İndüklenebilir Tet-On Düzenlenebilir Sistem Tabanlı In Vivo: Fare Modelinde Hedef Gen Transkripsiyon Aktivasyonu için Tetrasiklin Kaynaklı Bir Gen Ekspresyon Sistemi

Tetrasiklin-On veya Tet-On sistemi, tetrasiklin veya analogu doksisiklin varlığında ilgilenilen genin ekspresyonunu aktive eden koşullu bir gen ekspresyon sistemidir.

Karaciğer hücrelerinde veya hepatositlerde karaciğere özgü bir promotör tarafından yönlendirilen ters tetrasiklin kontrollü transkripsiyonel aktivatör proteini veya rtTA'yı kodlayan gen içeren modifiye edilmiş bir genoma sahip genetik olarak tasarlanmış bir fare ile başlayın. Ek olarak, fare, tetrasiklin operatörünün kontrolü altında ilgilenilen bir gen veya yukarı akışta bulunan ve seçici olarak minimal bir promotöre kaynaşmış tetO dizileri içerir. TetO ve promotör, tetrasikline duyarlı element veya TRE olarak adlandırılır.

Tet baskılayıcı, tetR ve viral protein VP16 transaktivasyon alanını içeren bir füzyon proteini olan eksprese edilen rtTA, aktif olmayan ve TRE'nin tetO dizisine bağlanamayan ve hedef gen ekspresyonunun aktivasyonunu önleyen dimerler oluşturur.

Doksisiklin ve sükroz içeren bir çözelti hazırlayın. Sükroz ilavesi lezzeti artırır. Filtrelemeden sonra, doksisiklin-sükroz çözeltisini fareye içme suyu olarak verin. Uygulanan doksisiklin karaciğerde birikir.

Hepatositlerde, doksisiklin rtTA'ya bağlanır, bu da konformasyonel değişikliğe ve tetO DNA bağlanma bölgesi için afiniteye neden olur. Doksisikline bağlı rtTA'nın tetR DNA bağlama alanı, TRE elementinin tetO dizisine bağlanır. VP16 alanı ayrıca RNA polimerazı işe alır, bu da transkripsiyona, mRNA'yı oluşturmaya ve ardından aşağı akış raportör hedef geninin ekspresyonuna yol açar.