Fare meme bezi Lokalize İlaç Teslim Intradüktal Enjeksiyon

Fare meme bezi sulu reaktiflerin non-invazif intraduktal teslimat için bir protokol tarif edilmektedir. Bu yöntem, özellikle meme kanalları hedef meme bezlerinin meme lokalize enjeksiyon yararlanır. Bu teknik, siRNA, kemoterapötik maddeler ve küçük moleküller de dahil olmak üzere çeşitli bileşikler için uyarlanabilir.

Bu prosedürün genel amacı, sulu reaktifleri fare meme bezine non-invaziv olarak vermektir. Ön. Bu, önce fareyi uyuşturarak ve meme uçlarını çevreleyen tüyleri alarak gerçekleştirilir. İkinci adım, mikro cımbız kullanarak meme uçlarının ucunu kaplayan ölü derinin çıkarılmasıdır.

Daha sonra, 33 gauge iğne kullanılarak meme ucuna sulu bir çözelti enjekte edilir. Son adım, enjeksiyon bölgesini potansiyel şişlik açısından gözlemleyerek enjeksiyonun başarılı olduğundan emin olmaktır, bu da meme bezine enjeksiyon yerine meme yağ yastığı enjeksiyonunu önerecektir. Sonuç olarak, prosedürün başarısı, Evans mavisi enjeksiyonunu takiben sünek ağacın görselleştirilmesi ile belirlenebilir.

Bu yöntem, hafıza tümörünün çeşitli aşamalarında belirli genlerin katkısı gibi meme kanseri alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Başlamak için, enjeksiyondan önce enjekte edilecek her fare için steril fosfat tamponlu salin içinde 160 mikrolitre% 0.2 Evans mavi boya hazırlayın. Her fareyi tartın ve vücut ağırlığını kaydedin.

Ardından, bir flor odası kullanarak fareyi birer birer uyuşturun ve göz kayganlaştırıcı uygulayın. Sakinleştirildikten sonra, bir isof flor burnu yerleştirin ve işlemden önce deri altına kilogram başına beş ila 10 miligram meloksikam enjekte edin İşlem sırasında bir analjezik olarak, fareyi solunum hızındaki değişiklikler açısından sürekli olarak izleyin ve özellikle farenin solunum hızı anestezi seviyesinin azaltılması gerektiğini gösteriyorsa, flor seviyesini buna göre ayarlayın. Ardından, reçetesiz satılan bir tüy dökücü krem uygulayarak meme ucu bölgesini enjeksiyona hazırlayın.

Beş dakika bekleyin ve ardından gevşek saçları pamuk uçlu aplikatör ile nazikçe çıkarın. Dairesel hareketlerle, ılık suyla karıştırılmış nemli kağıt havlu kullanarak kalan kremayı çıkarın. Ardından, ekstremiteleri nazikçe bantlayarak fareyi stereoskopun altına sabitleyin ve enjeksiyon bölgelerini alkollü çubuklarla temizleyin.

Başlamak için, stereoskopun altına enjekte edilecek meme uçlarını bulun. Ardından, meme ucu açıklığını kaplayan ölü deriyi çıkarmak için ince mikro diseksiyon cımbızı kullanın. Enjeksiyon için meme ucunun kesilmesine gerek yoktur.

Daha sonra, 11 mikrolitre enjeksiyon solüsyonunu, üzerine yapıştırılmış 33 gauge metal göbek iğnesi ile donatılmış 50 mikrolitrelik bir şırıngaya yükleyin. Enjeksiyon sıvısının bir mikrolitresi genellikle enjeksiyondan sonra sızar ve bu da başarılı bir şekilde enjekte edilen 10 mikrolitre çözeltinin nihai hedefine neden olur. Meme ucunu ince cımbızla nazikçe tutun ve enjeksiyon için konumlandırmak için hafifçe kaldırın.

Daha sonra, bezin sünek ağacını tamamen doldurmak için orta çiftlerden daha düşük hacim gerektirdiğinden, meme bezlerinin ilk ve son çiftlerindeki her beze 11 mikrolitre enjekte edin. Daha sonra, ikinci ila dördüncü meme bezi çiftlerindeki her bir beze 21 mikrolitre enjekte edin. Duktal lümenler içinde hızla hareket eden sıvının neden olduğu olası hasarı en aza indirmek için enjeksiyon hızı dakikada yaklaşık 40 mikrolitrede tutulmalıdır.

Enjeksiyonu takiben. Enjeksiyon bölgesini gözlemleyin. Meme başı bölgesinde veya çevre dokuda herhangi bir travma belirtisi olmamalıdır.

Meme ucunu çevreleyen bölgede şişlik. Muhtemelen, duktal enjeksiyonda başarılı bir durumdan ziyade meme yağ yastığı enjeksiyonunu gösterir. Daha sonra hayvanı burun konisinden çıkarın ve iyileşmesi için ayrı bir kafese taşıyın.

Hipotermiyi önlemek ve iyileşmeye yardımcı olmak için kafesi bir ısı lambasının altına yerleştirin. Hayvanı tek başına barındırın ve bilinçlerini ve hareketliliklerini yeniden kazanana kadar onları yakından izleyin. Çalışmanın tamamlanmasının ardından, izole edilmiş bir odada CO2 sıkıştırılmış gazı takiben fareleri servikal çıkık ile ötenazi yapın.

Daha sonra meme bezlerini eksize edin ve ilgilenilen analiz için uygun numune işlemine devam edin. Burada gösterilen, Evan'ın Mavi Boyası ile meme ucundan enjekte edilmeden önce ve sonra bir farenin meme bezidir. Meme başı bölgesi, boyanın kanalları çevreleyen yağ yastığına enjekte edilmesiyle oluşacak şişlik veya doku hasarı göstermez.

Sağdaki resimde görülen dağınık mavi boya, doğru bir enjeksiyonun iyi bir göstergesidir. Bu, bezin eksizyonunu takiben tüm beze veya bir kesite bakılarak doğrulanabilir. Burada gösterilen tüm montaj analizinde, Evans mavisi enjekte edilen bez, yerli ördek yapılarına zarar vermeden boya ile dolu tüm bezi gösterir.

Bu, sünek yapıları da vurgulayan Carmen Boya ile doğrulanır. Bu yöntemin, irna gibi terapötik moleküllerin duktal hücrelere verilmesi için de kullanılması mümkündür. Burada gösterilen görüntüde, orak fillini hedef alan floresan etiketli bir irna, esansiyel olmayan bir gen enjekte edildi ve daha sonra moleküllerin lokalizasyonunu göstermek için doku 48 saat sonra görüntülendi.

Bu prosedürü takiben. SRNA yıkımı gibi diğer yöntemler, belirli bir genin hafıza gelişimi veya tümör oluşumundaki rolü ile ilgili ek soruları yanıtlamak için gerçekleştirilebilir.