Name: Sağlam Yetişkin Zebra balığı Beyin Elektrofizyolojik Kayıt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Öğrenin, sağlam yetişkin Danio rerio beyinlerinde in vivo elektrofizyolojik kayıt yöntemini. İmmobilizasyon, entübasyon ve kraniyotomi adımlarıyla sinir aktivitesini gerçek zamanlı izleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma (TMD, JDL ve ATS) NIH / NINDS Grant R01NS070159 tarafından desteklenmiştir.

Tüm deneysel prosedürleri Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Sağlık Rehberi, Ulusal Enstitüleri ile sıkı göre yapılan ve gözden onaylanmış ve Gürcistan Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Üniversitesi tarafından denetlenecektir protokol # A2011 09-003, takip edildi Komite. 1.. Ekipman Kurulumu <ol><li> Kraniotomi için perfüzyon sistemi Yetişkin immobilizasyon balık çözünmüş oksijen sağlamak için entübasyon sistemi gerektirir. Sistemleri çeşitli kullanılabilir, ancak bir 60 ml şırınganın oluşan basit bir yerçekimi sistemi kullanılır. Sürekli ~ 1 ml / dk &#39;lık bir akış hızı veren bir yüksekliğe basınç başım yükseltmek. Bu, daha sonra şırınga elektrofizyolojik perfüzyon sistemine için kullanılan şırınga ile seri halde yerleştirilebilir. <ol><li> Tek bir 60 ml Luer lock şırınga tüpünü alın ve pistonu çıkarın. </li><li> Yaklaşık 8 ve en şırınga Askıda# 160; kelepçeyi kullanarak bir halka-stand tabanı yukarıda. </li><li> Şırınganın ucuna bir tek yollu valf bağlayın. Vana ters amaçla, entübasyon tabanına genişletmek için yeterince uzun olan bir boru parça, çapı 2 mm, bağlayın. </li></ol></li><li> Elektrofizyoloji için perfüzyon sistemi Elektrofizyolojik deneyler için, bir deney sırasında çeşitli bileşikler tanıtmak için çoğu zaman gereklidir. Çeşitli sistemler mevcuttur, ancak seri olarak 60 ml şırınga oluşan bir ağırlık sistemi kullanılabilir. Bu kurulum gelen musluğunu açarak yapılacak çözümler basit, seri giriş için izin verir. <ol><li> Iki veya daha fazla 60 ml Luer lock şırınga elde ve her gelen Plenserleri çıkarın. Bir sonraki her bir şırınga tüp Balıklara farmakolojik çeşitli bileşikler yönetmek için kullanılabilir iken Balıklara yaşam su verilmesi için gereklidir. </li><li> Bir 3&#39;e her şırınga bağlayın -şekilde bir Luer bağlantı nolu kesme vanasına. </li><li> Bir ucunda bir erkek Luer kilidi ile seri bağlamak için şırınga dış çap (OD) boru içinde ⅛ kullanın. </li><li> Basınçlı bir baz içinde 27 üzerinde bir yüksekliğe ya da sürekli ~ 1 ml / dk &#39;lık bir akış hızı veren bir yüksekliğe kadar yükseltilmiş şekildedir cihazı elde edin. </li></ol></li><li> Entübasyon kanül Entübasyon kanül balık sıvının giriş kolaylaştırır. Bu kurulum iyi konumda, hayvanın ağzı içinde kanül esneklik ve sertlik hem de sağlar. <ol><li> Makas her genel çiftini (örneğin. Fiskars) veya jilet kullanarak, bir P-200 pipet geniş ucundan 1,5 cm bölümü çıkarın. </li><li> Bir Tuohy Borst adaptörü örneğin bir dişi Luer kilit kap ve silikon yüksük ile bir indirgeme valf içine bir boru 6 cm x 1 mm parça yerleştirin ve modifiye edilmiş pipet içine bu kanül yerleştirin. Luer l pozisyonunda pipet tutunçaplı boru içinde ⅛ kısa bir kısmını kullanarak ock. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51065/51065fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51065/51065fig1.jpg" /> Şekil 1 </li></ol></li><li> Entübasyon baz Bu yemek stabil, dik bir konumda hareketsiz tutmak için hayvan ve entübasyon yoluyla hayvan giren sıvının çıkarılmasını kolaylaştırmak için kullanılır. Bu doğru bir şekilde kurulmuş ise, havuzlama elektrofizyolojik kayıt müdahaleci titreşim sinyalleri yol oluşabilir. <ol><li> Bir 100 mm x 15 mm plastik Petri çanağı taban çanak elde edilir. </li><li> Bir lehim aleti kullanarak, çanağın yan içine bir delik çapı 6 mm ve jantın dudak altında 7.5 mm, erime. Aynı aracı kullanarak, bir delik, 10 mm çapında ve çanak dudak altında 11 mm ~ 74 ° saat yönünün tersine eritebilir<html> küçük delik. Bu delik drenaj deliği olarak görev yapacak. </li><li> Bir tüp takın, ucu deliğin içine 1 cm çapında, uç bloke edilemez şekilde kaldırdı. Sonra küçük deliğe bir P-200 pipetteman ucu takın, bu bir kukla kanül olarak hizmet verecek. </li><li> Hafifçe daha büyük bir deliğin tarafında yükseltilmiş Petri kabı ile, kanül delik sadece kapalı olduğundan bu çanak içine erimiş mum konserve dökün. Bu bölge, kanül balığın ağzına ~ 3 mm eklenir sağlayan bir durak olarak hizmet edecektir. Bu set up katılaşmaya izin verilmelidir. </li><li> Alevle ısıtılan metal kenar kullanarak, kanal kanülün ucundan başlar ve yaklaşık olarak 1-2 inç uzanmaktadır, böylece balık tutmak için bir kanal bölmek <ol><li> Dikkat drenaj noktasına kanül alandan sürekli bir aşağıya doğru açı meydana olduğundan emin olmak için dikkat edilmelidir.065fig2.jpg &quot;width =&quot; 400px &quot;/&gt; Şekil 2, </li></ol></li></ol></li><li> Perfüzyon kurulum <ol><li> Başlamadan önce, tüm hava kabarcıkları bertaraf olmasını sağlamak, yaşam su ile perfüzyon set-up yıkayın. </li><li> Kraniotomi perfüzyon kurulum ~ 30 ml 0.016% &#39;si (630 iM) tricaine çözüm ekleyin ve ~ 2 ml bu tricaine perfüzyon başlaması üzerine hayvana teslim edilecektir sağlamak için boru üzerinden çalışmasına izin. Seyreltme için adım 2.2 bakınız. </li><li> Ana perfüzyon ayarlamak için, ilk tüpe yaşam su ~ 50 ml ekleyin. Kalan tüpler her biri için herhangi bir istenen deney bileşikleri ekleyin. </li><li> Entübasyon tabanının küçük deliğe kanül kurulum yerleştirin. </li><li> Sıkı bir sarmal içine 42 cm Kimwipe&#39;a geniş şerit bir 1 bükün ve Kimwipe&#39;dan iki ucuna uzanacak şekilde drenaj borusuna takın. Bu doku perfüze sıvının çıkması için bir fitil olarak hizmet edecek ve t içindeki sıvı oluşumunu önlemekO elektrofizyolojik kayıt müdahale olabilir ki, tabanı entübasyon. </li><li> Alt ucu tüm perfüzyon atıkları toplamak için yeterince büyük olan bir inert çanak içine uzanan sağlayan, Petri kabı büyük bir delik içine boru bir ucunu. Bu çanak kurulumu için çıkış rezervuar olarak görev yapacak. Bir ucu hayvanın karın bölgesine yakın uzanacaktır, böylece doku yerleştirin ve alt uzantısı çanak içine aktığından. </li><li> Mikroskop yakın bu tamamlanmış entübasyon tabanını yerleştirin. Tricaine perfüzyon tüpünün için kanül Luer kilidi bağlayın. </li></ol></li><li> Kılcal iğne ve elektrotlar <ol><li> Gümüş tel ve kurulumu şasiye aynı tel içinde 15 kadar yapılması gereken bir ikinci elektrot olarak 0,010 içinde 2.5 oluşan bir birinci elektrot elde edilir. İkinci elektrot için, uyum sağlar bir lehim ucu, gümüş tel 0,010 arasında bölümünde bir 15 kullanımıbir baş-sahnenin arkasında. <ol><li> Klorür iyonları ile de birinci ve ikinci gümüş tellerin uçlarını elektrolizle. </li><li> Bir mikropipet çektirmenin kullanarak, &lt;15 MQ dirence sahip ince duvarlı, borosilikat kılcal iğneyi çekin. <ol><li> 2-3 2 M potasyum klorür ul, ya da kısmen gümüş tel klorit kaplı ucu karşılamak için yeterli olan kılcal iğne doldurun. </li><li> Kılcal kafa içine birincil elektrodu takın ve elektrot tutucu monte. </li><li> Bir micromanipulator içine baş sahne montaj ve daha sonra ikinci bir micromanipulator içine ikincil elektrot montaj. Her elektrot kurulum, ilk pozisyonu ile ve daha sonra baş sahnenin arkasına ikincil elektrot lehimli uç takın. </li></ol></li></ol></li></ol></li></ol> 2. Çözümlerin hazırlanması, Perfüzyon Sistemi ve Elektrofizyolojik Kayıt Cihazları <ol><li> Habitat su 1 L edininbalık akvaryum dan. </li><li> 0.016% T] tricaine metansülfonat (tricaine) (630 uM, 50 ml) 24. <ol><li> % 0.4 Tris-tamponlu tricaine, pH değeri 7.2 olan bir kısım çözülme. </li><li> Habitat su 47.9 ml% 0.4 Tris tamponlu tricaine 2.1 ml ekleyin ve karıştırın. </li></ol></li><li> Istenen suda çözünür deneysel bileşiğin (örneğin 300 mM pentilentetrazol, ortak bir chemoconvulsant) stok konsantrasyonu çözülme. </li><li> Ringer çözeltisi içinde 1 mcg / ml panküronyum bromür bir kısım çözülme. </li><li> Anestezi ve habitat su ile deneysel entübasyon sistemlerini doldurun ve tüpler tüm kabarcıkları en azından yeterince boşaltın. Kabarcıklar hayvanın