Asılı Damla Yöntemi: 3D Melanom Sferoidleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

- Sferoidler, in vivo tümör mimarisini taklit eden ve tümör içi etkileşimleri incelemeye yardımcı olan üç boyutlu in vitro hücre kültürü modelleridir. Kültürü kurmak için önce uygun ortamlarında tek hücreli bir melanom hücresi süspansiyonu hazırlayın. Daha sonra, bu hücre süspansiyonunun küçük hacimlerini, steril, yapışkan olmayan bir kültür kabının kapağının iç yüzeyine yeterince ayrı olarak yerleştirin. Kapağı dikkatlice ters çevirin ve bir hidrasyon odası oluşturmak için PBS içeren kültür kabının tabanına yerleştirin. Plakayı uygun koşullar altında inkübe edin.

PBS'den gelen nem, ortamın asılı damlalardan buharlaşmasını önler. Birkaç mikrolitre ortamı değiştirerek damlaları yenileyin. Yüzey gerilimi nedeniyle, damlacıklar küresel şekillerini korur ve plakanın iç yüzeyinden asılı kalır. Yerçekimi kuvvetleri, hücrelerin yayılmadan süspansiyon halinde kalmasını kolaylaştırır, ancak damlacıklar içinde üç boyutlu sferoidler oluşturmak için toplanır. Son olarak, sferoidleri hasat etmek için damlacıkları PBS ile durulayın. Bunları yapışkan olmayan bir kültür kabında toplayın.

Aşağıdaki protokolde, asılı damla yöntemi ile 451-LU melanom hücrelerinin üç boyutlu sferoidlerinin oluşturulma