Name: Parafin ve Dondurulmuş Bölüm Drosophila Yetişkin Kaslar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-27T17:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Öğrenin Drosophila toraks kasları için parafin ve dondurulmuş doku kesitleri hazırlama yöntemini. Bu histolojik teknik kas morfolojisi ve protein lokalizasyonu analizini mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz bize cryo-mikrotom kullanmak için izin verdiği için Prof. Eichele teşekkür ederim. İş Max-Planck-Gesselschaft tarafından finanse edildi.

1. Hazırlık <ol><li> Taze 3 Bu oran 06:03:01 sırasıyla mutlak etanol, kloroform ve buzul asetik asit birleştirerek Carnoy Kullanıcı fiksatif hazırlamak yanı sıra daldırarak yaka için tüm çözümleri (öneri için reaktifler bölümüne bakınız) cam boyama kavanoz içinde muhafaza edilmelidir. </li><li> Alüminyum folyo hazırlayın yaka için doğru boyutu cebe. </li><li> 2 X% 40 etanol,% 70 etanol, 2 X% 100 etanol, methylbenzoate (MB), 50/50 v / v MB ve parafin, 2 X parafin: kavanoz boyama aşağıdaki çözümleri hazırlayın. 60-65 ° C için bir kuluçka set MB ve parafin kapları koyun. </li><li> 60-65 ° C folyo ceplerine dökmek Sıcak parafin </li></ol> 2. Sinekler yaka içinde Tespit <ol><li> Binoküler altında dikey konumda sinek için giriş noktası görebileceğiniz bir bant kullanarak yaka 4 takın. </li><li> Anestezisi bir buz bloğu kullanarak karbon dioksit veya hipotermi ile uçar. Sineklerin dondurmak için dikkatli olun. </li><li> Forseps kullanarak, doğru yönde (bıçakları ve bıçaklar altında karnın üst baş ve göğüs) yaka içine kanatları ve yer kapma bireysel sinekler pick up. 10-20 sinekler yaka kolayca sığacak gerekir. </li></ol> Not: Birden fazla genotipleri analiz yapıyorsanız, yaka numarasını ve ilgili genotip bir yere not etmeyi unutmayın. 3. Drosophila Thoraxes Parafin Bölüm <ol><li> Carnoy çözümü için yaka yerini değiştirin ve doku düzeltmek 4 ° C, gece boyunca. </li><li> Fiksasyon sonra, etanol artan konsantrasyonlarda kullanarak örnek kurutmak. 10 dakika her biri% 40 (2 kez),% 70 ve% 100 oda sıcaklığında (2 kez) etanol içine daldırın yaka için. Sonraki inkübe MB ve MB + parafin çözüm (1:1) yaka ve her 30 dakika için 60-65, her biri için 60 dk iki değişiklik parafin ° C yaka sızmak Hızla folyo cebine yaka taşınmaya ve erimiş (60-65 ° C) parafin ile doldurun. Oda sıcaklığında yerleştirin ve parafin (o gecede terk etmek en iyisidir) sabit hale izin. Yaka (boyuna veya enine) bölümleri yönünü bağlı olarak, farklı yönelimleri folyo cebe yerleştirilir olduğunu unutmayın. </li><li> Folyo yaka kuru parafin blokları Unwrap ve parafin blok hafifçe yaka ayrı. Sinek doku etrafında ekstra parafin, keskin bir bıçak ya da neşter yardımıyla dikkatlice kesip. </li><li> Kes bir dönme mikrotom 7-10 mikron bölüm adımlarla parafin blok ve 37 ° C su banyosunda kesilen doku düz float izin. Kutup slaytlar kesitli doku yerleştirin ve gece boyunca kurumasını bekleyin. Bu slaytlar Hematoksilen ve eozin ile boyanması için kullanılabilir (Şekil 1A-B), toluidin mavi, anilin mavisi veya diğer ölür doku yapıları görselleştirmek için, hem antikor boyama gibi (Şekil 1E-E ``). </li></ol> 4. Drosophila Thoraxes, Cryosections <ol><li> Parafin bölümlerde olduğu gibi, bir yaka ve moda bir alüminyum folyo cep sinek hazırlamak. Dondurma soğutucusu örnekleri hazırlamak için gerekli olacaktır. Soğutucu -60 civarında olduğundan emin olun ° C, bu sıcaklık ulaşmak için izin vermek için küçük bir etanol ve kuru buz kullanın. Deney başlamadan önce bir saat soğumasını ve hava kabarcıklarının oluşumunu en aza indirmek için 4 ° C buzdolabı ters cryo gömme orta şişe (Doku Tek Ekim bileşik) koymak. </li><li> Dondurucu soğutucu içinde birkaç dakika için ön soğutmalı ve hızla cryo gömme bileşik ile doldurun olmuştur folyo cebe sinekler yaka yerini değiştirin. 3-10 dakika için örnek donmasına izin. Dikkatle, soğutucu içinde oluşan blok unwrap yavaşça gömme blok yaka ayrı ve en az bir gün için -20 ° C'de koydu. </li><li> -15 Ve -18 ° C arasında bir mikrotom cryo bir bölümü 10-15 mikron kalınlığında donmuş kasları kesin. Polarize slaytlar yerleştirin ve daha fazla işlem yapmak için hazır olana kadar -20 ° C'de tutmak. Antikor boyama önce oda sıcaklığında 10 dakika için% 4 formaldehit PBS çözüm doku sabitleme öneririz. </li></ol> 5. Drosophila Kaslar Lipidler Algılama Lipid damlacıkları yağı kırmızı O Sieber ve Thummel 5 kabul edilen bir protokol kullanarak cryosections leke ile tespit edilebilir . <ol><li> Fiksasyon sonra, 5 dk, 10 dk inkübe 3 yağ kırmızı O saat oda sıcaklığında leke için propilen glikol dengelenmiş slaytlar için iki kez su ile yıkayın. Ardından, propilen glikol ve PBS içinde 30 dakika 5 dakika örnekleri 2 kez yıkayın. % 30 gliserol Dağı. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar: <img src="/files/ftp_upload/2438/2438fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Incirure 1. Parrafin-gömülü bölümleri Dolaylı uçuş kaslarına Hematoksilen ve eozin boyanmış enine (AB) ve boyuna (CD) bölümleri. A ve C normal yapılandırılmış kasları gösterir. Anormal boyutu ve morfolojisi kasları sırasıyla B ve D (siyah ok) temsil edilmektedir. Anti-LamC leke nükleer (EF), çekirdek zarı marker ve DAPI, Drosophila toraks boyanmış enine bölümü. Normal büyütülmüş görünümü (kırmızı ok) ve bozulmuş (sarı ok) kasları (F). G LamC ve DAPI Drosophila bağırsak boyanan bölümünde temsil eder. <img src="/files/ftp_upload/2438/2438fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Frozen Drosophila toraks yağı kırmızı O, lipid damlacıkları etiket ile boyanmış A. Transvers frozen. B. dolaylı uçuş kaslarına Boyuna frozen anti-Dg, kas sarcolemma işaretleyici ve DAPI ile boyandı.