boğulma yol açan, sıvı akışını engellemek için bu yapılmalıdır. <ol><li> Tamamen bağlantı boru içine hava izin olmadan ilaç yapacak perfüzyon tüpleri boşaltın. </li><li> 0.016% (630 uM) tricaine çözelti ile anestezi tüpü doldurmak ve herhangi bir yer experDeneysel perfüzyon sistemine ilave borunun (ler) in imental bileşik (ler). <ol><li> Deneysel perfüzyon birinci tüp tek yaşam su içermelidir. </li></ol></li></ol></li><li> Boş bir 60 mm x 15 mm Petri kabındaki yaşam su ve yer ile küçük gözenek sünger nemlendirin. Anestezik enjekte edilir ise bu çanak balık tutmak için kullanılacaktır. </li></ol> 3. Kraniotomi <ol><li> O yol yaklaşık dörtte üçü doldurmak için 15 x 60 mm petri için 630 mcM tricaine çözümün yeterince ekleyin. Doldurulan çanak tartılır. Bundan başka anestezi periton içinden enjekte edilebilir, böylece bu hayvan immobilize etmek için kullanılacaktır. </li><li> Çanak içeren tricaine içine hayvan daldırın ve tekrar çanak tartın. <ol><li> Balıkların ağırlığının elde edilmesi için adım 1 ve 2 den ağırlıklar arasındaki fark çıkarın. </li><li> Hayvan sakin ve en hareket bitene kadar tricaine çözelti içinde kalmasını sağlar. </li></ol></li><li> Geniş bir çift forseps kullanarak, önceden nemlendirilmiş süngere balık transferi ve yanal konumlandırmak. Kuyruk tarafından balık aktarılması, bu süreç için iyi çalışır. <ol><li> Mikroskop altında sünger ve balık yerleştirin. </li></ol></li><li> Bir 34 G iğne içeren bir şırınga ile Nanofil, balık ağırlığının 1 ug / g olduğu şekilde, yeterli pankuronyum bromid ölçer. </li><li> Periton Nanofıl şırınga kullanarak pankuronyum bromür yönetmek, sabit tutmak için balık dorsal kenarı boyunca bir popsicle sopa kullanarak. </li><li> Ince forseps kullanarak, alt çenesi ile balık yakala ve hızlı entübasyon tabanına hayvan aktarın. </li><li> Bu mum formu ve 1 mm kanül ağzına sokulacak şekildedir on dorsal-up, böylece hayvan yerleştirin. Balık manevra ve kanül etrafında ağzını açmak için ince forseps kullanın. Nedeniyle entübasyon tepsinin makyaj, bir durdurma sağlar, taban içine yerleştirilebilir olankanül balık ağzına 3 mm sokulacak. <ol><li> Yerleştirildikten sonra, tricaine içeren yerçekimi beslemeli perfüzyon tüp açın. </li></ol></li><li> Kimqipe bir doku 3 cm 2 bölümünü kesmek ve habitat su ile ıslatın. <ol><li> Kurumasını önlemek için hayvan üzerinde doku yerleştirin. Kimwipe bölüm ayrıca, hayvan dorsal-up tutulmasına yardımcı olmak için konumlandırılabilir. </li></ol></li><li> Diseksiyon mikroskobu altında, optik TECTUM kapsayan kranial ~ 2 mm 2 bölümünü kaldırmak için vanna yaylı makas kullanın. Bu alan gözün arkasında oturur bir karanlık, kemikli tabak gibi görünüyor. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51065/51065fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51065/51065fig3.jpg" width="400px" /> Şekil 3, <ol><li> Plakanın kenarında vanna makas bir bıçak yerleştirin ve geçirgenliğe karşı yeterli bir güçle itmebeyin piercing olmadan, kemik te. Kemik snip makas kapatın. </li><li> Kemik parçasını çıkarın. </li><li> Herhangi bir kan varsa, bir Kimwipe kenarını kullanarak kaldırın. Genellikle Kanama kısa kraniotomi yürüten sonra durur. </li></ol></li></ol> 4. Elektrofizyoloji <ol><li> Entübasyon stop-horoz kapatın ve hızlı tricaine damla için entübasyon tabanını bağlayan Luer kilit ayırın. <ol><li> Elektrofizyoloji mikroskop sağlam entübasyon kurulum Taşı ve perfüzyon sistemine bağlamak. </li><li> Yaşam su açın ve tricaine yıkayın amacıyla, yaklaşık 1 saat boyunca 1 ml / dk &#39;lık bir hızda serpmek. </li></ol></li><li> Elektrot ucu hayvanın burun içine ya da üst çene arkasında daldırma içine sokulabilir, böylece görsel kontrol altında bir mikromanipülatör kullanarak, ikinci elektrot yerleştirmek. </li><li> Kraniotomi ağzına birincil elektrot iğne takın. Takınuç optik TECTUM içinde oldukça yüzeysel bir konuma, bu durumda, doku içine iğne. <ol><li> Elektrod çok derin ise, elektrik sinyali küçük olabilir. </li></ol></li><li> Toplayın ve birincil ve ikincil referans elektrotlar arasında kaydedilen elektriksel farkı analiz. Bu işlem, elde edilecek hücre kayıtları için izin verir. <ol><li> 0.1 kHz düşük geçiş filtresi ve 1 Hz yüksek geçiş filtresi ile, 5 kHz örnekleme hızında Gap serbest modunda verileri toplayın. </li><li> Yaşam suyu 45 dakika bir az perfüze kadar elektrofizyolojik aktiviteyi kaydetmeye başlar etmeyin. </li><li> Önceki deneysel ilaçların eklenmesinden en az 15 dakika boyunca yerel aktivitesinin bir temel kaydedin. Zaman istenilen miktarda tercih ve kayıt deneysel ilaçlar ile perfüzyon başlayın. Sağlıklı preparasyonlarda, 2-3 saat boyunca, nörolojik etkinlik kaydetmek mümkündür. </li></ol></li></ol> 5. Temizlemek </p&gt; <ol><li> Deneyin sonunda, kafatası ve burun deliğinden elektrotlar ve entübasyon kurulum çıkarın. <ol><li> Amerikan Veteriner Hekimleri Birliği (AVMA) Hayvanların Ötenazi (2013) için rehber tarafından belirtildiği gibi, kabul edilen uygulamalara uygun tricaine kullanarak aşırı dozda ilaç ile hayvan Euthanize. </li><li> Ötenazi olmak Zebrafish 200-500 mg / l &#39;a tricaine çözelti yerleştirilmelidir Balıklar ölüm sağlanması için ötenazi (servikal transeksiyonu) bir fiziksel yollarla tabi tutulur ve bundan sonra ritmik operküler aktivite kesildikten sonra, 10 dakika içinde en az, için çözelti içinde kalan edilmelidir. </li></ol></li><li> Perfüzyon kurulum entübasyon tabanını bağlayan Luer kilidini çıkarın. Uygun bertarafı için perfüzyon sistemde kalan sıvıyı toplayın. <ol><li> Tüm tüpler aracılığıyla DI su çalıştırmak ve tehlikeli eğer, uygun bertarafı için toplamak. </li></ol></li><li> Perfüzyon sistemi dezenfekte etmek için, run% 70 etanol tüm tüpler aracılığıyla ve uygun bertarafı için toplamak. <ol><li> Hava kurutma kolaylaştırmak için açık konumda her bir tüp için stopcocks bırakın. </li><li> % 70 etanol içinde elektrotlar daldırın ve hava ile kurumasına izin verir. </li></ol></li><li> Kavuz kapta birincil elektrot için kullanılan kılcal iğne atmayın. </li><li> Entübasyon kurulum demontaj ve su ile tüm parçaları yıkayınız. <ol><li> % 70 etanol ile her parça temizleyin ve kurumaya bırakın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Henze, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+features+predicted+by+extracellular+recordings+in+the+hippocampus+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Intracellular features predicted by extracellular recordings in the hippocampus in vivo.</a> J. Neurophysiol. 84, 390-400 (2000).</li>
<li>Gabriel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+pattern+in+the+adult+zebrafish+spinal+cord+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Locomotor pattern in the adult zebrafish spinal cord in vitro.</a> J.Neurophysiol. 99, 37-48 (2008).</li>
<li>Vargas, R., Johannesdottir, I. T., Sigurgeirsson, B., Thornorsteinsson, H., Karlsson, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+brain+in+research+and+teaching%3A+a+simple+in+vivo+and+in+vitro+model+for+the+study+of+spontaneous+neural+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Physiol+Educ%22%5BJournal%5D)">The zebrafish brain in research and teaching: a simple in vivo and in vitro model for the study of spontaneous neural activity.</a> Adv Physiol Educ. 35, 188-196 (2011).</li>
<li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> J. Neurosci. Methods. 135, 205-210 (2004).</li>
<li>Brockerhoff, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+behavioral+screen+for+isolating+zebrafish+mutants+with+visual+system+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A.%22%5BJournal%5D)">A behavioral screen for isolating zebrafish mutants with visual system defects.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.. 92, 10545-10549 (1995).</li>
<li>Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pentylenetetrazole+induced+changes+in+zebrafish+behavior%2C+neural+activity+and+c-fos+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131, 759-768 (2005).</li>
