Primer Embriyonik Fare Orta Beyin Dopamin Nöronlarının İzolasyonu ve Kültürü

Fare embriyolarının orta beyninin ventral bölgesinden izole edilen orta beyin taban dokusunu alın.

Doku, nörotransmitter dopamini serbest bırakan dopamin nöronları geliştirme açısından zengindir.

Doku matrisini parçalamak için bir enzim çözeltisi ekleyin, böylece hücreleri gevşetin.

DNaz I içeren bir serum çözeltisi ekleyin ve bir hücre süspansiyonu oluşturmak için sindirilmiş dokuyu mekanik olarak ayırın. Serum proteinleri enzimleri inhibe ederken, DNaz I, hücre lizizi sırasında salınan hücre dışı DNA'yı parçalayarak hücre topaklanmasını önler.

Doku kalıntılarının çökmesine izin verin ve askıya alınan hücreleri yeni bir tüpe aktarın.

Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın, ardından hücreleri bir dopamin nöron ortamında veya DPM'de yeniden süspanse edin.

Kuyucukların merkezinde bir hücre kültürü substratı ile kaplanmış bir mikroplaka alın ve mikro adalar oluşturun.

Hücreleri yüksek yoğunlukta kültürlemek için mikro adaların ortasına aktarın.

Hücrelerin mikro adalara yapışmasına izin vererek inkübe edin.

Kuyuları DPM ile doldurun ve inkübe edin, dopamin nöronlarının büyümesini kolaylaştırın.

Fare embriyonik gün 13.5 fare embriyolarından birincil embriyonik orta beyin kültürleri kurma