Name: İlköğretim Tümörleri ve / veya klinik öncesi için İlişkili Metastazlarının ve Tedavi Klinik Geliştirme Ex Vivo Tedavisi Tepki (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Keşfedin kanser dokularında ilaç yanıtını değerlendirmek için ekz vivo kesit tekniğini. Bu yöntem tümör mikroçevresini koruyarak ilaç etkinliği, direnç mekanizmaları ve yan etkilerin hassas analizini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, MSKCC Doku Tedarik Hizmet Ekibine (TPS), özellikle Maria Corazon Mariano, Priscilla McNeil, Anas Idelbi, Daniel Navarrete ve Katrina Allen'a, bu projenin başarılı bir şekilde sürdürülmesindeki tüm çabaları ve aşağıdaki kaynaklardan sağlanan fonlar için teşekkür eder: 5 R21 CA158609-02 ve Conquer Cancer Foundation ve Breast Cancer Research Foundation. Buna ek olarak, yazarlar bu makalenin sunulmasını desteklediği için Araştırma ve Proje Yönetimi Ofisi, Teknoloji Geliştirme Ofisi, Araştırma Sosyal Yardım ve Uyum ve RTM Bilgi Sistemleri Desteği Başkan Yardımcısı Eric Cottington'a teşekkür eder.

NOT: Hasta doku temini kurumsal inceleme kurulu (KİK) ile yetki verildi Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi&#39;nde Biospecimen ve Klinik Protokolleri (Protokolü numaralarını sırasıyla 09-121 ve 11-041) -onaylı. 1. Doku İhale <ol><li> Hasta primer tümör / metastaz Alımı NOT: Bugüne kadar, bu protokol ameliyatla çıkarıldı pankreas, mide ve meme tümör türleri, yanı sıra, lenfoma metastaz üzerinde yapılmıştır. <ol><li> Steril sıvı dökülmelerine karşı dayanıklı bir kap içinde sıkıca kapatılmış ve steril sızdırmaz plastik numune torbaya Patoloji bölümünde kurye veya pnömatik tüp sistemi ile numune teslim Cerrahi ekibi yönlendirin. Hiçbir formalin veya sabitleştirici ile taze halde numune taşıma Cerrahi ekibi yönlendirin. </li><li> Hangi inc, steril tekniği kullanarak taze örnek hasat patolog veya patolog yardımcısı yönlendirinLaminer akış kaputun altında steril eldiven ve araçların idarecisi kullanımı. </li><li> Cerrahi prosedürün tamamlanmasından 30 dakika altında titizlikle tutulur tedarik numunenin, hasat zamanını kaydedin. Soğuk iskemi dikkate etkileri de dikkate alınarak,&gt; 30 dakika 18 soğuk iskemi süresi ile rezeke numune yapmayız. </li><li> Steril bir ortam sağlamak için, bir laminar akış başlığı içinde 1,0 cm3 yaklaşık 0,5 cm3 primer tümör örnek kaldırmak için, Patoloji Bölümü personelin doğrudan. Mümkün olduğunda, olası Frank santral nekroz (hücre ölümü) önlemek için indeks lezyonun çevresinden tümör dokusu seçin. NOT: nekrotik doku aşağıdaki kriterlerden herhangi biri tarafından fena halde tanınabilir olabilir: renk veya doku solukluk kaybı; nekrotik doku yumuşak ve kırılgan olduğu gücü kaybı; nekrotik ve canlı doku arasında belirgin bir sınır. </li><li> Pathologi Doğrudanst veya patolog yardımcısı tanısal değerlendirme için tümörün hemen örnekleme sonra aşırı (cerrahi artıklar) ise periferik doku sağlayabilir. Yaklaşık 5 mi,% 1 antibiyotik (penisilin ve streptomisin) ihtiva eden en az temel ortam (MEM) içeren 15 ml&#39;lik steril bir konik santrifüj tüpü içinde örnek yerleştirin. </li><li> Mevcut (örneğin, mastektomi numune aksiller kuyruk lenf nodu), aynı boyutta (0.5 cm 3 cm 3 1.0) fena halde pozitif ilişkili lenf nodu örneği temin ve primer tümörün ilaç yanıtı ile karşılaştırırsanız. Primer tümör numunesinde gibi,% 1 antibiyotik (penisilin ve streptomisin) içeren yaklaşık 5 mi minimum temel ortam (MEM) içeren bir 15 ml&#39;lik steril bir konik santrifüj tüpüne lenf düğümü örnek yerleştirin. </li><li> Eğer örneğin, cerrahi örnek sağlar (örneğin, mastektomi numune), (primer tümörden uzak) çıkarmak, normal doku örneği (büyüklüğü,yaklaşık 5 ml transferi amaçlıdır% 1 antibiyotik