Kemirgenler Akustik irkilme alışkanlık ve prepulse inhibisyonu

Bu prosedürün genel amacı, kemirgenlerde duyusal geçitlemeyi alışkanlık ve ön darbeler şeklinde değerlendirmektir. Akustik irkilme tepkilerinin engellenmesi, hayvanların ürkütücü kutularına alışmalarına izin vererek deneye başlar. Hayvanlar alıştırıldıktan sonra, test protokolleri çalıştırılır ve veriler toplanır.

Sonuç olarak, sonuçlar, akustik irkilme tepkilerinin genliğindeki değişiklikler yoluyla yerleşimin miktarını ve seyrini ve ön darbe inhibisyonunun miktarını gösterir. Bu yöntem duyusal filtrelemeyi ve kemirgenleri değerlendirir, ancak aynı zamanda insanlara ve diğer birçok omurgalı ve omurgasız hayvana da uygulanabilir. Bir dizi deneyden önce, amplifikatör girişini kalibre etmek için bir ses ölçer kullanın, böylece hoparlörler kontrol cihazları tarafından ayarlanan ses seviyesini iletir.

Ardından, ürkütücü kutuların dönüştürücü platformunun hassasiyetini kalibre edin. Tedarikçinin kılavuzuna göre, sistemi kalibre ederken devam eden bir deney olmadığından ve tüm kutuların aynı şekilde kalibre edildiğinden emin olun. Fareleri, 65 ila 68 desibel arka plan gürültüsü ile iki ila beş dakika boyunca deneyciye, prosedüre ve kısıtlayıcı olmayan fare tutuculardaki ürkütücü kutulara alıştırın.

Bu işlemi, alışma sırasında dışkılama ve idrara çıkma durana veya önemli ölçüde azalana kadar günde bir veya iki kez olmak üzere üç ila beş kez tekrarlayın, hayvan tutucuyu denekler arasında daima değiştirin ve temizleyin. Hayvanlar, kısıtlayıcı olmayan hayvan tutuculara yerleştirilmeden ve arka plan gürültüsüne maruz bırakılmadan önce bir ila iki kez ele alınmalıdır. Bir hayvanı bir tutucudan çıkardıktan sonra, tüm protokol çalıştırılmadan önce onu ayçiçeği çekirdeği ile ödüllendirin.

Bu işlemi iki kez daha tekrarlayın. Yeni bir sıçan veya fare suşu ölçüldüğünde alışma süresinin kademeli olarak 10 dakikaya çıkarılması. İlk olarak, bir giriş çıkış işlevi oluşturun.

Hayvanları, 65 ila 68 desibel arasında sabit bir arka plan beyaz gürültüsü ile beş ila 10 dakikalık bir alışma süresine tabi tutun. İklimlendirmeyi takiben, hayvanlar her 20 saniyede bir irkilme uyaranlarına maruz kalır. İrkilme uyaranları yaklaşık 70 ila 75 desibel arasında başlar ve maruziyetler arasında ses seviyesi iki ila beş desibel artar.

Sonuçta 120 ila 130 desibele ulaşıyor. Sonuç, artan uyaran yoğunluğu ile 20 ila 30 denemedir İrkilme, nabız ve ön nabızlar, yoğunluklar, uyaranlar arası aralıklar ve denemeler arası aralıklar gibi test parametreleri, kullanılan hayvan modelinin işitme ve motor yeteneklerine göre dikkatlice seçilmelidir. Burada, daha önce yapılan birçok çalışma ile karşılaştırılabilirlik sağlayacak genel bir protokol öneriyoruz.

Bu protokol aşağıdaki bloklara ayrılmıştır. İlk olarak, bir alışma dönemi. İkincisi, birinci ve üçüncü blok olarak adlandırılan irkilme alışkanlığına izin veren bir blok, ön darbelerin inhibisyonu için bir blok.

Ölçüm ikinci blok olarak adlandırılır. Birinci blok, yerleşimden kaynaklanan irkilme zayıflamalarının PPI'ya müdahale etmemesi için çalıştırılır. Ölçümler, dört test odasının her birine bir hayvan yüklenerek başlar.

Örneğin, bir deneyde test edilen farklı hayvan grupları, farklı genotipler veya enjeksiyonlar varsa, bunları oda sayısı ve test sırası açısından sözde randomize edin. Bir hayvan tekrar tekrar test edilirse, tek tek sıçanlarda tekrarlanan PPI testi için aynı ürkütücü kutuda tekrar test edilmelidir, ancak fareler veri toplamadan önce bu tüm test protokolünü bir kez çalıştırmaz. Saf hayvanların, veri toplamadan önce testi bir kez deneyimlemelerine izin verilir.