<li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large-scale+mutagenesis+screen+to+identify+seizure-resistant+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish.</a> Epilepsia. 48, 1151-1157 (2007).</li>
<li>Maximino, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaximino%2C+C+%22Serotonin+and+anxiety%3A+Neuroanatomical%2C+pharmacological+and+functional+aspects%22">Serotonin and anxiety: Neuroanatomical, pharmacological and functional aspects</a>. , Springer. New York. (2012).</li>
<li>Bally-Cuif, L., Vernier, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBally-Cuif%2C+L+%22Fish+Physiology%3A+Zebrafish%22">Fish Physiology: Zebrafish</a>. Perry, S. F., Ekker, M., Farrell, A. P., Brauner, C. J. 29, (2010).</li>
<li>Kaslin, J., Nystedt, J. M., Ostergard, M., Peitsaro, N., Panula, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+orexin%2Fhypocretin+system+in+zebrafish+is+connected+to+the+aminergic+and+cholinergic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The orexin/hypocretin system in zebrafish is connected to the aminergic and cholinergic systems.</a> J. Neurosci. 24, 2678-2689 (2004).</li>
<li>McLean, D. L., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+and+innervation+patterns+of+dopaminergic%2C+noradrenergic%2C+and+serotonergic+neurons+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Ontogeny and innervation patterns of dopaminergic, noradrenergic, and serotonergic neurons in larval zebrafish.</a> J. Comp. Neurol. 480, 38-56 (2004).</li>
<li>Mueller, T., Vernier, P., Wullimann, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+central+nervous+cholinergic+system+of+a+neurogenetic+model+animal%2C+the+zebrafish+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The adult central nervous cholinergic system of a neurogenetic model animal, the zebrafish Danio rerio.</a> Brain Res. 1011, 156-169 (2004).</li>
<li>Higashijima, S., Schaefer, M., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitter+properties+of+spinal+interneurons+in+embryonic+and+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitter properties of spinal interneurons in embryonic and larval zebrafish.</a> J. Comp. Neurol. 480, 19-37 (1002).</li>
<li>Tao, L., Lauderdale, J. D., Sornborger, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+Functional+Connectivity+between+Neuronal+Ensembles+with+Larval+Zebrafish+Transgenic+for+a+Ratiometric+Calcium+Indicator%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Mapping Functional Connectivity between Neuronal Ensembles with Larval Zebrafish Transgenic for a Ratiometric Calcium Indicator.</a> Front Neural Circuits. 5, 2(2011).</li>
<li>Fan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+statistical+methods+enhance+imaging+of+cameleon+fluorescence+resonance+energy+transfer+in+cultured+zebrafish+spinal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">New statistical methods enhance imaging of cameleon fluorescence resonance energy transfer in cultured zebrafish spinal neurons.</a> J Biomed Opt. 12, 034017(2007).</li>
<li>Burgess, H. A., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+gating+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor gating in larval zebrafish.</a> J. Neurosci. 27, 4984-4994 (2007).</li>
<li>Burgess, H. A., Schoch, H., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+retinal+pathways+drive+spatial+orientation+behaviors+in+zebrafish+navigation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Distinct retinal pathways drive spatial orientation behaviors in zebrafish navigation.</a> Curr. Biol. 20, 381-386 (2010).</li>
<li>Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+neurobiology%3A+how+larval+fish+orient+towards+the+light%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral neurobiology: how larval fish orient towards the light.</a> Curr. Biol. 20, 159-161 (2010).</li>
<li>Haug, M. F., Biehlmaier, O., Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+acuity+in+larval+zebrafish%3A+behavior+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Zool%22%5BJournal%5D)">Visual acuity in larval zebrafish: behavior and histology.</a> Front. Zool. 7, 8(2010).</li>
<li>Fetcho, J. R., Higashijima, S., McLean, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+and+motor+control+over+the+last+decade%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.Rev%22%5BJournal%5D)">Zebrafish and motor control over the last decade.</a> Brain Res.Rev. 57, 86-93 (2008).</li>
<li>Connaughton, V. P., Nelson, R., Bender, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+evidence+of+GABAA+and+GABAC+receptors+on+zebrafish+retinal+bipolar+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Vis.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological evidence of GABAA and GABAC receptors on zebrafish retinal bipolar cells.</a> Vis. Neurosci. 25, 139-153 (2008).</li>
<li>Kim, Y. J., Nam, R. H., Yoo, Y. M., Lee, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functional+evidence+of+GABAergic+neurons+in+parts+of+the+brain+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Identification and functional evidence of GABAergic neurons in parts of the brain of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Neurosci. Lett. 355, 29-32 (2004).</li>
<li>Sato, Y., Miyasaka, N., Yoshihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+regulation+of+odorant+receptor+gene+choice+and+subsequent+axonal+projection+of+olfactory+sensory+neurons+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hierarchical regulation of odorant receptor gene choice and subsequent axonal projection of olfactory sensory neurons in zebrafish.</a> J. Neurosci. 27, 1606-1615 (2007).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book%3A+a+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Brachydanio+rerio%29%22">The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish (Brachydanio rerio)</a>. , (1993).</li>
<li>Lazarova, M., Samanin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiation+by+yohimbine+of+pentylenetetrazol-induced+seizures+in+rats%3A+role+of+alpha+2+adrenergic+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Potentiation by yohimbine of pentylenetetrazol-induced seizures in rats: role of alpha 2 adrenergic receptors.</a> Pharmacol. Res. Commun. 15, 419-425 (1983).</li>
<li>Loscher, W., Honack, D., Fassbender, C. P., Nolting, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+technical%2C+biological+and+pharmacological+factors+in+the+laboratory+evaluation+of+anticonvulsant+drugs.+III.+Pentylenetetrazole+seizure+models%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+res%22%5BJournal%5D)">The role of technical, biological and pharmacological factors in the laboratory evaluation of anticonvulsant drugs. III. Pentylenetetrazole seizure models.</a> Epilepsy res. 8, 171-189 (1991).</li>
<li>DeMicco, A., Cooper, K. R., Richardson, J. R., White, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+neurotoxicity+of+pyrethroid+insecticides+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Developmental neurotoxicity of pyrethroid insecticides in zebrafish embryos.</a> Toxicol Sci. 113, 177-186 (2010).</li>
<li>Arnolds, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+effects+of+tricaine+on+the+supramedullary%2Fdorsal+neurons+of+the+cunner%2C+Tautogolabrus+adspersus%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Physiological effects of tricaine on the supramedullary/dorsal neurons of the cunner, Tautogolabrus adspersus.</a> Biol. Bull. 203, 188-189 (2002).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu protokol, in vivo olarak yetişkin zebrabalıkları nöral aktivitesini ölçmek için kullanılmıştır. Kaydedilen etkinlik özellikleri (genlik ve etkinlikleri şekli), ayrı ayrı balıklar arasında değişebilir ama uygulama ile, sinir aktivitesi, sürekli olarak gözlemlenebilir. Dışı kayıt tekniğinin kullanılması bu gözlemi açıklayabilir. Yöntem, bir bölge içinde 1 hücreleri, çok sayıda eş zamanlı olarak izlenmesini sağlar, bu nedenle birinci elektrot konumlandırma varyasyonlar olarak gözlenen etkinin bir rol...