içeren minimum temel ortam (MEM) içeren 15 ml steril konik santrifüj tüpü normal yoğun lifli / meme parankim) ve yer. Laboratuar tesislerine transferi takiben, bir de kriyotüpe, &#39;ek&#39; donma ve mağaza &#39;normal&#39; örneği aktarmak -80 ° C derin dondurucuda gelecekteki moleküler analizler için. </li><li> Islak buz üzerinde tüm örneklerini yerleştirin ve hemen ex vivo taze doku kesit için laboratuvar uzaya taşıyacak. BÖLÜM Normal numune yapmak değil, gelecekteki moleküler analizler için ° C derin dondurucuda bir -80 saklayın. Gelecekteki moleküler analizler için -80 ° C derin dondurucuda kriyotüpe, &#39;ek&#39; donma ve mağaza için bir primer tümörün bölümünü ve ilişkili metastaz aktarın. </li></ol></li><li> Klinik çalışmalarda doku İhale (örneğin, opsiyonel iğne biyopsisi (CNB)) NOT: Biz hastaların tümör dokuları eldeTedavinin başlamasından önce erişilebilir bir tümör metastaz CNB geçmesi onların rıza klinik protokolleri üzerine alındı. CNBs, bugüne kadar meme, marjinal zon lenfoma, mantle hücreli lenfoma, metastatik paragangliomalardır, serviks (skuamöz hücreli) ve yumurtalık kanserleri olan hastalarda yapılmıştır. <ol><li> Girişimsel Radyoloji veya ilgili bölümünden klinik personeli içeren steril konik santrifüj tüpü tedavi öncesi iğne biyopsisi yapmak ve bir 15 ml numune yerleştirin sahip yaklaşık 5 ml% 1 antibiyotik (penisilin ve streptomisin) içeren minimum temel ortam (MEM). </li><li> Islak buz üzerinde biyopsi örneği yerleştirin ve hemen ex vivo taze doku kesit için laboratuvar uzaya taşıyacak. </li></ol></li></ol> Kesit ve Vibratome Ayarları için Malzemelerinin 2. Hazırlık <ol><li> Kesit için Malzemelerinin Hazırlanması <ol><li> Aga 4 g eklenerek,% 4 agaroz solüsyonu yapmakPBS, 100 ml yükseldi. Otoklav (devir ayarı: sıvı, 121 ° C, 30 dak, inç kare başına £ 15), ilk kullanımdan önce çözelti. Daha sonraki kullanımlar için, agaroz oda sıcaklığında katılaşması dikkatli her kullanımdan önce (30 saniye aralıklarla için yüksek ısı) sıvılaştırılması ve uygun bir şekilde ~ 25 ° C (yani, sıcak bir dokunma) soğumaya bir mikrodalga içinde% 4 agaroz yerleştirin. </li><li> Kalıcı olmayan bir doku gömme ortamı olarak% 4 agaroz kullanın. % 4 agaroz yeterli miktarda soğutulur ve steril bir forseps gömme kalıp doku örneğin yerleştirilmesi ve% 4 agaroz akma, sıvı halde hala demektir. </li><li> Gömme kalıp kesme yüzeyi doğrudan duvara yakın bir doku örneği (~ 2 mm mesafe), fakat yerleştirin. % 4 agaroz, hızlı katılaşmaya başlar, bu nedenle hızlı ve uygun şekilde doku örneği yer alacak. Kesitlere ayırma esnasında çözelti içinde tutmak için bir 55 ° C su banyosu içinde,% 4 agaroz tutun. </li><li> Bölümü analiz için 24 plaka için, 1 ml o eklemekHer bir oyuğa f tüm ortam (örneğin, MEM +% 10 cenin sığır serumu +% 1 antibiyotik). Kesit alma süresi boyunca, oda sıcaklığında (-25 ° C) &#39;de 24-yuvalı plaka tutun. </li></ol></li><li> Ayarlar Vibratome hazırlanması <ol><li> Titreşimli mikrotomu kullanılarak, 10 bıçak örneği yaklaşır hızını [10 (2,5 mm / sn) 0 (0.00 mm / sn)] ve bıçak [0 (0 Hz) frekansını ayarlamak (100 Hz) ]. Doku (örneğin yoğunluk / sertlik) bir kıvama göre ayarları yapın. </li><li> Invaziv duktal karsinom, primer meme tümörü için, sırasıyla 6 ve 3, hız ve frekansa ayarlar. Az yoğun / firma tümör dokusu için hızını azaltmak ve buna göre sıklığını arttırırlar. </li><li> (- 999 mikron 1) enstrüman sınırları içinde kesit kalınlığı ayarlayın. Bu analizler için, 200mm&#39;lik bir kesit kalınlığı ayarlayın. </li><li> Örnek disk tha sıvı daha ince bir yapışkan tabaka kullanılarak Agaroz yerleştirilen örneği montet ıslak buz kaplı olan medya bir rezervuar batırıldıktan. </li></ol></li></ol> 3. Doku Kesit, Tedavi ve Analizleri <ol><li> Hemen tam ortam 1 ml ile bir çok-çukurlu bir tabla içindeki steri forseps ve yer kullanarak kesit üzerine hassas dilimlenmiş bölümleri çıkarın. Yeterli bölümleri tepki ve bağlaşık analizler için yakalandığı zaman, standart doku kültür koşulları altında ayarlanmış bir doku kültürü kuluçka makinesi içinde tedaviye yanıt için çok çukurlu plaka yerleştirilir. </li><li> Kültürlü eserler karşı doza bağlı bir cevap teyit etmek için bir çaba muamele edilmiş bölümleri bağlayıcının birden fazla kontrol bölümleri al. (- 4 sa ~ 2) 18 de soğuk iskemi zaman zararlı etkilerin içinde, - (40 dk ~ 30) doku hızla kesit gerçekleştirin. Sadece 1 saat alışma dönemi aşağıdaki bölümlerden tedavisini yapın. </li><li> 1 saat alışma süresinden sonra, doz (terapötik ilgili artan ekleyin; <em.&gt;, Örneğin 0 - tedavi süresi için standart kültür koşulları altında doku bölümleri ve ev İlacın konsantrasyonu 10 uM). Bu çalışma için, 24 ve / veya 48 saat değerlendirme dönemleri kullanın. Ve 96 saat değerlendirme dönemleri dahil olmak üzere dönemler için, bu çalışmada test Ancak, kontrol (yalnızca araç) doku bölümleri, canlı kalacaktır. </li><li> Tedaviyi takip ederek, RT O&#39;da% 10 tamponlu formalin ve sırayı içeren bir tüpe doku bölüm yerleştirerek, steril koşullar ve formalin ile düzeltme altında bölümleri çıkarmak / N veya% 4 paraformaldehid içeren bir tüpe (bir şişesinden,% 16 paraformaldehit seyreltik 2 saat boyunca oda sıcaklığında bir nihai konsantrasyonu% 4) ve bir yer için PBS ile yıkanmıştır. <ol><li> Daha büyük doku bölümleri saptamak (örneğin,., ~ 6 mm x 4 mm),% 10 tamponlu formalin O 200 mikron kalınlığında / oda sıcaklığında K. Daha küçük bölümleri Fix (örneğin,., 1 mm x 1 mm), oda sıcaklığında 2 saat süresince% 4 paraformaldehit içinde 200 mikron kalınlığındadır. NOT: fiksatif f hacmi verimli penetrasyon içinixative doku hacmi 20x olmalıdır. Verilen bu doğru tespiti kullanımı tüm doku boyutları için fiksatif 1 ml güvencesi için son derece küçük doku boyutları (örneğin, 6 mm 3 doku = 6 ul hacmi), bu protokol sonuçları. </li><li> Tespitin ardından doku örnekleri Patoloji Bölümü personeli tarafından gömülü parafine var. Tahsil slaytlar üzerine parafin bloklar örnek Bölüm hematoksilen ve eozin lekeli ve değerlendirilir immunohistokimyasal (örneğin, apoptoz) olmak. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Abercrombie, M., Ambrose, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interference+Microscope+Studies+of+Cell+Contacts+in+Tissue+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture.</a> Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).</li>
<li>Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Criteria+for+Determining+Malignancy+in+Tissue-Culture+Cell+Lines+in+the+Albino+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22New+York+Academy+of+Science%22%5BJournal%5D)">Criteria for Determining Malignancy in Tissue-Culture Cell Lines in the Albino Rat.</a> New York Academy of Science. 5, 351-355 (1957).</li>
<li>Paul, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Cancer+Cell+in+Vitro%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Cancer Cell in Vitro: A Review.</a> Cancer Research. 22, 431-440 (1962).</li>
<li>Dean, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+response+to+CDK4%2F6+inhibition+in+breast+cancer+defined+by+ex+vivo+analysis+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors.</a> Cell Cycle. 11 (14), 2756-2761 (2012).</li>
<li>Bray, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl-2+Modulation+to+Activate+Apoptosis+in+Prostate+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 7 (9), 1487-1496 (2009).</li>
<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li>
