Bakteriyofajları Numaralandırmak için Kantitatif Polimeraz Zincir Reaksiyonu

qPCR ön karışımını, konsantrasyonu bilinmeyen 10 biyopanlı faj numunesi ve üç nüsha halinde 7 standart konsantrasyon numunesi için hazırlayın, böylece 255 mikrolitre qPCR Master Mix, 51 mikrolitre primer ve 102 mikrolitre su içeren 51 numune için bir ön karışım elde edin.

Hazırlanan PCR'nin 8 mikrolitresi, 96 oyuklu bir qPCR plakasının 51 oyuğuna bölünür. Daha sonra, bu oyukların her birine iki mikrolitre ısıl işlem görmüş T7 faj örneği ekleyin ve qPCR ön karışımının yüzeyinin altına dağıtın. Yapışkan film kullanarak plakayı kapatın.

Floresan foto-ağartmayı en aza indirmek için plakayı alüminyum folyoya sarın ve ardından plakayı qPCR ekipmanı üzerinde çalıştırmaya devam edin. Döngü koşullarını ve erime eğrisi ayarlarını metin protokolünde belirtildiği gibi ayarlayın.