Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Bu işlemin genel amacı, cerrahi travmanın kendisi tarafından reperfüzyon hasarının ve inflamatuar yanıtın modülasyonunu azaltmak için zaman, gecikmiş miyokard iskemisi ve reperfüzyon için bir murn kapalı göğüs modeli yapmaktır. Bu, önce sol dördüncü interkostal boşlukta künt bir torakotomi yapılarak gerçekleştirilir. İkinci adım, sol ön inen arter veya LAD etrafına bir oklüzyon cihazı ile bir ligasyon yerleştirilmesidir.

Daha sonra, ligasyon uçları bir halka oluşturacak şekilde düğümlenir ve göğsü kapattıktan ve farenin beş gün boyunca iyileşmesine izin verdikten sonra deri altı dokusuna yerleştirilir. EKG'ler kaydedilirken kontrollü iskemi ve reperfüzyon üretmek için asılı ağırlıklar kullanılır. Sonuçta, enfarktüs boyutunu göstermek için TC boyaması veya histoloji kullanılır.

Bu tekniğin, miyokard iskemisi ve reperfüzyonun açık göğüs modelleri gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, bu teknikle, cerrahi travmanın kendisinin enflamatuar yanıtının köreltilmesidir. Sedasyonu onayladıktan sonra, farenin boynuna ve sol göğsüne tüy dökücü krem uygulayarak işleme başlayın. Bir dakika sonra kremi silin ve lokal cilt dezenfeksiyonu için povidon iyot uygulayın.

Daha sonra ağrıyı gidermek için deri altına buprenorfin enjekte edin. Daha sonra, orta hat boyun derisi kesisi yapmak için küçük bir makas kullanın ve ardından trakeayı kaplayan bezleri ve kasları köreltin, inceleyin. Ardından ventilatörü açın, solunum hızını dakikada 105'e ve gelgit hacmini 200 mikrolitreye ayarlayın.

Şimdi bir çift forseps kullanarak hayvanın dilini çekin ve ardından 22 gauge metal bir tüpü hayvanın ağzına nazikçe yerleştirin. Trakea içindeki tüpün doğrudan görüntülenmesi ve göğüs hareketi ile entübasyonu onaylayın. Son olarak, laboratuvar alanının kirlenmesini önlemek için atık gaz borularına geçerek indüksiyon kutusunu atlayın.

Entübe farenin sol orta klaviküler hattında bir cilt kesisi yaparak başlayın ve ardından deri altı dokusunu aksillaya doğru künt bir şekilde inceleyin. Şimdi majör pektoralis kasının sınırını tanımlayın ve ardından köreltin, altındaki minör pektoralis kasından ayırın. Göğüs kafesini doğrudan görebilmek için minör pektoralis kasını sağa doğru çekin.

Dördüncü interkostal boşluğu tanımlayın ve daha sonra interkostal boşluğa künt bir şekilde nüfuz etmek ve yayılmak için bir çift forsepsin uçlarını kullanın, bu da ekartörlerin yerleştirilmesine izin verir. Ekartörleri, sol kehanet de dahil olmak üzere kalbin net bir görünümü olana kadar ameliyat masasına takılı lastik bantlarla ayarlayın. Ardından kalbe zarar vermeden perikardımı nazikçe çekin.

Son olarak, sol atriyal oracle'ı sol ventrikülün ön duvarından kaldırarak LAD'yi tanımlayın. Sekiz T prolin sütürün konik iğne ucunu U şeklinde bükerek başlayın. Daha sonra iğneyi, iğnenin dokudan görünmeyeceği kadar LAD'ın altındaki miyokarddan yeterince derin geçirin.

Şimdi her iki tarafta bir santimetre sütür görünecek şekilde dikişin iğne ucunu kesin. Uzun bir PE 10 tüpünü iki propanol gibi alkollü dezenfeksiyonda en az iki dakika bekletin. Daha sonra bir meme oluşturmak için borunun bir milimetrelik bir bölümünü yakaladı.