<ol><li>Miller, A. The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster. , CSHL Press. Cold Spring Harbor. (1950).</li>
<li>Shcherbata, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+muscle+and+neuronal+disorders+in+a+Drosophila+model+of+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+journal%22%5BJournal%5D)">Dissecting muscle and neuronal disorders in a Drosophila model of muscular dystrophy.</a> The EMBO journal. 26, 481-481 (2007).</li>
<li>Kucherenko, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+modifier+screens+reveal+new+components+that+interact+with+the+Drosophila+dystroglycan-dystrophin+complex%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Genetic modifier screens reveal new components that interact with the Drosophila dystroglycan-dystrophin complex.</a> PloS one. 3, e2418-e2418 (2008).</li>
<li>Puchtler, H., Waldrop, F. S., Conner, H. M., Terry, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carnoy+fixation%3A+practical+and+theoretical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemie%22%5BJournal%5D)">Carnoy fixation: practical and theoretical considerations.</a> Histochemie. 16, 361-36 (1968).</li>
<li>Ashburner, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila+-+A+Laboratory+Manual%22">Drosophila - A Laboratory Manual</a>. , CSHL Press. (1989).</li>
<li>Sieber, M. H., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DHR96+nuclear+receptor+controls+triacylglycerol+homeostasis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+metabolism%22%5BJournal%5D)">The DHR96 nuclear receptor controls triacylglycerol homeostasis in Drosophila.</a> Cell metabolism. 10, 481-481 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Paslanmaz çelik kolyeler</td><td>Ev yapımı</td><td></td><td>Özel olarak imal edilmiş</td></tr><tr><td>Pens</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum folyo</td><td>Herhangi bir tedarikçi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bıçak veya skalpel</td><td>Herhangi bir tedarikçi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wheaton makro boyama kavanozu</td><td>Wheaton</td><td>900200</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td>Model: Hyrax M25</td></tr><tr><td>Kriyo-mikrotom</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Model CM3050S</td></tr><tr><td>60-65&amp;#x00B0;C İnkübatör</td><td>Herhangi bir tedarikçi</td><td></td><td>En az 4 boyama kavanozu alabilecek büyüklükte</td></tr><tr><td>Metal bloklu dondurucu soğutucu</td><td>Herhangi bir tedarikçi</td><td></td><td>-80&amp;#x00B0;C'de saklayın</td></tr><tr><td>Super-frost lamlar</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>9161155</td><td></td></tr><tr><td>Lamel</td><td>Herhangi bir tedarikçi</td><td></td><td>24 X 40 mm önerilir</td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>288306</td><td>Analitik derece</td></tr><tr><td>Buzul asetik asit</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td>100063</td><td>Analitik derece</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td>100983</td><td>Analitik derece</td></tr><tr><td>Metilbenzoat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M29908-500G</td><td>Analitik derece</td></tr><tr><td>Paraplast plus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>76258</td><td>Parafin</td></tr><tr><td>Tissue-Teck O.C.T. bileşiği</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>%16 formaldehit, metanolsüz</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>18814</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5150-1L</td><td></td></tr></tbody></table>

