Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Bu prosedürün genel amacı, tutarlı bir sağkalım ve fonksiyonel olarak ölçülebilir derecede iskemi indüklemektir. Reperfüzyon, farelerde tek taraflı renal pedikül klemplemesi yapılarak akut böbrek hasarına neden oldu, ardından kontralateral nefrektomi iskemisi. Reperfüzyon yaralanması, dorsal bir insizyon yapılarak sol ve sağ renal pedikülün açığa çıkarılmasıyla sağlanır.

Buna renal arter ve ven dahildir. Daha sonra, böbreği çevreleyen dokudan serbest bıraktıktan sonra kontralateral nefrektomi yapılır. Daha sonra sol renal pedikül vasküler bir klemp kullanılarak klemplenir ve böbrek cilt ile kaplanır.

Son olarak, önceden belirlenmiş bir süre sonra, kelepçe serbest bırakılır, böbreğin yeniden perfüze olmasına izin verilir ve böbrek retroperitoneal boşluğa geri itilir. Sonuç olarak, böbrek hasarının fonksiyonel analizi, kontralateral böbrek iskemisinin çıkarılmasından 24 saat sonra enzimatik kaskad testi kullanılarak serum kreatinin seviyelerinin analizi yoluyla gerçekleştirilebilir. Reperfüzyon hasarı, akut böbrek hasarının mekanizmalarını ve tedavisini incelemek için yaygın olarak kullanılan bir modeldir.

Tekniğin kendisi nispeten basittir, ancak birçok laboratuvarla sonuçlanan, tekniğin yüksek mortalite ile yeniden üretilmesinin zor olduğu ve ayrıca günde yalnızca beş ila 10 ameliyat oluşturabilen bireylerle nispeten düşük verim bulan bir dizi değişken vardır. Tekniği daha sonra size sunacak olan Dr. Skrinick, laboratuvarımızda tekniği geliştirmek için birkaç yıl harcadı ve düşük mortalite ve nispeten yüksek verim ile çok daha tekrarlanabilir olduğunu bulduğumuz bir protokol geliştirdi. İyi bir günde, NA ameliyata hazırlanmak için günde 40 ila 50 ameliyat yapabilir.

Birden fazla fare için kullanılacaksa tüm cerrahi aletleri otoklavlayın, prosedürler arasında sıcak boncuk sterilizatörü kullanarak tedavi edin. Bir su banyosu sistemi kullanıyorsanız, ameliyattan bir saat önce ısıyı 38 santigrat dereceye ayarlayın, fareyi tartın ve ardından 0,5 mililitre steril normal salin deri altı enjeksiyonu uygulayın. İntraperitoneal alain enjeksiyonu, ketamin karışımı kullanarak bir fareyi uyuşturduktan sonra, cerrahi alanı tıraş edin ve fare kornealarını korumak için oftalmik merhem uygulayın.

Fareyi yüzüstü pozisyonda, emici bir tezgah pedi ile kaplı ısıtılmış bir yüzeye aktarın ve Betadine solüsyonu kullanarak bacakları cerrahi yüzeye bantlayın. Sitenin merkezinden çevreye doğru fırçalayın, ardından novacan'ı toplam üç kez fırçalayın. Cerrahi alanı steril cerrahi örtü ile örtün.

Daha sonra, böbrek bölgesini deriden palpe edin. Daha sonra sırt derisini farenin orta hattı boyunca makas ve forseps ile kesin. Kesi yoluyla sol ve sağ sırt taraflarındaki deri ve deri altı katmanlarını ayırın.

Sağ böbreğin üzerindeki sağ yan kas ve fasyadan küçük bir kesi yapın ve dıştan çıkarın, böbreğin üst ve alt kutuplarını çevreleyen dokudan dikkatlice inceleyin. Böbreküstü bezi ayrıca medialden laterale doğru bir süpürme hareketi kullanılarak dokuyu künt forsepslerle nazikçe ayırarak kan beslemesi ile birlikte sağ böbreğin üst kutbundan nazikçe çıkarılır. Bunu video ile göstermek biraz zor, ancak anlaşılabilir.

Şekil bir'de gösterilen kan kaynağı ile adrenal bezin anatomisine bakarak, ardından dört oh ipek sütür kullanarak, hilusun etrafına çift cerrahi bir düğüm atın. Sütürün bir ucunu yaklaşık iki inç uzunluğunda bırakın ve düğümün distalini keserken kesilen bölgeyi görselleştirmek için böbreği tutmak için kullanın. Kütüğü sulamak için steril tuzlu su kullanın.

Daha sonra emilebilir dikiş ile sol tarafa doğru hareket eden kas tabakasını kapatın. Sol böbreğin üzerindeki sol yan kas ve fasyadan küçük bir kesi yapın ve künt forseps ile dışını kapatın. İkinci bir forseps seti ile renal pedikülü çevredeki yağ dokusundan serbest bırakırken böbreği dikkatlice tutun.