Bu makalede, bir protokol zebrabalıkları yetişkin nöral faaliyet vivo kayıtları elde etmek için tarif edilmektedir. Ekstrasellüler kayıt yöntemleri nöral doku küçük bir bölge içinde elektriksel aktivitenin gerilim ölçümleri sağlayan kullanılır. Soruşturma Bu yöntem, bir hayvanda davranıyor 1 hücrelerin çok sayıda izleme içerir. Daha önce, dilim kayıtları göz kupası hazırlıkları ve elektroretinogram kayıtları gibi, yetişkin ve larva hem de yapılmıştır. Bu deneyler büyük ölçüde çeşitli duyu sistemlerinin 2-5 fizyolojik tepkiler detay yapılmıştır. Yakın zamana kadar, sağlam beyin preparatlar sadece solunum ve oksijen difüzyon deri yoluyla oluşabilir zebra balığı larvası 3,6,7, elektrofizyoloji ile yerine getirilmesi için mevcut olmuştur. Bizim hazırlık hayvan o tamamen bilinçli ve farkında kalır bir yetişkin zebrafish yerli nörolojik etkinlik ölçülecek sağlarf çevresi. Zebra balığı (Br.rerio) şu anda, genetik toksikolojik, farmakolojik ve fizyopatolojik çalışmalar 3 için bir model olarak temel bir rol oynamaktadır. Onlar genetik, nöral ve endokrin seviyelerinde 8 memelilerin kapsamlı benzerliği paylaşmak çünkü Zebra nörobilim alanında görünürlük kazanmıştır. Geçtiğimiz on yıl içinde, standart nöroanatomik immünohistokimyasal teknikler ve zebra balığı sinir sistemi 9-12 arasında ve farklı nörotransmitterlerin 3,8,13 dağılımının ayrıntılı karakteristik organizasyon belirlemek için kullanılmıştır. Daha yakın zamanlarda, araştırmacılar davranışsal süreçler 16-19 ve duyu sistemlerinin 2,13,20 elektrofizyolojik özellikleri üzerine ortalamak birçoğu fonksiyonel çalışmalar 14,15, onların odak değiştirdi. Bu çalışmaların az sayıda Adul belirli alanların elektriksel aktivitesi üzerinde yoğunlaşmıştırzebra balığı beyin 21-23 t, ama in vivo yaklaşımı kullanılarak gerçekleştirilmiştir değildi. Bu protokol, spesifik beyin bölgelerinde aktivitesinin modellerini açıklamak için Zebrafish sinir sistemi içerisinde, hem kendiliğinden ve uyarılmış aktivite elektrofizyolojik çalışmaları için uyarlanabilir. Bu tekniğin kullanımı, karşılaştırmalar, genç larva ve yetişkinlerin nörolojik aktivitesi arasındaki yapılmasını sağlar. Bundan başka, protokol genetik ya da farmakolojik değişiklikler arasında karşılaştırmalar izin verir. Birlikte bu tür genetik mühendisliği veya farmakolojik testleri gibi diğer yaklaşımlar ile, bu yöntem, geç başlangıçlı, epilepsi ya da nörodejeneratif süreçler üzerinde çalışılması gibi olası uygulamalar için nöronal iletişim ve plastisite sağlam bir yetişkin hayvan hem de fonksiyonel analizi için yeni bir olanak sunmaktadır.