parafin ve dondurulmuş bölüm drosophila yetişkin kaslar

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Insanlarda kas distrofiler ve miyopatiler moleküler karakterizasyonu, kas hastalığı ve kas belirtimi genetik analiz karmaşıklığını ortaya koymuştur model sistemler oluşumu ve işlevi kas fizyolojisi değerli bilgiler sağladı. Bu nedenle, kas hasarı altında yatan moleküler mekanizmaları karakterize belirlenmesi ve kritik öneme sahiptir. Yetişkin Drosophila çok lifli kas yapısı, omurgalı çizgili kaslar 1 ve Drosophila, genetik tractability distrofik kas morfolojisi analiz ve yaşlanma yetişkin kas fonksiyonunu etkileyen süreçler 2 uçar karakterize etmek için büyük bir sistem yaptı benzerler . Burada parafine gömülü ve Drosophila torasik kasları bölümleri dondurulmuş hazırlamak için histolojik teknik sunuyoruz. Bu hazırlıklar, klasik histolojik lekeleri ile protein tespit boya ile boyanmış ve etiketlenmesine doku için izin ve özellikle cryosections sağlam kaslarda protein immünohistokimyasal tespiti için idealdir. Bu kas dokusunun yapısı, morfolojik kusurların belirlenmesi, ve kas / Drosophila yetişkin kaslarda nöron-spesifik proteinlerin ifade deseninin tespit analizi sağlar. Bu teknikler, aynı zamanda diğer vücut parçaları kesit için biraz değiştirilmiş olabilir.

Kas hasarı altta yatan mekanizmaların belirlenmesi çok önemlidir. Burada parafine gömülü ve Drosophila torasik kasları bölümleri dondurulmuş hazırlamak için histolojik teknik sunuyoruz. Bu kas morfoloji ve protein ve diğer kas hücre bileşenleri lokalizasyonu analizi sağlar.

Parafin ve Dondurulmuş Bölüm Drosophila Yetişkin Kaslar

İnsanlardaki müsküler distrofilerin ve miyopatilerin moleküler karakterizasyonu, kas hastalıklarının karmaşıklığını ortaya koymuş ve ...'nın genetik analizleri...

