Roman Bitkisel Tedaviler Değerlendirmek için Sepsis Hayvan Modeli kullanımı

Sepsis bir mikrobik enfeksiyon sonucu ortaya çıkan bir sistemik inflamatuvar yanıt sendromu ifade eder ve çekal ligasyon ve delme (CLP) diye adlandırdıkları bir cerrahi teknik ile simüle edilebilir. Burada tedavi ajanları için şifalı otlar taranması amacıyla CLP bağlı hayvan modelinde kullanılacak bir yöntem açıklanmaktadır.

Bu prosedürün genel amacı, SQL Ligasyonu ve Delinme veya CLP adı verilen cerrahi bir prosedürle bir fare sepsis modeli üretmektir. Bu, önce bir farenin karnında 1,5 ila iki santimetrelik bir orta hat kesisi yapılarak gerçekleştirilir. Daha sonra, secum açığa çıkarılır ve bağlanır, daha sonra bakteriyel translokasyonu indüklemek için seum delinir.

Son olarak kesi kapatılır. Sonuçta, sistemik ve peritoneal sitokin seviyelerinde artışların yanı sıra uyuşukluk ve ölümcüllük gibi semptomlar gösteren sonuçlar elde edilebilir. Size göstereceğim şey, Dr. Chandry ve işbirlikçileri tarafından geliştirilen orijinal modelden modifiye edilmiş, sasyon ve ponksiyon adı verilen bir fare sepsis modeli üretmek.

Bu modelin ortalama ana avantajı, sepsisin en uygun modeli olmasıdır. Ek olarak, basit, iyi karakterize edilmiş ve ekonomik olarak uygulanabilirdir ve bu nedenle sepsis ve inflamasyon araştırmaları alanında yaygın olarak kullanılmaktadır. Örnek olarak, sepsiste bitki ekstraktının terapötik potansiyelini değerlendirmek için bu modelin kullanımını göstereceğiz.

Bitkisel özü hazırlamak için, çözünmeyen parçacıkları gidermek için bir ila dört saat boyunca 85 derecede 200 mililitre suya 10 gram bitkiyi batırın, su fraksiyonunu dört santigrat derecede 20 dakika boyunca 3.300 G'de santrifüjleyin. Ardından, süpernatanı 0,2 mikronluk bir filtreden süzün. Daha sonra, 10.000 kilodalton moleküler ağırlık kesimine sahip bir santrifüj filtre kullanarak ve dört santigrat derecede 60 dakika boyunca 5.000 G'de döndürerek süzüntüyü daha da konsantre edin.

Makrofaj kültürleri kullanılarak, yüksek mobilite grubu kutu bir veya HGB gibi geç proinflamatuar mediatörlerin aktivitelerini inhibe etmek için düşük ve yüksek moleküler ağırlıklı fraksiyonlar tarandı. Önce makrofaj izolasyonuna başlamak için, interperitoneal, üç gün sonra birincil peritoneal makrofaj kültürünü hasat ettikten sonra normal farelere iki mililitre% 4'lük bir TH glikol suyu uyguladı, DMEM'deki makrofajlar% 10 FBS, iki milimolar glutamin ve% 1 penisilin ile desteklendi. Streptomisin, yapışan makrofajları optimum şekilde nazikçe yıkayın ve aynı ortamda iki saat boyunca inkübe edin.

Daha sonra stimülasyondan 16 saat sonra bakteriyel endotoksin lipopolisakkarit veya LPS ile uyarın. Hücre şartlandırılmış ortamı toplayın ve batı lekeleme yapmak için kullanın. HM GB seviyelerini ölçmek için bir.

Bir fareyi kilogram ketamin başına 75 miligram ve kilogram ksilazin başına 20 miligram intramüsküler enjeksiyonla uyuşturduktan sonra sepsis oluşturmak için saflaştırılmış H mgb ile oluşturulan standart bir eğri kullanarak bant yoğunluğunu ölçün. Ve sedasyon seviyesini kontrol etmek için bir ayak parmağı tutamağı kullanarak. Fareyi sırtüstü pozisyona getirin, karnı temizleyin, ardından dört oh ipek sütür ile çekumu sekel ucundan yaklaşık beş milimetre açığa çıkarmak için 15 milimetrelik bir orta hat kesisi yapın.

