İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Aşağıdaki deneyin genel amacı, insan prostat kanserinin bir fare modelinde birincil tümör boyutunu, akciğer metastaz oluşumunu ve dolaşımdaki tümör hücrelerinin sayısını ölçmektir. Bu, insan prostat kanseri hücrelerinin bir babsi athymic farenin prostatının ventral lobuna doğrudan implantasyonu ile elde edilir. Tümörler geliştikten sonra, femurlar ve kalp kanı hayvandan çıkarılır ve dolaşımdaki tümör hücrelerinin tanımlanmasına izin verilir.

Son olarak, primer tümörler ve akciğerler analiz için çıkarılır. Sonuç olarak, primer tümör boyutu, ağırlığı ve moleküler özelliklerindeki değişikliklerin yanı sıra akciğer metastazı oluşumu da ölçülebilir. Bu tekniğin kuyruk damarı veya interkardiyak enjeksiyon gibi diğer tekniklere göre en büyük avantajı, bu teknikle, metastazın tam kapsamının, primer tümör ekstravazasyonunun oluşumundan ve kan dolaşımında sağkalımdan ve yeni bir bölgede ikincil bir metastazın gelişi ve oluşumundan ölçülebilmesidir.

Bu tekniğin sonuçları, insan prostat kanseri metastazının tedavisi ile ilgilidir. Bu modeli, insan prostat kanseri metastazını inhibe etmede birkaç küçük molekül terapötiğinin etkilerini test etmek için kullandık. Ek olarak, model, insan prostat kanseri metastazını inhibe etmek için potansiyel terapötik hedefleri doğrulamak için kullanılabilir Anestezi uygulanmış altı ila sekiz haftalık bir atimik bopsy faresinin alt karın bölgesini ovalamak için steril pamuk topları ve Betadine kullanarak başlayın.

Daha sonra, bölgeyi alkollü bir mendille temizleyin ve ardından hayvanı bir Betadine solüsyonu ile silin. Alanın kurumasına izin verdikten sonra, üç ila dört milimetre düşük orta hat karın kesisi yapmak için bir çift keskinleştirilmiş steril cerrahi makas kullanın. Ardından, başka herhangi bir organı veya kası hareket ettirmeden mesaneyi nazikçe kaldırmak için forseps kullanın ve doğrudan mesanenin altında bulunan prostatın ventral lobunu tanımlayın.

Şimdi, ilgilenilen tümör hücresi popülasyonunu 28 buçuk gauge iğne ile donatılmış 0.5 cc'lik bir şırınga ile ventral prostat bezine enjekte edin, sızıntıyı en aza indirin ve doku içinde küçük bir baloncuğun gözlenmesini sağlayın. Daha sonra mesaneyi değiştirin ve kas tabakasını basit bir kesintili düzende kapatmak için 4.0 emilebilir Vicryl monofilament sütürler kullanın. Cilt tabakasını steril dokuz milimetrelik zımbalarla kapatın.

Dört ila altı hafta sonra, tümörler görsel olarak belirgindir veya ötenazi sonrası palpe edilebilir. Doğrudan göğüs kafesinin altında yatay olarak kesmek için bir çift cerrahi makas kullanın, daha sonra kalbi ortaya çıkarmak için koltuk altına dikey olarak kesin, cerrahi makas kullanarak terminal kardiyak ponksiyon kullanarak hayvandan kanı alın, trakeayı kesin ve ardından akciğerleri çıkarın ve akciğerleri hemen bir doku kasetine ve ardından %10 formalin içeren bir kaba yerleştirin. Daha sonra, tek tek birincil prostat tümörüne bağlı herhangi bir kan damarını kesin, ek organların bağlı olmadığından emin olmak için dikkatli olun, tümörün ağırlığını ve boyutunu kaydedin.