Drosophila toraks kaslarının parafine gömülmüş ve dondurulmuş kesitlerinin hazırlanmasına yönelik aşağıdaki histolojik teknik, kas morfolojisi ve protein ekspresyonu analizleri için güçlü bir yaklaşım sunar. Bu işlem, öncelikle hayvanların tasmalarla sabitlenmesi ve ardından dokunun gömülmesiyle gerçekleştirilir. Parafin veya OCT ortamına gömülen oph thax örnekleri mikrotom ile kesilir.Son olarak, kas dokusu yapılarını görselleştirmek veya kasların farklı moleküler bileşenlerini saptamak için kesitler boyanır. Elde edilen örnekler; klasik histolojik boyama yöntemleri, floresan boyalar veya immün boyama ile birlikte kullanıldığında, kas dokusu morfolojisini ve kasa özgü bileşenlerin lokalizasyonunu gösterebilir. Bu tekniğin temel avantajı, ince kas yapılarını hayvan içinde doğal olarak bulunduğu konfigürasyonda geri kazanabilme yeteneğidir.Bu yöntem, Drosophila baş-abdomen gibi diğer sistemlere kolayca uyarlanabilir. Bu yöntem, Helena Sheta'nın gen ekspresyonu ve sinyalizasyon laboratuvarında geliştirilmiştir ve bugün Maria Rinko tarafından uygulamalı olarak gösterilecektir. Başlangıç olarak, kolları daldırmak için kullanılacak tüm solüsyonları cam boyama kavanozlarında hazırlayın.Mutlak etanol, kloroform ve glacial asetik asidi sırasıyla altı, üç ve bir oranlarında birleştirerek taze car noise sabitleyici hazırlayın. Alüminyum folyodan, kollar için uygun boyutta cepler içeren bir yığın oluşturun. Ayrıca etanol, metil alkol ve parafin çözeltilerini boyama kavanozlarında hazırlayın.Şimdi metil benzoat ve parafin kaplarını 60 ila 65 derece Celsius'ye ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin. Ayrıca, daha fazla parafini 60 ila 65 derece Celsius'ye kadar ısıtın. Folyo ceplere dökmek için, sineğin giriş noktası görünecek şekilde yaka kısmını mikroskobun altına bant kullanarak dikey konumda sabitleyin.Sinekleri ya karbondioksit kullanarak ya da bir buz kalıbı yardımıyla hipotermi yoluyla anestezi altına alın. Pens kullanırken sinekleri dondurmamaya dikkat edin. Sinekleri tek tek kanatlarından tutarak yakalayın ve her bir sineği, başı ve toraksı bıçakların üzerinde, abdomeni ise bıçakların altında kalacak şekilde kolye düzeneğine yerleştirin.Birden fazla genotip analiz edilirken, her bir yakaya 10 ila 20 sinek yerleştirin. Yaka numarasını ve karşılık gelen genotipi not edin. Yakayı Carnoy çözeltisine aktarın ve dokuyu dört derece Celsius'ta gece boyunca sabitleyin.Fiksasyondan sonra, kolu oda sıcaklığında her biri 10 dakika boyunca artan konsantrasyonlardaki etanol banyolarına daldırarak örneğiye dehidrate edin. Ardından, kolu sırasıyla metil benzoat ve metil benzoat artı parafin çözeltisi içerisinde 30'ar dakika inkübe edin ve daha sonra kolu iki kez değiştirilen parafin içerisinde 60'ar dakika infiltre edin. 60 ila 65 °C'de kolu hızla bir folyo cebe aktarın.Bu aşamada, kesitlerin boyuna veya enine bitki yönelimini kolaylaştırmak için yaka folyo ceplere yerleştirilmelidir. Ardından, parafinin katılaşmasını sağlamak için cepler eritilmiş parafinle doldurulur. Folyo cepler gece boyunca oda sıcaklığında bırakılır.Yakalıkla birlikte kurutulmuş parafin bloklarını folyodan çıkarın ve keskin bir skalpel yardımıyla yakalığı parafin bloktan nazikçe ayırın. Rotasyonel mikrotom üzerinde, sinek dokusunun etrafındaki fazla parafini dikkatlice yontun. Parafin bloğu yedi ila 10 mikronluk kesit adımlarıyla kesin.Kesilen dokunun 30 °C'lik bir su banyosunda düz bir şekilde yüzmesini sağlayın. Son olarak, doku kesitini polar lamlar üzerine yerleştirin ve gece boyunca kurumaya bırakın. Bu lamlar artık hematoksilin ve eozin ile boyanmaya hazırdır.Deneye başlamadan bir saat önce, soğutmak ve hava kabarcığı oluşumunu en aza indirmek için kriyojenik gömme ortamı şişesini dört derecelik bir buzdolabına ters şekilde yerleştirin. Ek olarak, etanol ve kuru buz yardımıyla eksi 60 derecelik bir dondurma soğutucusu hazırlayın. Parafin kesitlerinde olduğu gibi, sinekleri bir yakada immobilize edin, sineklerin bulunduğu yakayı önceden soğutulmuş bir folyo cebe aktarın ve hızlıca OCT kriyojenik gömme bileşiği ile doldurun.OCT'nin donmasını bekleyin. Soğutucunun içinde oluşan bloğu dikkatlice çözün. Yakayı gömme bloğundan nazikçe ayırın ve en az bir gün boyunca -20 °C'de bekletin; ardından dondurulmuş kasları, bir kriyomikrotom kullanarak -15 ile -18 °C arasında, 10 ila 15 mikron kesit kalınlığında kesin.Ardından örnekleri polarize lamlar üzerine yerleştirin. Örnekleri, ileri işlemler için hazır olana kadar -20 °C'de saklayın. Lipid damlacıkları, kriyoseksiyonlar üzerinde oil red o boyaması ile tespit edilebilir.Seber ve Tum'dan uyarlanan bir protokol kullanarak, boyama işleminden hemen önce, dondurulmuş kesitlerin fiksasyondan sonra 10 dakika boyunca %4 formaldehitte fikse edilmesi gerektiğini unutmayın. Lamları beşer dakikalık iki kez su ile yıkayın. Ardından 10 dakika boyunca propilen glikolde dengeleyin.Şimdi üç saat boyunca yağ içinde inkübe edin. Oda sıcaklığında Red O boyama yapın. Ardından örnekleri polipropilen glikolde beşer dakikadan iki kez yıkayın ve ardından 30 dakika PBS içinde bekletin; örnekleri %30 gliserol ile monte edin, indirekt uçuş kaslarının transvers ve longitudinal kesitlerini hematoksilin ve eozin ile boyayarak anormal boyut ve morfolojiyi normal yapılı kaslardan ayırt edin.Parafin gömülü kesitler, bu bölümde drosophila bağırsak kanalının nükleer zar belirteci Lamin C ve nükleer boya DPI ile aydınlatılmasında belirtildiği gibi antikorlarla etkili bir şekilde boyanabilir. Burada, normal ve bozulmuş kasların genişletilmiş bir görünümünü göstermek için drosophila göğüs kafesinin transversal kesitleri anti Lamin C ve DPI ile boyanmıştır.Benzer şekilde, indirekt uçuş kaslarının boyuna dondurulmuş kesitleri anti distro, glikan kas, sarkolemma markörü ve DPI ile boyanabilir; oil red O ile boyandığında ise drosophila toraksının transvers dondurulmuş kesitleri lipid damlacıklarını işaretler. Bu tekniklerin HNE boyaması ve immünohistokimyasal tespit gibi diğer yöntemlerle kombinasyonu, kaslarda doku yapısını ve protein lokalizasyonunu belirlemek için güçlü bir yaklaşım sunar.