Son olarak, her iki dikiş ucunu da memeden geçirin. Daha sonra üç numara kült sütür iğne kılavuzu kullanarak, her iki sütür de üst interkostal boşluktan çıkar. Hayvanın açılan interkostal boşluğunda hem üst hem de alt kaburgaları birbirine bağlamak için altı aut prolen sütür kullanarak başlayın.

Daha sonra, göğsü kapatmadan önce, akciğerleri birkaç solunum döngüsü için hiper şişirmek için ektazisi açmak için ekspiratuar tüpü kelepçeleyin. Ventilatör tidal hacmini tekrar 200 mikrolitreye ayarlayın. Şimdi, bir sonraki kancayı oluşturmalarını sağlamak için sekiz TLAD ligasyon sütürünün her iki ucunu bağlayın.

EKG fareye yol açar. Ağırlıkları sekiz OTT halkasına asın ve dikkatlice asılmalarına izin verin. Birkaç kalp atışı içinde önemli bir ST yükselmesi olmalıdır.

Ardından ağırlıkları serbest bırakın ve halkayı deri altı cebe yerleştirin. Altı adet tek düğümlü dikiş ile derinin kapatılması. Son olarak, farenin bir ısınma lambasının altında ekstübasyondan sonra iyileşmesine izin verin.

Beş günlük iyileşmeden sonra, istenen reperfüzyon süresinin sonunda yazılı metinde anlatıldığı gibi miyokardiyal iskemi protokolünü uygulayın, anestezi uygulanmış entübe edilmiş bir hayvanın göğüs derisini orta hatta ksifoide kadar kesin. Daha sonra karnı açın ve göğüs kafesinin altındaki diyaframı kesin, göğsü orta klaviküler çizginin her iki tarafında açık olarak kesin. Şimdi, kalp bağlanmasına engelsiz erişim sağlamak için çırpılmış ön göğüs duvarını dikişle sabitleyin.

LAD, bu prosedürün en zor kısmıdır. İnce motor beceriler ve sabit bir el gerektirir. Sekiz otomatik sütür halkasını dikkatlice hazırlayın.

LAD'yi bağlamak için ilmeği kesin ve düğümü bağlayın. Daha sonra %10 nadas mavisi, yavaş yavaş sol atriyuma enjekte edin ve zaman zaman aspire edin. Risk altındaki alanın yüzeyi de burada maviye döndü, bu da nadir durumlarda olur.

Daha sonra, sol atriyuma potasyum klorür enjekte edin, eşit enfarktüs boyutu değerlendirmesi için kalbi diyastolde durdurun ve ardından organın diseksiyonunu kolaylaştırmak için mümkün olduğunca fazla kardiyo dokusu bırakarak kalbi kesin. Eksize edilen kalbi PBS'de yıkayın ve ardından isop pentan ve sıvı nitrojen içinde dondurun. Alternatif olarak, kalpler hafifçe donana kadar bir dondurucuya konulabilir.

Kalp tamamen donduğunda, dokuyu kalbin uzun eksenine dik olarak kesilecek şekilde hizalayın ve ardından dokuyu bir milimetrelik dilimler halinde kesin. Her dilimi 96 oyuklu bir plakanın ayrı bir kuyucuğuna yerleştirin ve ardından dilimleri 20 dakika boyunca 37 santigrat derecede% 1.5 TTC'de inkübe edin. Daha sonra dilimleri gece boyunca %4 formaldehit ile sabitleyin.

Ertesi gün, dilimleri bir mikroskop lamı üzerine yerleştirin ve ardından dilimleri başka bir slaytla örtün. Her slaytın sonunda iki slaytı ataçlarla bir arada tutan bir milimetre metal ara parça kullanın. Son olarak, her dilimin her iki tarafından dijital bir görüntü alın.

