Etme Tekniği

- Ultrason, tümör hücresi enjeksiyonu sırasında minimum iltihaplanma ile kanser hücrelerinin belirli bir doku bölgesine implante edilmesine yardımcı olan yüksek çözünürlüklü görüntüler sağlar. Öncelikle, tümör hücrelerini tümör kökenli ilgili bir organa aşılamak için ortotopik modeller kullanıyoruz. Organ, orijinal tümör mikroçevresini taklit eder ve metastazı kolaylaştırır.

PH'ı korumak için tümör hücrelerini soğuk PBS'de askıya alarak başlayın ve tüpü buzun üzerine yerleştirin. Ardından, anestezik fareyi ultrason aşamasına yerleştirin ve uzuvları laboratuvar bandı ile sabitleyin. Tıraşlı karın üzerine gerekli miktarda ultrason jeli uygulayın ve pankreas net bir şekilde görünene kadar ultrason probu konumunu ayarlayın. Şırıngayı tümör hücresi süspansiyonu ile yükleyin ve hücreleri dikkatlice pankreasa enjekte edin.

Ultrason görüntüsünde başarılı implantasyonu onaylayan bir sıvı kabarcığı belirir. Hücrelerin geri akışını önlemek için 5 saniye bekleyin ve iğneyi nazikçe çıkarın. Hayvanı temiz bir kafese geri koyun ve anesteziden çıkana kadar izleyin. Enjeksiyondan birkaç hafta sonra, pankreasa enjekte edilen kanser hücreleri hızla bölünür ve bir tümör oluşturur. Aşağıdaki protokolde, murin kaynaklı pankreatik duktal adenokarsinom hücrelerinin ortotopik modelin pankreasına ultrason eşliğinde implantasyonunu gerçekleştireceğiz.

- Prosedüre başlamadan önce, ilgilenilen pankreas duktal adenokarsinom hücre hattını buz üzerinde uygun bir steril soğuk PBS hacminde yeniden askıya alın. Kafesleri 37 santigrat derecelik bir ısıtma plakasına yerleştirin ve biyolojik güvenlik kabinini, indüksiyon odasını ve ultrason aşamasını uygun bir sterilant ile iyice temizleyin. Ultrason aşamasının ısınma fonksiyonunu 37 santigrat dereceye ayarlayın ve anestezi indüksiyonundan sonra ilk hayvanın gözlerine merhem sürün.

Fareyi ultrason sahnesinde sırt yaslanmış olarak yerleştirin ve üst ve alt ekstremiteleri bantla sahneye nazikçe sabitleyin. Karnın sol üst kadranına, dalağın orta hatta kadar olan bölgesi üzerinden bol miktarda tüy dökücü krem tabakası uygulamak için steril bir pamuk uçlu aplikatör kullanın. 1 dakika sonra, fazla tüy dökücü kremi tuzlu ıslak gazlı bezle çıkarmadan önce tüyleri nazikçe çıkarmak için kuru bir gazlı bez kullanın. Ardından, fareyi ısıtıcı üzerindeki yeni temiz kafeslerden birine yerleştirin.

Ultrason kılavuzluğunda tümör hücresi implantasyonu için, ultrason platformunu, yüzey zemine paralel olacak şekilde ayarlayın ve farenin başı sağa bakacak şekilde hayvanın sol tarafında durun. Dönüştürücü konumunu, enine bir karın görüntüsü elde edilecek şekilde ayarlayın ve fare uzuvlarını bantla platforma sabitleyin. Farenin karnına temas etmek için dönüştürücüyü yavaşça indirin ve pankreas net bir şekilde görünene kadar dönüştürücüyü ayarlayın. Karın boşluğunda doğru bir oryantasyon sağlamak için sol böbreği ve dalağı bulun.

Enjeksiyon bölgesi yerleştirildiğinde, 25 mikrolitre tümör hücresi süspansiyonu ile 29 gauge, yarım inçlik bir insülin şırıngası yükleyin ve iğne ucunu steril bir alkol hazırlama pedi ile silin. Enjeksiyon bölgesindeki gerilimi artırmak için fare derisini ve periton duvarını kavramak için künt kenar forseps kullanın. Şırıngayı ultrason platform yüzeyine yaklaşık 25 ila 45 derecelik bir açıyla tutarak, iğneyi cilt ve periton duvarı boyunca yavaşça ilerletin. İğneyi doğrudan pankreasa yönlendirmek için ultrason görselleştirmesini kullanmadan önce iğnenin periton duvarından delindiğini onaylayın.

İğne yerine oturduğunda, tümör hücrelerini yavaşça enjekte edin. Pankreas içinde bir sıvı bolusunun oluşumu, ultrason ile doğru şekilde enjekte edilen bir pankreasta belirgin olacaktır. Tam süspansiyon hacmi enjekte edildikten ve ultrason ile bir sıvı bolusu gözlendikten sonra, enjekte edilen hücreleri rahatsız etmemeye dikkat ederek, iğneyi fare karnından yavaşça geri çekmeden önce şırıngayı birkaç saniye çok sabit tutun. Ardından, fareyi ısıtıcı üzerindeki yeni ve temiz bir kafese yerleştirin ve tam iyileşme sağlanana kadar izleyin.

- İğne derinliği ve açısı da dahil olmak üzere pankreasta uygun iğne yerleşimi bu protokolde kritik bir adımdır. Sıvı bolusunun görselleştirilmesi, başarılı bir tümör enjeksiyonunun doğrulanmasına yardımcı olur. Enjeksiyon derinliğini kontrol etmek en zor yönüdür. Benim tavsiyem, tripan mavisi enjeksiyonları ile pratik yapmak ve hem ultrason hem de nekropsi ile sıvı bolusunu doğrulamaktır.