<li>Nakasone, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Tumor-Stroma+Interactions+during+Chemotherapy+Reveals+Contributions+of+the+Microenvironment+to+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance.</a> Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).</li>
<li>Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+genetic+studies+of+isolated+cells+from+parathyroid+tumors+reveal+the+complex+pathogenesis+of+parathyroid+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia.</a> PNAS. 111 (8), 3092-3097 (2014).</li>
<li>Vidal, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cancer+stem+cells+from+human+prostate+cancer+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples.</a> J. Vis. Exp. (85), e51332(2014).</li>
<li>Wanping, X., Neckers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+Molecular+Chaperone+Heat+Shock+Protein+90+Provides+a+Multifaceted+Effect+on+Diverse+Cell+Signaling+of+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).</li>
<li>Moulick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity-based+proteomics+reveal+cancer-specific+networks+coordinated+by+Hsp90%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.</a> Nature Chemical Biology. 7 (11), 818-826 (1038).</li>
<li>Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+sialyl-Lewis%28x%2Fa%29+underexpression+and+E-cadherin+overexpression+in+the+lymphovascular+embolus+of+inflammatory+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer.</a> American Journal of Pathology. 161 (2), 619-628 (2002).</li>
<li>Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paradox+of+E-cadherin%3A+role+in+response+to+hypoxia+in+the+tumor+microenvironment+and+regulation+of+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism.</a> Oncotarget. 4 (3), 446-462 (2013).</li>
<li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> PNAS. 107 (18), 8352-8356 (2010).</li>
<li>Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+culture+of+human+prostate+tissue+and+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Urology%22%5BJournal%5D)">Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development.</a> Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).</li>
<li>Jhaveri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+90+inhibitors+in+the+treatment+of+cancer%3A+current+status+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Investigational+Drugs%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).</li>
<li>Gerecitano, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+124-PU-H71PET+imaging+to+predict+intratumoral+concentration+in+patients+on+a+phase+I+trial+of+PU-H71%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71.</a> Journal of Clinical Oncology. 31, Suppl . 11076-11 (2013).</li>
<li>Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cold+ischemic+time+on+the+immunohistochemical+evaluation+of+estrogen+receptor%2C+progesterone+receptor%2C+and+HER2+expression+in+invasive+breast+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Pathology%22%5BJournal%5D)">The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma.</a> Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).</li>
</ol>

Herhangi bir çıkar çatışması açıklanmadı.

Etkili tedavi stratejileri geliştirmek için çalışırken Kanser biyologlar önemli zorluklarla karşı karşıya. Kurulan kanseri hücre çizgileri üzerindeki geliştirme ilaçlar in vivo test doğru yanıt olarak ve PDX modellerinde in vivo deneyler, emek yoğun ve çok pahalıdır yansıtmıyor olabilir. Yukarıda verilen, primer hastanın ex vivo tekniklerin uygulanması 15 hemen kurulmuş olan kanser hücre çizgileri ve hasta türetilmiş ksenograftları (PDX) moleküler analizi yanında konum...