Anestezi uygulanmış entübe edilmiş bir hayvanın göğsünü az önce gösterildiği gibi orta klaviküler hattın her iki tarafına açtıktan sonra P telemetrisi için Image J gibi bir yazılım programı kullanın. Fazla kardiyo dokusunu çıkarın ve aort kökünü kaplayan timusu köreltin, inceleyin. Daha sonra, çıkan aortu tutmak için forseps kullanın ve kalbi mümkün olduğunca az ekstra kalp dokusu ile kesin.

Daha sonra, kalbi Kardiyoplejik solüsyonda nazikçe yıkayın ve sıkın ve kalbi daha fazla kardiyoplejik solüsyonla doldurulmuş bir P 35 kabına yerleştirin. 24 gauge IV hattını çinko formülü ve fiksatif ile doldurun, şimdi çıkan aortu kanül edin ve ardından sol oracle ile sol atriyum arasında bir delik açın. Sol atriyuma 26 santimetre uzunluğunda bir boru takılı olarak 16 gauge kateter yerleştirin.

Son olarak, kalbi resmi ve sabitleyici bir çinko ile perfüze edin. 10 dakika sonra, kalbi yedi santigrat derecede en fazla 24 saat boyunca fiksatif ile dolu bir tüpe yerleştirin. Bu şekilde, Y ekseni boyunca temsil edilen enfarktüs boyutu ve risk altındaki alanın yüzdesi, 30 dakikalık iskemi geçiren fareler için karşılaştırılmış, ardından 30 dakikalık iskemi geçiren farelere siyah çubuk tarafından temsil edilen 120 dakikalık reperfüzyon ve ardından 20 saniyelik üç döngü yapılmıştır.

Kırmızı çubukla temsil edilen reperfüzyon ve oklüzyon veya iskemik son durumun her biri, iskemi reperfüzyon grubunda enfarktüs boyutunda IPC farelerine göre önemli ölçüde daha yüksek bir yüzde olduğuna dikkat edin. Bu şekil, beyaz enfarktüs alanlarının kırmızı risk altındaki alanlardan ve mavi tıkalı olmayan alanlardan nasıl ayırt edilebileceğini göstermektedir. Burada, uygun myo kart için kırmızı TTC boyama ile beyaz enfarktüslü bir alanın temsili bir dilimi gösterilmektedir.

Sol ventrikülün apekse yakın konik şekli nedeniyle, yıldız işaretiyle gösterilen pembe ve mavi dış alandaki epi miyokardın düz bir alan olarak göründüğünü ve planimetrik ölçüm için dikkate alınmaması gerektiğini unutmayın. En önemlisi, miyokard enfarktüsü geçiren hayvanlarla karşılaştırıldığında, iskemi ve reperfüzyon dışındaki tüm cerrahi prosedürlerin uygulandığı sahte ameliyatlı hayvanlarda düşük sitokin RNA ekspresyonu görüldü. Örneğin, bu çubukta görüldüğü gibi, 30 dakika iskemi ve 120 dakika reperfüzyon geçiren grafik hayvanlar, önemli IL bir beta seviyelerini ifade eder.

Ancak kontrol altındaki hayvanlar ve sahte işletilen hayvan grupları bunu yapmadı. Benzer şekilde, iskemik reperfüzyon uygulanan hayvanlar, kontrol ve sahte ameliyat edilen gruplardaki hayvanlara kıyasla önemli düzeyde IL altı ifade etti. Son olarak, gelişiminden sonra kontrol amaçlı veya iskemi reperfüze edilmiş hayvanlar için miyokardiyal TNF Alfa mRNA ekspresyonu üretimi kaydedilmemiştir.

Bu teknik, kardiyovasküler immünoloji alanındaki araştırmacıların farelerde kardiyovasküler hastalıklarda doğuştan gelen bağışıklık tepkisini keşfetmelerinin yolunu açtı.