Mikro-Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için Microfil ile İskemik arka ayaklarında ve damarları bir Perfüzyon için osmotik İlaç Taşıyıcı

Bu prosedürün genel amacı, farelerin iskemik arka bacaklarına lokal madde verilmesi için bir ozmotik pompanın in vivo yerleştirilmesini ve ardından mikro bilgisayarlı tomografi görüntülemesi için mikro dolgu ile arka bacak damar sistemi perfüzyonunu göstermektir. Bu, ilk olarak deney hayvanının omzunda ve arka bacağında bir kesi yapılarak gerçekleştirilir ve böylece kılıf borusunun hayvanın sırtının iç kısmı boyunca tünellenmesine izin verilir. İkinci adımda, doldurulmuş ve doldurulmuş bir ozmotik pompa ve kateter borudan sokulur ve pompa hayvanın arkasına dikilir.

Ardından, boru çıkarılır. Femoral arter, femoral bifurkasyonun proksimalinde çift bağlanır ve insizyon dikilir. Daha sonra, hindin damar sistemi, infrarenal abdominal aort kateteri yoluyla bir silikon radyo pick görüntüleme ajanı olan mikrofill ile perfüze edilir.

Sonuç olarak, fare iskemik arka uzvunun vasküler dökümünün mikro dolgu ile görünür hale getirilmiş bir 3D görüntüsü görüntülenebilir. Ben Dr. Richard Dixon, Teksas Kalp Enstitüsü'ndeki Moleküler Kardiyoloji Araştırma Laboratuvarları başkanıyım. Laboratuvarımız, kardiyovasküler hastalıkları ve periferik vasküler hastalıkları tedavi etmek için çeşitli hücre ve ilaç bazlı tedaviler geliştirmektedir.

Periferik vasküler hastalıkta bileşikleri test etmek için en yaygın modellerden biri, hayvan kemirgen arka bacak iskemi modelidir. Son zamanlarda bu modelde bir dizi önemli gelişme geliştirdik ve bunları bu video sunumunda size sunmak istiyoruz. Bu tekniğin günlük ilaç enjeksiyonları gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, bu tekniğin hayvan taşıma ve sigorta ihtiyaçlarını azaltmasıdır.

Başlangıç dönemi boyunca bir maddenin yerel olarak uygulanmasına devam edilmesi. Ek olarak, mikro dolgu alçılı damarların mikro BT görüntülemesi, mikro BT'nin tüm numune boyunca vaskülariteyi temsil eden gerçekten kantitatif ve hacimsel üç boyutlu bir analiz yapma yeteneği nedeniyle histolojik veya lazer dopper profüzyon görüntülemesine göre avantajlıdır. Steril teknik kullanarak, boş pompayı tartarak ve ağırlığını miligram cinsinden kaydederek başlayın.

Ardından, pompayı PBS ile yavaşça doldurmak için bir CC şırınga ve künt uçlu 27 gauge doldurma tüpü kullanın. PBS pompanın tepesine ulaştığında doldurmayı durdurun. Fazla çözeltiyi sildikten sonra, doldurulmuş pompayı tartın.

Ardından beyaz flanşı akıştan koparmak için bir çift forseps kullanın. Moderatör, bir P 50 kateteri ile moderatörün her iki ucundan üç ila dört milimetre tüp kapağını bükmemeye veya ezmemeye dikkat ederek. Şimdi kateteri doldurmak için bir şırınga kullanın ve moderatör şırıngayı kateterin distal kısmına bağlı bırakarak bırakın.

Akış moderatörünü pompaya yerleştirmeye başlayın. Kateter pompa yüzeyi ile aynı hizada olduğunda, şırıngayı kateterden çıkarın ve pompayı gece boyunca 37 santigrat derecede PBS'de inkübe edin. Ameliyat günü, tamamen sedasyona yatmış yüzüstü bir fareye göz merhemi uygulayın ve ardından hayvana sürekli bir flor akışı sağlayan takılı bir burun konisi yerleştirin Kesi bölgesine anestezik enjekte ettikten sonra, cilde bir povidon iyot çözeltisi ve ardından% 70 etanol uygulayın.

Daha sonra kürek kemiği bölgesinde omurganın yan tarafına dört ila altı milimetrelik bir kesi yapın. Deri altı zarını ayırmak için ince forseps kullanın. Daha sonra fareyi sırtüstü pozisyona getirdikten sonra, femoral arterin yolunu takip ederek diz üstünden medial uyluğa doğru 0,8 ila bir santimetrelik bir kesi yapmak için mikrocerrahi makas kullanın.

Ardından, gövdenin yan tarafını medial uyluktan sırttaki kesiye kadar tünellemek için küçük kılıf boru kullanın. Daha sonra, fareyi yüzüstü pozisyona getirdikten sonra, ana ozmotik pompanın kateterini kılıf borusundan uyluğa yönlendirin ve ardından pompayı hayvanın arkasına yerleştirin. Arka kesiyi altı oh prolen sütür ile kapatın.

