Aile Bakıcıları Aracılığıyla Yaşlı Yetişkinlerde Yaşayan Kırılgan Toplulukta Tükürük Toplama ve Tükürük Kortizol ve Alfa-amilazın Ölçülmesi

Bu prosedürün genel amacı, toplumda yaşayan, tıbbi olarak zayıf bir popülasyonda tükürük biyo önlemlerinin toplanmasını ve analizini göstermektir. Bu, önce gerekli tükürük toplama malzemelerinin bir araya getirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, ev ziyaretini düzenlemek, malzemeleri sağlamak ve tükürük toplama prosedürlerini bakıcıya göstermektir.

Ardından, yazılı talimatlar verin ve tüm soruları yanıtlayın. Son adım, tükürük örneklerini laboratuvara geri göndermek ve tahlil prosedürlerini yürütmektir. Sonuç olarak, protokol, toplumda ikamet eden tıbbi olarak zayıf hastalarda tükürük alfa amilaz ve tükürük kortizol konsantrasyonlarının günlük profilini ölçmek için tasarlanmıştır.

Bu yöntem, stresle ilgili süreçler etrafındaki biyolojik duyarlılık ve duyarlılık anlayışımızı geliştirmek için biyodavranışsal araştırma alanlarındaki temel soruları cevaplayacaktır. Katılımcılar, rıza gösterilen bir ev ziyareti planlamadan önce, dört psikometri çocuk sürüntüsü, dört sürüntü saklama tüpü, dört renk kodlu tüp kapağı, beş beyaz etiket, bir plastik Ziploc torba, bir tükürük toplama talimat sayfası, beş nitro eldiven ve bir saklama kutusu içeren gerekli malzemeleri toplar ve bir araya getirir. Nitro eldivenli bir el kullanarak, dört Salome çocuk swabını dört swab saklama tüpüne yerleştirin ve sırasıyla sarı, turuncu, mavi ve mor renkli kapaklarla kapatın.

Ardından, toplama zamanını belirtmek için her bir saklama tüpüne bir etiket yerleştirin. Dört kapaklı saklama tüpünü, tükürük toplama talimat sayfasını ve dört nitro eldiveni Ziploc torbaya yerleştirin ve konu kimliği ve toplama tarihi ile etiketleyin. Bu programı takiben, daha önce izin verilen deneklere ve tükürük örneklemesinden bir gün önce kısa bir ev ziyareti.

Deneğin evine vardıktan sonra, tükürük toplayıcısına plastik torba dolusu malzeme ve talimat sayfasını verin. Talimat sayfasını gözden geçirin ve yazılı talimatları vurgulayarak tükürük toplamanın başlangıç ve bitiş zamanlarını kaydetme ihtiyacını vurgulayın. Katılımcı tarafından son 48 saat içinde alınan tüm reçeteli ve reçetesiz satılan ilaçların adını, dozajını ve programını kaydedin.

Tükürük toplayıcıya veya SC'ye baskın ele nitro eldiven uygulaması talimatını verin. Katılımcıya, tükürüğün ağzının zemininde birikmesine izin vermek için başını öne eğmesini söyleyin. Bunu takiben, SC'ye sürüntü saklama tüpünün kapağını açması ve oral sürüntüyü alması talimatını verin.

SC'ye, birikmiş tükürüğün yaklaşık üç damlasını emmek için oral swabı yaşlı yetişkinin dilinin ön kısmına yerleştirmesini ve doymuş olduğundan emin olmak için oral swabı iki dakika yerinde tutmasını söyleyin, SC'nin doymuş oral swabı swab saklama tüpünün sepetine geri döndürmesini sağlayın, ve kapağı değiştirin. Ardından, SC'nin tüpü hemen saklama kutusuna yerleştirmesini ve bir dondurucuya koymasını sağlayın. Eldiveni çöp kutusuna attıktan sonra, SC'ye tükürük talimat sayfasına başlama ve durma zamanlarını kaydetmesini tavsiye edin.

Daha sonra, SC'ye ertesi gün dört kez tükürük örnekleri toplayacaklarını bildirin, özellikle sabah ortası ve akşam uyandıktan 30 dakika sonra uyandığında, SC'nin hastaya tükürük toplamadan 10 dakika önce ağzını suyla çalkalamasını söylemesini sağlayın. Tükürük toplandıktan sonra, gözle görülür şekilde kanla kontamine olmuş örnekleri atın. SC'ye, tükürük örneklerinin çalışma ekibi tarafından alınana kadar dondurucuda kalması gerektiğini söyleyin.