paraffin-embedded-and-frozen-sections-of-drosophila-adult-muscles

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Drosophila uçuş kasları, kas gelişimi ve fizyolojisi için model bir sistem olarak kullanılır. Bu video, yetişkinlerin uçuş kaslarını açıklar ve pupalardan RNA dizilimi için uygun olan dolaylı uçuş kaslarının geliştirilmesini incelemek için bir protokolü vurgular.

Drosophila Geç Pupa İndirekt Uçuş Kası (IFM) Diseksiyonu: Yüksek Verimli Doku Toplama Yöntemi

Bu video, Drosophila'nın dorsal longitudinal kaslarındaki nöromüsküler kavşakların yapısal bütünlüğünü değerlendirmek için bir protokolü göstermektedir. Prosedür, nöronların ve kasların iki farklı antikorla boyanmasını ve mutant ve vahşi tip sinekler arasındaki floresan modellerinin karşılaştırılmasını içerir. Mutant sineklerde nöronal lekelenmede bir azalma, kas yapısı bozulmadan kalırken nörodejenerasyonu gösterir.

Drosophila'da Dorsal Longitudinal Kas Nöromüsküler Kavşaklarının Yapısal Bütünlüğünün Değerlendirilmesi

Hücre içi organellerin morfolojisi, büyüklüğü ve konumu evrimsel olarak korunur ve işlevlerini doğrudan etkiliyor gibi görünmektedir. Bu süreçlerin altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak, modern biyolojinin önemli bir hedefi haline gelmiştir. Burada, bu çalışmaların nicel tekniklerin uygulanmasıyla nasıl kolaylaştırılabileceğini gösteriyoruz.