Çünkü ÜFE veri değişkenliği genellikle birinci ve ikinci test oturumları arasında azalır. Ek olarak, uzun süreli alışkanlık, ÜFE ölçülürken kafa karıştırıcı bir değişken olabilir ve bu uzun vadeli alışkanlığın çoğu, hayvanların ürkütücü programa birinci ve ikinci maruziyetleri arasında azalır. Hayvanı beş ila 10 dakika boyunca 65 ila 68 desibel beyaz gürültüye alıştırarak teste başlayın.

Ardından, kısa süreli bir alışkanlık bloğu çalıştırın. Bu, kemirgenlerin 22. aralıklarla 20 milisaniyelik beyaz gürültü patlamalarına maruz bırakılmasını içerir. 10 ila 30 saniye arasındaki rastgele aralıklar da kullanılabilir.

İrkilme uyaranının yoğunluğu ideal olarak, genellikle 105 ila 115 desibel arasında olan giriş çıkış fonksiyonunun plato haline geldiği yerdir. Sonraki ölçü ÜFE. Bu blok sırasında, tek başına irkilme nabzı ile yapılan yalancı randomize çalışmalar ve ön nabız ile yapılan denemeler sunulur, arka plan ve irkilme uyaranı, hacimleri ve denemeler arası aralık alışma aşamasında olduğu gibi tutulur.

Bir ön darbe uyaranı, alışma fazı darbeleriyle aynı dik yükselişe sahip beyaz gürültüden üretilir, ancak dört milisaniyelik bir süreye indirgenir. ÜFE ölçümü sırasında çok iki parametre. Interra uyaran aralığı, ön darbelerin sunumu ile irkilme darbesi uyaranlarının seçilmesi arasındaki süredir, bu örnekte değişen uyaranlar arası aralıklar seçilmiştir, 30 ve 100 milisaniye seçilmiştir.

İkinci olarak, örneğin 75 ve 85 desibel gibi değişen ön darbe yoğunluklarını seçin. Daha sonra, dört farklı PrepU nabız deneme tipini ve tek başına irkilme nabzı denemelerini ve her bir deneme tipini toplam 50 deneme için 10 kez sözde randomize edin. Bazen, hayvanların PrePu'ya ürkmediğini göstermek için sadece bir ön darbeden oluşan altı deneme türü eklemek faydalıdır.

MET ortak ekipmanı, bu tür bir hatayı tespit etmek için bu deneme türünün sunumuna izin verir. Bir hayvanı ürkütücü kutusundan çıkarın ve ev kafesine geri koyun. Uzun süreli alışkanlığı veya LTH'yi ölçmek için, tüm protokolü en az beş sonraki gün boyunca çalıştırın.

Birinci blok her gün en az 100 irkilme uyarısı içeriyorsa ikinci blok atlanabilir. Koşuları aynı anda yaptığınızdan emin olun, çünkü irkilme tepkisi genlikleri günlük döngü boyunca dalgalanır. Denemeleri tamamladıktan sonra verileri uygun şekilde depolamaya, analiz etmeye ve sunmaya özen gösterin.

Kemirgenler tipik olarak 85 ila 90 desibel ve üzeri bir ses seviyesinde irkilmeye başlar. İrkilme tepkisi artan ses seviyesiyle artar ve normalde maksimum 100 ila 110 desibele ulaşır. Hayvanlar bu değerlerden önemli ölçüde saparsa, hayvanlar işitme veya motor engellere sahip olabilir, en güçlü alışkanlık etkisi normal olarak iyi kullanılan ilk birkaç uyaran içinde ortaya çıkar.

Sıçanlar normalde ilk irkilme tepkilerinin yaklaşık% 60'ına alışırken, fareler genellikle her iki türde de taban çizgisinin yaklaşık% 80'ine alışırlar. Bireysel farklılıklar ve gerinim farklılıkları çok büyük olabilir. Çoğu sıçan, optimal bir ön darbeye maruz kaldığında taban çizgisinin yaklaşık% 10'unda ÜFE gösterir.

PPI çok sağlamdır ve bu deneysel ayarlarla bireysel farklılıklar nispeten küçüktür, daha düşük hacimli, ön darbeler bir hayvan içinde bile daha az PPI ve daha fazla değişkenlik sağlar, ancak aynı zamanda farmakolojik veya genetik manipülasyonlara karşı daha savunmasız görünmektedir. Uzun süreli alışkanlık birkaç test seansında gözlemlenebilir. LTH, farelerde LTH'yi gözlemlemek için sıçanlarda çok sağlamdır.

Bununla birlikte, her seansta çok sayıda irkilme uyaranının sunulması genellikle bu standart prosedürün ardından gereklidir. Belirli soruları ele almak için bazı parametreler değiştirilebilir. Bu yöntem, duyusal filtrelemede spesifik sinyal moleküllerinin ve beyin yapılarının rolünü incelemek için hem sistemik hem de stereotaksik enjeksiyonlarla birleştirilebilir.