Dondurulmuş örnekleri almak için bir saat ve gün planlayacaklarını ve gelecekteki herhangi bir toplama tarihi için yeni tükürük toplama malzemeleri getireceklerini doğrulamak için çalışma ekibini arayın. Numuneler deneğin dondurucusundan çıkarıldıktan sonra, laboratuvara taşınması sırasında yalıtımlı bir dondurucu poşetine koyarak donmuş halde saklayın. Laboratuvara vardığınızda, her tüpün üzerindeki beyaz etiketi sıralı bir barkodla değiştirin.

Sıralı barkodun konu kimliği, toplama tarihi ve toplama saati ile eşleşip eşleşmediğini kontrol edin. Daha sonra müsini çökeltmek için tükürük örneklerini eksi 20 santigrat derece dondurucuya geri koyun. Tükürük örnekleri çözüldükten sonra, örnekleri 15 dakika boyunca yerçekiminin 1500 katı sıcaklıkta santrifüj edin.

Tükürük tahlil kiti reaktifleri yaklaşık 90 dakika oda sıcaklığında kaldıktan sonra, kit talimatlarına göre yıkama tamponunu hazırlayın, standart kontrollerden 25 mikrolitre pipetleyin ve numuneleri 96 oyuklu bir plakanın uygun kuyucuklarına pipetleyin. Bu pipeti takiben, önceden hazırlanmış bir enzim konjugat çözeltisinden 200 mikrolitre kuyucuklara yerleştirilir. Plakayı 500 RPM'de beş dakika boyunca bir döndürücü üzerine yerleştirerek numuneleri karıştırın.

Numuneleri oda sıcaklığında 55 dakika inkübe ettikten sonra, plakayı dört kez yıkayın ve yıkama tamponu ile kurulayın. Sonra 200 mikrolitre tetraetil benzin veya TMB çözeltisi ekleyin. Numuneler beş dakika karıştırıldıktan sonra.

500 RPM'de plakayı alüminyum folyo ile örtün ve karanlıkta 25 dakika daha inkübe edin. Bittiğinde, 50 mikrolitre durdurma çözeltisi ekleyin ve numuneleri 500 RPM'de üç dakika karıştırın. Durdurma solüsyonunu ekledikten sonraki 10 dakika içinde, plakanın altını silin ve plakayı 450 nanometrede bir plaka okuyucu ile okuyun.

Ardından, ortalama optik yoğunluğu kullanarak kortizol konsantrasyonunu hesaplayın. Spesifik olmayan bağlama kuyularındaki ortalama optik yoğunluğu, sıfır standart kontrol ve numune kuyucuklarındaki ortalama optik yoğunluktan çıkarın. Son olarak, lojistik yeteneğine sahip bir yazılım kullanarak kontrollerin ve bilinmeyenlerin konsantrasyonlarını tahmin edin.

Açıklanan prosedürler, tükürük, alfa amilaz ve tükürük kortizol konsantrasyonlarının günlük profilini ölçmek için tasarlanmıştır. Kortizol sonuçlarının pozitif olarak çarpık olduğu gösterildiğinden, normal bir dağılım elde etmek için verilere log dönüşümünün kullanılması önerilmektedir. Kortizol ve alfa amilazın günlük ritimlerindeki farklılıkları modellemek için çeşitli stratejiler mevcuttur.

İlk strateji, uyanma ile uyanmadan sonraki 30 dakika arasında alfa amilaz veya kortizolün günlük değişimini çizmektir. İkinci strateji, bir gün boyunca toplam kortizol veya alfa amilaz konsantrasyonunu çizmektir. Elde edilen özet parametreler, yanıtın büyüklüğünün ölçüsü veya zaman içindeki yanıt modelinin ölçümleri olmak üzere iki genel kategoride gruplandırılabilir.

Büyüme eğrisi modellemesi, gün boyunca bireylerde birden fazla örneğin toplandığı çalışmalar için yararlı olabilir. Bireysel veya ölçüm düzeyinde öngörücüler eklenerek günlük döngüde bireysel farklılıklara izin vermek için bir büyüme eğrisi takılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, tükürüğün nasıl toplanacağını ve bakıcılara ev ortamında yaşlı yetişkinlerimiz için tıbbi olarak tükürük toplamayı nasıl öğreteceğinizi iyi anlamalı ve uygulanabilir, yüksek uyumluluğa sahip ve kaliteli örnekler veren tükürük analitlerinin laboratuvar analizinin nasıl yapılacağını iyi anlamalısınız.