<table><tbody><tr><td>% 70 Etanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>2750HC</td><td>DI su ile %100 ila% 70 seyreltin</td></tr><tr><td>2 M Potasyum Klorür</td><td>J.T. Baker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 M Sodyum Klorür</td><td>J.T. Baker</td><td>3624-05</td><td></td></tr><tr><td>%0.4 Tris-Tamponlu Trikain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521</td><td>pH 7.2-7.4; -20 oC'de saklanır</td></tr><tr><td>Pankuronyum Bromür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1918</td>, <td>1 & mu'ya seyreltilmiş; g/&mu; l 1x fosfat tamponlu tuzlu su</td></tr><tr><td>Habitat su</td><td></td><td></td><td>pH 7.0-7.4, iletkenlik 400-450 &mu; S; Anında Okyanus ve Sodyum Bikarbonat</td></tr><tr><td>Pentiletetrazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6500</td> tarafından korunur <td>1x fosfat tamponlu salin Nanofil şırınga içinde 300 mM'ye seyreltilmiş</td></tr><tr><td></td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>06A</td><td></td></tr><tr><td>34 G Eğimli iğne</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>NF34BV</td><td></td></tr><tr><td>Sünger</td><td></td><td></td><td>Küçük gözenekli ve kimyasal içermeyen</td></tr><tr><td>Köpük destekli ince zımpara kağıdı</td><td></td><td></td><td>5 x 5 cm2 yeterince büyük</td></tr><tr><td>9 V Pil</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Timsah klipsli</td><td></td><td></td> teller <td>2</td></tr><tr><td>37 cm x 42 cm Kimwipe</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>TW31KEM</td><td></td></tr><tr><td>11 cm x 21 cm</td><td>Kimwipe Kimberly-Clark Professional</td><td>TW31KWP</td><td></td></tr><tr><td>1/8 inç çapında tüp</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 cm çapında boru</td><td></td><td></td><td></td></tr> 1 <tr><td>mm çapında tüp</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dişi Luer kilit kapaklı ve silikon yüksüklü redüksiyon valfi</td><td>Qosina</td><td>51505</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop (Leica MZ APO)</td><td></td><td></td><td>Başka bir mikroskop olabilir kullanılmış</td></tr><tr><td>Vanna makas</td><td>Roboz Cerrahi Aletler Co., Inc.</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>60 ml Luer kilitli şırınga tüpleri</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>Luer bağlantılı 3 Musluklar</td> Luer bağlantılı <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>1 yönlü Musluk</td></tr><tr><td>Fisherbrand 100 mm x 15 mm Petri kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9299146</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand 60 mm x 15 mm Petri kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67961</td><td></td></tr><tr><td>4 in Borosilikat kılcal boru</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW100F-4</td><td>Çözelti ile doldurmaya yardımcı olmak için bir filament içerebilir</td></tr><tr><td>P-97 Alevli/Kahverengi Mikropipet Çektirme</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Digidata 1440</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axon Aloclamp 900A</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axoclamp yazılımı</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HS-9Ax 1U headstage</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.010 Silver wire</td><td>A-M Systems, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Q serisi elektrot tutucu</td><td>Warner Instruments</td><td>QSW-A10P</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Luer kilit şırıngası</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mm x 15 inç Boru</td><td></td><td></td><td>Luer kilit şırıngasını Q serisi elektrot tutucuya bağlayın</td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Warner Instruments</td><td></td><td>2</td></tr><tr><td>Microsoft tabanlı PC'ye ihtiyacınız var</td><td>Dell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Faraday Kafes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hava Tablası</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sağlam yetişkin zebra balığı beyin elektrofizyolojik kayıt