Çekumu bağlayın ve ardından 22 gauge iğne kullanarak dışkı ekstrüzyonuna izin vermek için bağlanmış sekel kütüğünü bir kez delin, çekumu hemen normal intraabdominal pozisyonuna getirin ve karnı kapatın. Hayvanlar bilinç ve hareketlilik kazandıktan sonra. Kafesi 24 saat sonra hayvan odasına geri koyun.

CLP sonrası intraperitoneal uygulayın, üç gün boyunca günde 200 mikrolitre bitkisel ekstrakt uygulayın veya kontrol edin. Ardışık ligasyon ve ponksiyondan veya CLP ameliyatından sonraki birkaç saat içinde hayvanı gerektiği kadar hayatta kalmak için izleyin. Hayvanlar, piloereksiyon, uyuşukluk, toplanma ve yiyecek ve su alımında azalma gibi klinik sepsis belirtileri sergiler.

Ardışık sistemik enfeksiyon ile şiddetli peritonit gelişen hayvanlar normalde 48 ila 96 saat içinde ölür. Bununla birlikte, yaş, cinsiyet ve genetik arka plan uyumlu hayvanlar bile, deneysel sepsis sırasında, örneğin CLP'den 48 saat sonra ameliyata ayırt edilebilir bir şekilde yanıt verebilir. Bazı hayvanlar burada tanımlandığı gibi höyük durumuna yaklaşmış olabilirken, diğerleri can çekişmeyen bir durumda kalabilir.

Dolaşımdaki sitokinlerin kapsamlı araştırmaları, can çekişen ve olmayan durumdaki fareler arasında IL altı, kc, MIP iki ve ST nfr dahil olmak üzere çeşitli sitokin seviyelerinde dramatik farklılıklar olduğunu ortaya çıkardı. Özellikle, bu inflamatuar mediatörler sepsisin vekil belirteçleri olarak sınıflandırılmıştır, çünkü dolaşımdaki seviyeleri deneysel veya klinik sepsiste ölümcül sonucun güvenilir belirleyicileridir. Ek olarak, CLP, çeşitli pro ve anti-enflamatuar sitokinlerin ve kemokinlerin lokal salınımını indükledi, örneğin, CLP'den 48 saat sonra, sitokin IL altı ve kemokinler KC ve MI P iki'nin önemli miktarları sadece kanda sistemik olarak değil, aynı zamanda periton lavaj sıvısında lokal olarak da ölçülebilir.

Burada, çeşitli bitkisel ekstraktların veya kontrol bileşiklerinin kapasiteleri, endotoksinin neden olduğu HGB'nin bir salınımını inhibe etme yetenekleri açısından değerlendirildi. HGB'nin bir salınımını inhibe etme kapasitesine sahip olanlar, bir fare sepsis modeli kullanılarak in vivo olarak daha fazla test edildi. Deneysel sepsiste HGB bir birikiminin geç ve uzun süreli kinetiği nedeniyle, HGB bir inhibitörünün ilk dozu, sepsisin başlamasından 24 saat sonra, farelerin uyuşukluk, ishal ve piloereksiyon dahil olmak üzere açık sepsis belirtileri geliştirdiği bir zaman noktası olan sepsis belirtisi geliştirdi, burada gösterildiği gibi, majör bir yeşil T bileşeni epi Gallo'nun gecikmeli ve tekrarlanan uygulaması, sepsisin başlamasından 24 saat sonra başlayan kateşin üç GALLATE veya EGCG, oral yoldan verildiğinde bile fareleri ölümcül sepsisten önemli ölçüde kurtardı EGCG hala fareleri ölümcül sepsisten kurtardı, hayvan hayatta kalma oranlarını önemli ölçüde artırdı 16%'den %44'e Bu ligasyona hakim olduktan sonra ve ponksiyon modeli düzgün bir şekilde yapılırsa beş dakikadan daha kısa sürede tamamlanabilir.