İntracekal Tümör Hücresi Enjeksiyonu: Ortotopik Kolorektal Kanser Fare Modeli Oluşturmak için Kanser Hücreleri Verme Tekniği

- İntracekal ortotopik tümör enjeksiyonu, çekal doku histotipine uyan tümör hücrelerini doğrudan alıcı hayvanın çekumuna iletir. Başlamak için, ameliyat için anestezi uygulanmış bir fare hazırlayın. Çek dışını dışlamak için karın duvarını kesin. Herhangi bir bağırsak peristaltik hareketini azaltmak için çekal duvarını kazıyın. Kolorektal kanser hücresi veya CRC süspansiyonu içeren bir şırıngayı çekum üzerine paralel olarak hizalayın.

Ardından, kıvrımları gidermek için çekumu gerin. Çekumu kanülün üzerine, ucu sadece ince, yarı saydam, dış bağırsak zarını veya serozayı delecek şekilde yavaşça çekin. Daha sonra, kanser hücresi süspansiyonunu serosa ve iç kas tabakası arasındaki boşluğa enjekte edin. Hücre süspansiyonunun tam olarak verildiğinden emin olun ve kanülü geri çekin. Çekumu karın boşluğuna geri koyun ve cerrahi insizyonu dikin. Farenin iyileşmesine izin verin.

Enjeksiyondan birkaç gün sonra, enjeksiyon bölgesinde ortotopik bir tümör gelişir veya uzak dokulara veya organlara metastaz yapar. Aşağıdaki protokolde, ortotopik bir CRC fare modeli geliştirmek için bir intracekal kolorektal kanser hücresi enjeksiyon tekniği göstereceğiz.

- Altı ila sekiz haftalık bağışıklığı baskılanmış bir farenin çekumunu dikkatlice dıştan çıkarmak için atravmatik forseps kullanarak başlayın, çekumun kör ucunu karın üzerine yerleştirin, böylece kese kraniyal olarak işaret eder. İntracecal enjeksiyon için, 30 gauge kanül ile donatılmış ve tümör hücreleri ile yüklenmiş standart 1 mililitrelik bir şırıngayı bir mikromanipülatör üzerine monte edilmiş bir mikroenjeksiyon pompasına monte edin. Daha sonra, çekumun ucunu dikkatlice kavramak için atravmatik forseps kullanın ve çekumu aşağı doğru vuruşlarla nazikçe yumuşatmak için ılık tuzlu su ile nemlendirilmiş ikinci bir forseps kullanın.

Şimdi, hayvanı bir binoküler cerrahi mikroskop altında hareket ettirin ve kanül doğrudan çekuma paralel ve üzerinde olacak şekilde, çekumun dış ucunun her iki ucundaki dokuyu dikkatlice germek için iki atravmatik forseps kullanın. Cecum'u kanülün üzerine yavaşça çekin, tüm bağırsak duvarını veya seroza'yı ilk penetrasyon noktasının ötesine delmemeye dikkat edin ve kanülü kan damarlarının üzerine ve bağırsak duvarının içindeki ince yarı saydam zarın altına yerleştirin. Kanül yerindeyken, intramural kan damarlarının üzerindeki ince yarı saydam seroza astarı ile muskularis arasına 20 saniyelik bir süre boyunca 20 mikrolitre hücre enjekte etmek için bir ayak pedalı kullanın.

Tüm hücreler enjekte edildiğinde, kanülü dikkatlice çıkarın ve çekumun altına kuru bir çubuk yerleştirin. Yapay peritoneal yayılmayı önlemek için, sızan hücreleri iyice damıtılmış suyla durulayın ve çekumu yavaşça karın boşluğuna geri koyun. Karın duvarını 6-0 hızla emilen koşu dikişleri ile ve cildi cerrahi yara klipsleri ile kapatın. Ardından, fareyi 38 santigrat dereceye ayarlanmış bir ısıtma matının üzerine yerleştirin ve tam yaslanana kadar izleyin.