Daha sonra hemen çekin, dokuyu sıvı nitrojen içinde dondurun veya dokuyu bir doku kasetine yerleştirin ve ardından% 10 formin içeren bir kaba koyun. Son olarak, kalça ve diz eklemlerini ortaya çıkarmak için bir çift cerrahi makas kullanın. Ardından, steril tuzlu suya yerleştirmeden önce uyluk kemiğini sağlam tutmaya dikkat ederek bacakları ayırın.

Bu ilk şekilde, tümör aşılamasından altı hafta sonra farelerin vücut ağırlığındaki ve gıda tüketimindeki değişiklikler gösterilmiştir. Anestezi nedeniyle ameliyat tarihi civarında vücut ağırlığında ve gıda tüketiminde küçük bir düşüş olduğunu unutmayın. Deney süresince, vücut ağırlığı ve gıda tüketimi ameliyat sonrası yavaş yavaş artar ve deneyin sonuna doğru azalmaya başlar.

Bu grafiklerde tümör yükü kritik bir seviyeye ulaştığında temsili tümör boyutları gösterilir. Bireysel tümör boyutları değişir, ancak ortalama olarak, yaklaşık bir gram ağırlığında ve bir santimetre küp büyüklüğünde tümörler gösterildiği gibi elde edilir. Burada, dört ila altı hafta arasında meydana gelen tümör ağırlığı ve tümör boyutundaki değişiklikleri dikkate almak önemlidir.

Son iki hafta boyunca bu temsili deneyde deneyin son noktasını planlarken, ortalama tümör ağırlığı 2.7 kat arttı ve tümör boyutu 1.9 kat dramatik bir şekilde büyüdü. Deneysel sonuçları etkileyen, akciğer ve fare başına toplam metastatik hücrelerdeki değişiklikler, bu grafikte gösterildiği gibi dört ila altı haftada nekropsi gözlemlenebilir. Dört haftada feda edilen fareler metastatik gelişme göstermezken, tümör aşılamasından altı hafta sonra fareler tüm farelerde metastatik hücreler gösterdi.

Metastaz meydana geldiğinden emin olmak için fare nekropsilerinin geç evre son noktada yapılmasının önemini daha da vurguladı. Bu süreler hücre hattına veya gen modifikasyonlarına göre değişebilir. Metastaz sayısı üç farklı şekilde ölçülebilir.

Örneğin, GFP pozitif insan prostat kanseri hücrelerinin toplam sayısı, GFP için immünohistokimyasal boyama kullanılarak veya 40 x büyüklüğündeki tek bir hücrenin bir okla vurgulandığı bu görüntülerde olduğu gibi h ve e boyama kullanılarak basitçe sayılabilir. GFP lekeli akciğer bölümündeki kahverengi lekelenmeye ve büyük belirgin çekirdeklere dikkat edin. Metastaz sayısını ölçmenin bir başka yolu, metastatik birikintilerin bulunduğu yerlerin sayısını dikkate almaktır.

Örneğin, 10 x büyüklüğündeki bu görüntüde, her biri bir okla vurgulanan farklı hücre numaralarına sahip birkaç lokus bu artan büyüklükteki görüntüde gözlemlenebilir, üç farklı hücreye sahip bir lokus da vurgulanır. Son olarak, beş veya daha fazla GFP pozitif insan prostat kanseri hücresi gösteren açıkça bağlı bir hücre grubu tarafından tanımlanan farklı metastazların sayısı, bu son üç grafikte 10 hücrelik bir metastatik birikintinin gösterildiği bu görüntüde olduğu gibi ölçülebilir, metastatik progresyon matrisi metalloproteinaz tip ikide ilgilenilen üç genin ekspresyonunu ölçen temsili QR TPCR R deneyleri, Altı haftada farelerden toplanan bireysel tümör örneklerinde matriks metalloproteinaz tip dokuz ve ısı şoku proteini 27 gösterilmiştir. Bu tekniği ilk geliştirirken, anesteziyi, ağrı kesici ilaçları uygun şekilde uygulamak ve cerrahi baskıyı en aza indirmek için hayvan tesisiniz ve veteriner personelinizle birlikte çalışmak önemlidir.