En fenotip Karakterizasyonu: Niceleme Matters Neden<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva Nöromüsküler Junction

Drosophila larva dendritik arborization (da) nöronları kullanarak nöronal morfolojilerinden Çalışmaları Immünofloresan nöronal ve epidermal proteinlerin in situ görselleştirme yarar. Larva vücut duvarı kas dokusu kaldırarak da nöronlar ve çevresindeki epidermal hücrelerin immünoflüoresans analizi artıran bir prosedür açıklanmaktadır.

Kaldırılması<em&gt; Drosophila</emDuyu Nöronlar ve Epidermal Hücre İmmünofloresan Analizi Larvaların Fileto dan&gt; Kas Dokusu

Biz kas kütlesi Drosophila erişkinlerde belirlemek için dolaylı bir yöntemidir kas alanı ölçmek için bir yöntem raporu. Miyotonik Distrofi hastalığı Drosophila modelinde metodolojimiz dolaylı uçuş analiz tarafından uygulanması kaslar göstermektedir.

Drosophila Melanogaster yetişkin dolaylı uçuş kaslarının optik kesitsel kas alanı belirlenmesi

Bu protokol için seri-bölüm elektron tomografi uygulanması mitokondrial Drosophila dolaylı uçuş kas yapısında aydınlatmak için göstermektedir.

3D mitokondriyal Ultrastructure Drosophila dolaylı uçuş kas seri-bölüm elektron tomografi tarafından ortaya

Drosophila uçuş kası transkripsiyonel düzenleme, alternatif birleştirme, metabolizma ve mekanobiyoloji çalışma güçlü bir modeldir. Biz proteomics ve derin sıralama için ideal son derece zenginleştirilmiş örnekler oluşturmak için canlı pupa floresan etiketli uçuş kası diseksiyon için bir protokol salıyoruz. Bu örnekler kas gelişiminin çeşitli yönleri ne önemli mekanistik anlayışlar sunabilir.

Omics Yaklaşımlar için Drosophila melanogaster Uçuş Kasları Diseksiyon

Nöromüsküler kavşağın mimarisini koruyan ve yetişkin Drosophila bacağındaki motor nöronların ayrıntılı bir immünostokimyasal çalışmasını sağlayan bir diseksiyon tekniğini tarif ediyoruz.

Tanımlanmış Bir Motor Nöron için Nöromüsküler Kavşaktaki Değişiklikleri Tespit Etmek için Drosophila Yetişkin Bacağının Diseksiyonu ve İmmünhistokimyası

Bu rapor, Drosophila Larvalarında nöromüsküler kavşakları görselleştirmek için yeni bir numune hazırlama prosedürü sunmaktadır. Bu yöntem, geleneksel yönteme kıyasla örneklerin kıvrılmasını önlemede daha etkilidir ve özellikle Drosophila nöromüsküler kavşak ultrastrüktürel analizi için yararlıdır.

Drosophila larvalarında nöromüsküler kavşakların transmisyon elektron mikroskobu için numune hazırlama sürecinin optimize edilmesi

Burada, nöromüsküler kavşaklar ve kas hücrelerindeki mikrotübül ağlarını görselleştirmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Drosophila melanogaster'in güçlü genetik araçlarıyla birleştiğinde, bu protokol, sinir sistemindeki mikrotübül ağı düzenleyici proteinlerin rolü için genetik taramayı ve mikrotübül dinamiği analizini büyük ölçüde kolaylaştırır.

Mikrotübül Ağını Görselleştirmek için Drosophila Larva Nöromüsküler Kavşak ve Kas Hücrelerini Kullanma

Drosophila , miyogenezin temel mekanizmalarını anlamak için güçlü bir modeldir. Toraks hemi-sezaritlerinin diseksiyonu ve hazırlanması için bu protokol, hem pupa hem de yetişkin aşamalarından dolaylı uçuş kasının mikroskopi analizini sağlar. Bu protokol, hücresel morfolojinin, protein lokalizasyonunun, kas yapısının ve miyogenezin diğer birçok yönünün konfokal görüntülenmesini sağlar.

Mikroskopi Yaklaşımları için Drosophila melanogaster Dolaylı Uçuş Kaslarının Diseksiyonu

Öğrenin Drosophila toraks kasları için parafin ve dondurulmuş doku kesitleri hazırlama yöntemini. Bu histolojik teknik kas morfolojisi ve protein lokalizasyonu analizini mümkün kılar.

Parafin ve Dondurulmuş Bölüm Drosophila Yetişkin Kaslar

Daha fazla video keşfet