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

Daha önce, erişkin zebrabalıkları elektrofizyolojik çalışmalar hazırlıklarını veya göz fincan hazırlıkları ve electrorentinogram kayıtları dilim sınırlı olmuştur. Bu çalışma, nöral faaliyet kayıt sağlayan, bir yetişkin zebra balığı, hareketsiz entübe ve in vivo elektrofizyolojik deneyler için nasıl kullanılabileceğini açıklar. Yetişkin immobilizasyonu yanaktan ve operküler hareketinin yerine solungaçları çözülmüş oksijen sağlamak için bir mekanizma gerekmektedir. Bu teknik ile, hayvanların hareketsiz ve bu şartı yerine getirmek için bir habitat su ile perfüze. Kranyotomi tricaine metansülfonat altında gerçekleştirilir (MS-222; tricaine) anestezi beyne erişimi sağlamak için. Birincil elektrod dışı beyin aktivitesini kaydetmek için kraniotomi penceresi içinde konumlandırılmış. Bir Multitube perfüzyon sisteminin kullanımı sayesinde, farmakolojik bileşikler, çeşitli nöral aktivitede yetişkin balık ve herhangi bir değişiklik için uygulanabilirgözlenebilir. Metodoloji nörolojik etkinlik değişiklikler ile ilgili yapılacak gözlemler sağlar değil, aynı karşılaştırmalar larva ve yetişkin zebrabalıkları arasında yapılacak için de izin verir. Bu araştırmacılara nedeniyle farklı yaşam evrelerinde çeşitli bileşiklerin tanıtımı nörolojik aktivite değişiklikleri tanımlamak için yeteneği verir.

Bu protokol, in vivo olarak yetişkin zebrabalıkları nöral aktivitesini ölçmek için kullanılmıştır. Bu elektrofizyolojik tutarlı ve tekrarlanabilir elde edilir. Pentilentetrazol (PTZ), ortak bir chemoconvulsant 6,7,25,26, entübasyon içeri getirildiği zaman, Şekil 5, bir yetişkin zebrabalıkları nöral faaliyet yerli ve bağlı değişikliklerin bir temsili örneğini göstermektedir Kur. Yetişkin zebrafish yerli, nörolojik etkinlik, her bir deney (Şekil 5A)...

Bu çalışma, bir yetişkin zebra balığı, hareketsiz entübe ve kayıtları ve bozulmamış bir hayvanda nöral faaliyet işleme izin vermek için in vivo elektrofizyolojik deneyler için nasıl kullanılabileceğini açıklar.