Fareyi sırtüstü pozisyona getirdikten sonra, bir kez daha kılıf tüpünü çıkarın ve kateteri uyluk üzerindeki kesiden açıkta bırakın. Bacağı cerrahi bantla sabitleyin. Ardından, kesiği açmak için bir ekartör kullanın ve damar sistemini ortaya çıkarmak için deri altı yağ dokusunu ayırın.

Daha sonra membranöz femur kılıfını nazikçe delmek için ince sivri forseps kullanın. Aşırı kanamaya neden olmadan damar demetine erişmek için. Femoral arteri femoral ven ve kasıklara yakın sinirden dikkatlice inceleyin ve ayırın.

Daha sonra, profunda FMRI'ların ve epigastrik arterlerin orijinindeki femoral bifurkasyona iki ila üç milimetre proksimal, femoral arteri kesmek için iki sekiz oh prolene bitişik sütür yerleştirin. Şimdi kateteri uygun uzunlukta kesin. Ucu uyluğun anterolateral bölgesine yerleştirin ve ucu 6.0 prolen sütür ile yüzeysel fasyaya sabitleyin.

Görüntülemeye hazırlanmak için, anestezi uygulanmış fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve fare burun konisine bağlıyken hayvanın damar sisteminde pıhtılaşmayı önlemek için deri altına 0.2 cc 1000 IU heparin sodyum enjekte edin. Karın organlarını hayvanın sol tarafına hareket ettirdikten sonra göğüs boşluğunu ve alt karın bölgesini ortaya çıkaracak kadar büyük bir kesi yapın. Frarenal abdominal aortu ortaya çıkarmak için, aortu inferior vena kavadan dikkatlice ayırın.

Daha sonra, proksimal infrarenal abdominal aortu bağlayın ve damar üzerinde küçük bir kesi yapmak için iğne ucunu kullanın. Daha sonra bir P 10 kateterine bağlı 27 buçuk gauge künt bir iğneyi intrarenal abdominal aort içine yerleştirin ve iğneyi altı oh sütür ile sabitleyin. 27 buçuk gauge iğneyi sabitledikten sonra, sağ atriyumda bir kesi yapın ve ötenaziyi indüklemek ve fazla sıvının çıkmasına izin vermek için aşırı dozda flor uygulayın.

Şimdi, iğne ucuna heparinize salin dolu 20 cc'lik bir şırınga takın ve damar sistemini en az beş dakika yıkayın. Kızarma başladıktan sonra burun konisinin çıkarılması, Mikro dolgunun enjeksiyonu, prosedürün en zor adımıdır. Başarıyı sağlamak için, yelken ile perfüzyondan sonra tüm kanın damarlardan durulandığından emin olmak önemlidir, Şimdi katetere formalin dolu 20 cc'lik bir şırınga takın ve damarı beş dakika daha basınçla kontrol edin.

Son olarak, kabı mikro dolgu ile beş dakika boyunca yavaşça perfüze edin. Optimum kap dökümünü elde etmek için mikro dolgu uygularken tutarlı bir basınç uygulamaya dikkat edin. İsteğe bağlı olarak, bu noktada, yüz analizi üzerinde daha fazla bilgi için mikro dolgu dolu damar sistemini görüntülemek için cilt diseke edilebilir.

Kontrast maddenin polimerizasyonu için, hayvanı% 10 NBF ile doldurulmuş bir kaba koyun ve 24 saat sonra dört santigrat derecede saklayın. Alt abdominal aortun distalindeki cildi çıkarmak için diseksiyon araçlarını kullanın. NBF'yi yenileyin ve hayvanı oda sıcaklığında tekrar kabın içine koyun.

Dört gün sonra, kemik dekalsifikasyonunu kolaylaştırmak için kontralateral ve iskemik arka bacakları inceleyin. Numuneleri 48 saat boyunca bir formik asit çözeltisine yerleştirin ve ardından numuneleri bir saat boyunca akan su altında durulayın. Son olarak, örnekleri %10 NBF'ye geri getirin ve fron ve mikro bilgisayarlı tomografi görüntülemesine devam edin.

Bu ilk şekil, femoral arterin cerrahi ligasyonu ve öncesi kan perfüzyonunun temsili lazer doppler görüntülerini göstermektedir. Fare arka uzuv iskemisi, mikrodolgu ile vasküler döküm sonrası oklarla gösterildiği gibi sol arka bacakta iskemi oluşturuldu, Vasküler ağın 3 boyutlu mikro bilgisayarlı tomografi görüntüsü, mikro dolgunun damarları etkili bir şekilde doldurabildiğini göstermektedir. Bununla birlikte, hava kabarcıkları, basınç eksikliği veya mikro dolgunun viskozitesi gibi çeşitli prosedürel faktörler nedeniyle süreksizlikler meydana gelebilir, süreksizlik noktaları oklarla gösterilir.

Bu videoyu izledikten sonra, iskemi ameliyatından sonra bir farenin arka bacaklarına bir maddeyi stabil bir şekilde iletmek için astımlı bir pompanın nasıl kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız.