Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Yeni ortaya çıkan, genetiği değiştirilmiş yetişkin Drosophila sineklerini ele alalım.
Sineğin beynindeki mantar gövdeleri, yeşil floresan proteinleri ifade eden nöronlar içerir.
Mantar cisimleri, öğrenme ve hafıza için gerekli olan karmaşık nöronal ağları içeren yapılardır.
Sinekleri bir karbondioksit pedi üzerinde uyuşturun.
Gerekli filtrelerle donatılmış bir stereo mikroskop altında, yeşil floresan ifade eden mantar gövdelerini görselleştirin.
Sterilize edilmiş bir Minutien pimi alın ve kafa kapsülünden mantar gövdesine itin.
Bu, mantar vücut nöronlarına zarar verir ve nöronal ağları bozarak penetran travmatik beyin hasarına neden olur.
Ardından, pimi yavaşça sinekten çıkarın.
Yaralı sinekleri yiyecekle birlikte bir şişeye koyun ve daha ileri çalışmalar için iyileşmelerine izin verin.
Sinekleri bir karbondioksit pedi üzerinde uyuşturduktan sonra, yeni kapatılmış F1 genç erkek sineklerini eklosiyondan sonraki altı saat içinde ayırın ve bunları şişe başına 40 veya daha az sinek içeren yiyecekler içeren temiz şişelere yerleştirin. Ardından, beş dakika boyunca% 70 etanol ile doldurulmuş 1,5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne yaklaşık 100 pim yerleştirerek minutien pimlerini sterilize edin. Ardından, %70 etanol püskürterek ve temiz, tüy bırakmayan bir mendille silerek kurulayarak karbondioksit pedini boya fırçasında sterilize edin.
Aletler temiz ve kuru olduğunda, 40 veya daha az sıralanmış F1 erkeğini temiz pedin üzerine aktarın ve bunları iki gruba ayırın. Bir grup, yaralanmamış sineklerin kontrolü olarak görev yapacak ve ikinci deney grubu, penetran travmatik beyin hasarına maruz kalacaktır. Daha sonra, forseps kullanarak, mikrosantrifüj tüpünden dört ila beş yeni minutien pimi çekin ve bunları karbondioksit pedinin kenarına yakın bir yere yerleştirin. Ardından, diseksiyon kapsamı altında, keskin uçlu düz bir minutien pimi seçin. Keskin pimleri yeniden kullanın ve hasarlı veya kör pimleri güvenli bir şekilde imha etmek için %70 etanol içeren ayrı bir tüpe yerleştirin.
Daha sonra, standart çapraz genotipe sahip sinekler için, 440 ila 460 nanometrede uyarılmaya izin veren ve 500 ila 560 nanometrede görselleştirmeye izin veren yeşil floresan proteini için uygun uyarma ve emisyon filtreleri ile donatılmış stereomikroskop LED lambasını açın. Ardından, deney grubundan bir sinek seçin ve sineği, deneycinin başı sağda olacak şekilde baş kapsülünün sırt görünümüne sahip olacak şekilde konumlandırın. Forseps kullanarak, seçilen minutien pimini bir elinizde, diğer elinizde boya fırçasını alın ve tutun. Ardından, fırçayı dorsal toraksın iç kısmına yerleştirin ve sineği stabilize etmek için hafifçe aşağı doğru itin.
Minutien piminin ucunu mantar gövdelerine, başın sağ tarafındaki hücre gövdelerine doğrultun ve kafa kapsülüne nüfuz edin. Yer işaretleri kullanıyorsanız, ocelli ile gözün sırt kenarı arasındaki sırt başı kütikülünü hedefleyin. Yaralanmayı tamamladıktan sonra, kafayı minutien piminden nazikçe itmek için boya fırçasını kullanın. Beyni RNA dizilimi veya qRT-PCR için kullanıyorsanız, başın sol tarafında ikinci bir yaralanma yapın. Tüm deney sinekleri yaralandıktan sonra, kontrolü ve yaralı sinekleri yiyecek içeren ayrı etiketli şişelere yerleştirin.