Sağlam Yetişkin Zebra balığı Beyin Elektrofizyolojik Kayıt

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Bu prosedürün genel amacı, sağlıklı yetişkin zebra balığı beynindeki nöral aktivitenin in vivo kayıtlarını elde etmektir. Bu işlem, öncelikle Trimethylsulfonate banyo uygulaması ile yetişkin zebra balığının immobilize edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise immobilize edilmiş zebra balığının entübe edilmesidir.Ardından, beyne erişim sağlamak amacıyla trika anestezi altında bir kraniyotomi gerçekleştirilir. Son adım, hücre dışı beyin aktivitesinin in vivo olarak kaydedilmesine olanak tanıyan primer bir elektrodun kraniyotomi penceresine yerleştirilmesidir.Yetişkin zebra balıklarında elektrofizyoloji, farklı farmakolojik bileşiklerin veya genetik mutasyonların zebra balığının doğal nörolojik aktivitesinde nasıl değişikliklere yol açabileceğini göstermek için kullanılabilir. Bu yöntem, hem normal gelişimde hem de genetik mutasyon durumunda, beyin yapısındaki değişikliklerin nöral aktivite değişikliklerini nasıl etkileyebileceğine dair hem gelişim biyolojisi hem de nörobiyoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Genel olarak, bu tekniği ilk kez deneyen kişiler zorluk yaşayabilir; çünkü beyin dokusuna zarar vermeden, başı örten kemik plakanın sadece küçük bir kısmının çıkarılması için ekstra özen gösterilmesi gerekir.Entübasyon kanülü, balığa sıvı verilmesini kolaylaştırır. Bu düzenek, kanülün hayvanın ağzında en iyi şekilde konumlandırılması için hem esneklik hem de sabitlik sağlar. Bu düzeneği hazırlamak için, bir P 200 pipet ucunun geniş ucundan 1,5 santimetrelik bir bölümü makas veya jilet yardımıyla kesin.Ardından, altı santimetre uzunluğunda ve bir milimetre çapındaki bir tüp parçasını bir indirgeme valfine yerleştirin. Daha sonra, modifiye edilmiş pipet ucunu bir sekiz inç çapındaki kısa bir tüp parçasına yerleştirin. Kanül, Luer lock ile pipet ucunu sabit tutmak için kullanılan tüp aracılığıyla pipet ucuna yerleştirilebilir.Deneyden önce, tüm hava kabarcıklarının giderildiğinden emin olarak habitat suyu ile bir perfüzyon düzeneğini yıkayın. Ardından, kraniyotomi perfüzyon düzeneğine 30 mililitre 630 micromolar trica çözeltisi ekleyin ve perfüzyon başladığında hayvana trica iletimini sağlamak için bu çözeltinin iki mililitresinin tüplerden geçmesine izin verin. Ana perfüzyon düzeneği için ilk tüpe 50 mililitre habitat suyu ekleyin.Ardından, kalan tüplerin her birine istenen deneysel bileşikleri ekleyin. Bundan sonra, kanül düzeneğini intübasyon tabanındaki küçük deliğe yerleştirin; bir inç genişliğindeki Kim wipe şeridini sıkı bir spiral şeklinde bükün ve drenaj tüpüne, Kim wipe'ın her iki uçtan da dışarı çıkacağı şekilde yerleştirin. Bu doku, perfüze edilen sıvıyı uzaklaştırmak ve elektrofizyolojik kaydı engelleyebilecek intübasyon tabanı içindeki sıvı birikimini önlemek için bir fitil görevi görecektir.Ardından, tüpün bir ucunu Petri kabındaki büyük deliğe yerleştirin ve alt ucun, tüm boşaltım atıklarını toplayacak kadar büyük olan inert bir kabın içine uzanmasını sağlayın. Bu kap, düzeneğin çıkış rezervuarı olarak hizmet edecektir. Daha sonra dokuyu, bir ucunun hayvanın abdominal bölgesinin yakınında duracağı ve alt uzantının kabın içine damlayabileceği şekilde konumlandırın.Tamamlanmış intübasyon tabanını diseksiyon mikroskobunun yanına yerleştirin. Ardından, kanülün luer kilidini trikan perfüzyon tüplerine bağlayın. Bu prosedürde, 15 x 60 milimetrelik bir Petri kabının dörtte üçüne kadar 630 µM trikan çözeltisi ekleyin.Ardından, saha kabını tartın. Bu kap, periton içine daha fazla anestezi enjekte edilebilmesi için hayvanı sabitlemek amacıyla kullanılacaktır. Şimdi hayvanı trica içeren kabın içine daldırın ve kabı tekrar tartın.Ardından, dolu kabın ağırlığını toplam ağırlıktan çıkararak balığın ağırlığını hesaplayın. Hayvanın, sakinleşene ve hareketlerinin çoğu durana kadar trica çözeltisinde kalmasını sağlayın. Balık trica çözeltisine daldırılmış durumdayken, balık ağırlığının gramı başına bir mikrogram düşecek şekilde yeterli miktarda pantonium bromür çekmek için 34 gauge iğne içeren bir NFI şırınga kullanın.Balık sakinleştiğinde, geniş uçlu bir pens kullanarak balığı kuyruğundan tutup önceden nemlendirilmiş bir süngere aktarın ve yan konumlandırın. Ardından süngeri ve balığı diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin. Balığın dorsal tarafını bir dondurma çubuğu ile sabitleyin.Ardından, pan keon bromürür intraperitonal olarak uygulayın. Şimdi ince uçlu pens kullanın. Balığı alt çenesinden tutun ve hayvanı hızlıca entübasyon tabanına aktarın.Hayvanı, bir milimetrelik kanülün ağza yerleştirilebileceği şekilde, sırtı yukarı gelecek şekilde balmumu kalıba yerleştirin. Ardından, balığı yönlendirmek ve ağzını kanülün etrafında açmak için ince pens kullanın. Kurulumumuzda.Kanülün balığın ağzına üç milimetre kadar yerleştirilmesini sağlamak için tabana bir durdurucu monte edildi. Kanül konumlandırıldıktan sonra, trica içeren yerçekimi destekli perfüzyon tüpünü açın. Ardından, üç santimetrekare boyutunda bir Kim wipe doku parçası kesin ve bunu habitat suyu ile ıslatın.Kurumayı önlemek için dokuyu hayvanın üzerine yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu altında, balık hazırlanır ve kraniyotominin gerçekleştirilmesi için bekletilir. Bu bölge, gözün arkasında yer alan koyu renkli kemiksi bir plaka gibi görünür.Ardından, makasın bir ucunu plakanın kenarına yerleştirin ve beyni delmeden kemiğe nüfuz edecek kadar kuvvetle itin. Sonra, kemiği kesmek için makası kapatın. Bundan sonra, elektrofizyolojik kayıt için kemik parçasını çıkarın.İntübasyonu kapatın. Musluğu kapatın ve intübasyon tabanını trica damlatıcısına bağlayan luer lock bağlantısını hızla ayırın. Bozulmamış intübasyon düzeneğini elektrofizyoloji mikroskobuna taşıyın ve perfüzyon sistemine bağlayın.Habitatı ve suyu açın, ardından yaklaşık bir saat boyunca dakikada bir mililitre hızla perfüzyon uygulayın. TRICA'yı bir mikro manipülatör kullanarak yıkamak için, elektrot ucunun hayvanın burun deliğine veya üst çene altındaki boşluğa yerleştirilebileceği şekilde sekonder elektrodu konumlandırın. Ardından, primer elektrot iğnesini kraniyotomi açıklığından içeri yerleştirin.Ardından, iğnenin ucu optik tüberkül içinde oldukça yüzeysel konumlanacak şekilde dokuya yerleştirin. Elektrodun daha derin konumlara yerleştirilmesi, veri toplama için boşluksuz modda küçük bir elektrik sinyaline yol açabilir; burada 5.000 hertz örnekleme hızıyla birlikte 0,1 kilohertz değerinde bir alçak geçiren filtre ve bir hertz değerinde bir yüksek geçiren filtre kullanılır. Habitat suyu en az 45 dakika boyunca perfüze edildiğinde elektrofyizyolojik aktivitenin kaydına başlayın.Deneysel ilaçlar eklenmeden önce, en az 15 dakika boyunca doğal aktivitenin baz hattını kaydedin. Bu deneyde yetişkin zebra balığının doğal nörolojik aktivitesi izlenmiştir; bu şekil, kayıt süresi boyunca optik tumora ait iki ila 10 milivolt civarında küçük genlikli spontan bazal aktiviteyi göstermektedir. Sisteme 15 milimolar PTZ eklenmesinin ardından, beş dakika içinde spontan epileptik form benzeri boşalımlar gelişmeye başlamıştır.PTZ'ye sürekli maruz kalma, 15 millivolt'a kadar ulaşan yüksek genlikli boşalımların ardından gelen daha küçük ve daha sık aktivite patlamalarından oluşan tutarlı bir örüntüye yol açmıştır. Bu prosedürü gerçekleştirirken, hayvanla etkileşim kurarken ve kraniyotomi işlemini yaparken sabırlı olmak ve acele etmemek önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, sağlam bir yetişkin zebra balığının beynindeki nöral aktivitenin in vivo kayıtlarının nasıl alınacağı konusunda iyi bir fikre sahip olmalısınız.Bu işlem, bir perfüzyon sistemi kullanılarak ve immobilize edilmiş hayvana kraniyotomi uygulanarak gerçekleştirilir.