Böbrek hasarına neden olabilecek böbreğe çok fazla baskı uygulamamaya özen gösterin. Deneylerinize sahte olarak çalıştırılan kontrolleri dahil ediyorsanız, sahte ameliyatlı fareler, renal pedikülün çevredeki yağdan serbest bırakılması da dahil olmak üzere, yaralı farelerle tamamen aynı prosedürlere tabi tutulmalıdır, ancak vasküler kelepçe renal pedikül üzerine yerleştirilmez. Daha sonra, böbrek stopaj forsepslerini stabilize ederken, sol renal pedikülü klemplemek için travmatik olmayan bir vasküler klemp kullanın, klempleme süreleri, fare suşuna ve klemp hala yerindeyken gereken yaralanmanın ciddiyetine bağlı olarak değişecektir.

Sol böbreği deri ile örtün ve ardından cilt kesisini kapatmak için tuzlu suya batırılmış steril gazlı bez kullanın. Ardından, istenen süre sonra cerrahi alanı korumak için fareyi steril bir örtü ile örtün, böbreği açığa çıkarın. Düzgün bir koyu görünüme sahip olup olmadığını kontrol edin ve ardından kelepçeyi serbest bırakın.

Reperfüzyonu takiben böbreğin hızlı ve düzgün bir şekilde pembe bir görünüm alması gerekir. Böbreği yavaşça retroperitoneal boşluğa geri itin. Daha sonra, kas tabakasını emilebilir sütür ile kapatın ve cildi klipslerle kapatın, gram başına 0.05 mikrogram buprenorfin analjezi ve deri altına 0.5 mililitre steril normal salin uygulayın.

Ardından fareyi bir ısıtma yastığına aktarın ve beşe kadar hayvan odasına aktarmadan önce uyanmasına izin verin. Fareler ameliyattan sonra her kafese yerleştirilebilir, fareyi yakından izleyebilir ve elimizdeki ağrı veya rahatsızlık için her sekiz ila 12 saatte bir gerektiğinde ek analjezi uygulayabilir. Eş zamanlı kontralateral nefrektomi ile birlikte tek taraflı IR yaralanması, bilateral IR yaralanması ile karşılaştırıldığında sonuçların değişkenliğini önemli ölçüde azaltır.

Bu prosedürle, farelerin% 50 ila 60'ı, yaralanmadan sonraki 24 saat içinde beklenen böbrek yetmezliğini geliştirir. Pratik açıdan, bu, kalan fareler ya çok az yaralanma geliştirdiğinden ya da çok daha ciddi yaralanmalara sahip olduğundan, bu modeli kullanırken hala önemli bir değişkenlik olduğu anlamına gelir. Amaçlarımız doğrultusunda, bu sorunu en aza indirebiliyoruz.

Çünkü kullandığımız tedavi grupları genellikle ilk yaralanmadan 24 saat veya daha uzun bir süre sonra başlatılır. Bu şekilde, fareler 24 saatlik zaman noktası kreatinin elde edildikten sonra farklı tedavi uzuvlarına randomize edilebilir. Kreatinin değerleri önceden belirlenmiş bir aralığın dışında olan fareler bu noktada daha fazla çalışmadan hariç tutulmuştur.

Orta derecede yaralanma için, genellikle desilitre başına 0.8 ila 1.2 miligram aralığının dışında serum kreatinin değerleri olan fareleri hariç tutarız. Eş zamanlı kontralateral nefrektomi ile tek taraflı IR yapmanın yanı sıra, tek taraflı IR tek başına yapmaktayız. Fareler çok daha uzun iskemi dönemlerinde hayatta kalabilir ve yaralanma sonrası daha şiddetli fibroz geliştirme eğilimindedir.

Bununla birlikte, bu modelde tek taraflı IR yaralanması ile fonksiyonel iyileşmeyi değerlendirmek zor olduğundan, böbrek dokuları alınmadan yaralanmanın ciddiyetini değerlendirmenin bir yolu yoktur ve bu, daha uzun süreli çalışmalar için mümkün olmayabilir. Bu nedenle, orijinal yaralanmadan sekiz gün sonra kontralateral nefrektomi yaparak ciddi tek taraflı IR yaralanmasını indüklemek ve renal fonksiyonel iyileşmeyi değerlendirmek için bir protokol geliştirdik. Bu yaklaşımı kullanarak, farelerin% 90 ila 100'ü yaralanmadan kurtulur, ancak daha da önemlisi, fareler çok tutarlı böbrek hasarı geliştirdi ve dokuzuncu günden itibaren akut böbrek hasarını takiben fonksiyonel iyileşme açısından değerlendirilebilir.

Böbrek hasarının tutarlılığı ve öngörülebilirliği, ameliyat sırasında gerçekleştirilen adımların tutarlılığına ve hassasiyetine büyük ölçüde bağlıdır. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik 35 ila 40 dakika içinde yapılabilir ve bir seferde beş ila 10 mil arasında aynı anda gerçekleştirilebilir. Bu yöntemi günde 40 ila 50 mil arasında çalışmak için kullandık, bu yüzden keyfini çıkarın ve iyi şanslar.