electrophysiological-recording-in-the-brain-of-intact-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, kalbin elektriksel aktivitesini ölçen bir test olan elektrokardiyografi (EKG veya EKG) ölçümlerinin bir zebra balığı üzerinde nasıl yapılacağını gösterir.

Zebra balığı elektrokardiyografisi (EKG): Kardiyak Fonksiyonu Değerlendirmek İçin Minimal İnvaziv Bir Test

Protokol, yetişkin zebra balıklarında elektrofizyoloji gerçekleştirme prosedürünü açıklar. Bu yöntem, in vivo olarak nöral aktiviteyi ölçmek için kullanılabilir.

Yetişkin Zebra Balığı Elektrofizyolojisi: İn Vivo Nöronların Hücre Dışı Elektriksel Aktivitesini Ölçmek İçin Bir Yöntem

Bu video, felçli bir zebra balığı larvasındaki afferent nöronlardan gelen elektrik sinyallerinin, lateral hat ganglionunun yakınına bir mikropipet yerleştirerek ve sinyal yakalama için gevşek bir conta oluşturarak kaydedilmesini göstermektedir. Hücre dışı çözelti, bu işlem sırasında nöronal canlılığı korur.

İmmobilize Bir Zebra Balığı Larvasında Afferent Nöronlardan Gelen Elektrik Sinyallerinin İzlenmesi

Larva zebrafish önbeyin ekstrasellüler alanın potansiyellerini kaydetmek için basit bir yöntem tarif edilmiştir. Yöntem, bir sağlam...

Larva Zebra balığı olarak önbeyin Elektrofizyolojik Kaydı

Bu video, karmaşık nöral devreleri koruyan bir bütün beyin hazırlık, belirlenen tek nöronlardan elektriksel aktivite kayıt nasıl gösterecektir. Biz gonadotropin salgılatıcı hormon (GnRH) nöronlar genetik sağlam beyin hazırlanmasında tanımlama için bir floresan protein ile etiketlenmiş edildiği transgenik balık kullanabilirsiniz.

Transgenik Balık Sağlam Beyin Tespit Edilen nöronlar Elektrik Aktivitesi Kayıt

Bu yazıda zebra balığı embriyolarının ve larva spinal nöronların elektrofizyolojik kayıtları için yöntemleri tarif eder. Hazırlık yerinde nöronları korur ve genellikle asgari diseksiyonu kapsar. Bu yöntemler, erken larva aşamalarında ilk elektrik uyarılma alımından spinal nöronların çeşitli elektrofizyolojik çalışmaları için izin verir.

Zebra balığı<em&gt; Situ</em&gt; Omurilik Omurilik duyusal ve motor nöronlar gelen Elektrofizyolojik Recordings Hazırlık

Burada, canlı anestezize edilmiş yetişkin zebrafislerde elektrokardiyogram kaydetmek ve yorumlamak için güvenilir, minimal invazif ve uygun maliyetli bir yöntem sunuyoruz.

Yetişkin zebrafish için In vivo yüzey elektrokardiyografi

Burada zebra balığı embriyonik beynini larva ve çocuk evrelerine kadar in vivo olarak görüntüleyen bir yöntem sunuyoruz. Elektrofizyolojik yaklaşımlardan uyarlanan bu mikroinvaziv prosedür, olgun nöronun hücresel ve hücre altı ayrıntılarına erişim sağlar ve beyin fonksiyonu ve ilaç müdahalesini karakterize etmek için optogenetik ve nörofarmakolojik çalışmalarla birleştirilebilir.

Kafatası ve Deri Temizleme ile Uyanık Zebra Balığı Larvaları ve Yavrularında Tam Aktif Beyin Dokusunun In vivo Görüntülemesi

Bu protokol, elektrofizyolojik çalışmalar için uygun, yetişkin, genç, larval ve embriyonik zebra balıklarından (Danio rerio) canlı kardiyak ve vasküler düz kas hücrelerinin akut izolasyonunu tanımlamaktadır.

Kardiyak ve Vasküler Düz Kas Hücrelerinin Elektrofizyolojik Çalışmalar İçin Yetişkin, Genç, Larva ve Embriyonik Zebra Balıklarından İzolasyonu

Burada, yetişkin zebra balıklarının dorsal ön beyninde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme yapmak için bir protokol sunuyoruz.

Davranan Yetişkin Zebra Balıklarında Ön Beyin Aktivitesinin İki Fotonlu Kalsiyum Görüntülemesi

Çalışma, zebra balıklarında uzun süreli EKG alımı ve analizi için gelişmiş bir sistem olan Zebra II'yi tanıtıyor. Bu sistem, kontrollü ortamlarda birden fazla balığı işlemek için bağımsız bir perfüzyon sistemine ve çok noktalı elektrotlara sahiptir. Amiodaronun akut etkileri, vahşi tip zebra balığı ile değerlendirildi ve analiz edildi.

Zebra Balıklarında Elektrofizyolojik Sinyalleri Kaydetmek İçin Yeni Bir Sistem Olarak Zebra II

Öğrenin, sağlam yetişkin Danio rerio beyinlerinde in vivo elektrofizyolojik kayıt yöntemini. İmmobilizasyon, entübasyon ve kraniyotomi adımlarıyla sinir aktivitesini gerçek zamanlı izleyin.

Sağlam Yetişkin Zebra balığı Beyin Elektrofizyolojik Kayıt

Daha fazla video keşfet