Kanser terapötik olarak etkili geliştirilmesi son derece zor olduğu kanıtlanmıştır. Kanser hücre hatları ve tümör eksplant - hem de ksenograftları üzerinde yarım asır 1,2,3 kanser araştırmalarında kullanılmıştır. Bugüne kadar, ilaç hassasiyeti ve mukavemet hem de kurulmuş olan kanser hücre çizgileri ve hasta türetilmiş ksenograftlarının moleküler analizi (PDX) vazgeçilmezdir. Bununla birlikte, sabitlenen kanser hücresi hatlarında bileşiklerin testleri çoğu zaman in vivo etkinliğe işaret eden değildir ve özellikle de PDX modellerinde, hayvanlarda in vivo çalışmalarda da karşılık gelen çok pahalı ve zaman alıcı bir işlemdir. Bu model sistemlerde, tümör ilerlemesi ve tedavi stratejileri yanıt yerli mikroçevresinin etkisi hakkında bilgilendirmek için yani yetersizlik sınırlamalar, bu analizleri iltifat için ek yöntemler geliştirmek araştırma alanını açmıştır. Yakın zamandaki, artan dikkat hasta tum ex vivo analizi doğru ödeniyorKanser terapötik cevap, kanser hücrelerinin temel molekül bileşime özel değildir ama daha çok büyük, geleneksel yöntemler ile kültürleme değinmeyecek edilemez tümör hücresi mikro-6, 7 özelliği etkilenir olmasından dolayı daha iyi anlaşılması için eksplantlar ya da 4, 5 / veya PDX. yukarıdaki bağlamda ex vivo analizi (yani., bitişik çevreleyen tümör hücre mikro-etkisi) daha çok hücre izolatları 8, 9 ex vivo analizine göre, uygun bir primer tümör / metastaz bölme değerlendirilmesini gerektirir. Biz de hasta primer tümörlerin (hassas dilimlenmiş taze doku bölümleri yani.) Ve ilişkili metastazlar (yani, lenf düğümleri) sadakatle yanıt üzerine bilgilendirir (IC50), hedef dışı etkileri bir ex vivo tekniği burada rapor ve moleküler sağlar direnci ve geri besleme mekanizmalarının analizi. Fototerapi ek olarak, bir analiz bağıntılıbiyomarkör ve gen ekspresyon profilinin karşı utic duyarlılık / direnç (yani., yüksek ilaç tepkisi belirli bir biyolojik profil ile hastayı maçları) ilgi deneysel ilaca cevap daha muhtemel hastaları belirlemek için bir çaba yapılabilir. Bir çok parametre moda ex vivo tekniği ve değerlendirme uygulama hasta seçimi ve klinik sonuçların genel iyileştirilmesine yönelik bir harekettir. Ex vivo tedavi yanıtı analizi kanser tedavileri klinik öncesi ve klinik geliştirme standart bir araç haline gelebilir ve tedavi kalkınma stratejilerinde kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımına doğru bir adım olarak tasavvur edilir.

<table><tbody><tr><td>Vibratom Leica VT1000s</td><td>Leica</td><td>14047235613</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure agaroz</td><td>Invitrogen</td><td>16500500</td><td>Kullanmadan önce %4 ve %6 hazırlayın</td></tr><tr><td>Enjektör bıçağı</td><td>Ted Pella</td><td>121-4</td><td></td></tr><tr><td>MEM ile Penisilin&nbsp; + Streptomisin</td><td>Medya Çekirdek Tesisleri (MSKCC)</td><td></td><td>Medya Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi'nde hazırlanmıştır.</td></tr><tr><td>Neşter no. 10</td><td>Thermo Scientific</td><td>31-200-32</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık forseps</td><td>Cole-Parmer</td><td>84011182</td><td></td></tr><tr><td>Gömme kalıp</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimi</td><td>70181</td><td></td></tr><tr><td>FBS (ısı inaktive edilmiş)</td><td>Gemini</td><td>100106</td><td></td></tr><tr><td>24 kuyulu plakalar</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>Formalin (%10)</td><td>Sigma Diagnostics</td><td>SDHT501128&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>% 16 Formaldehit çözeltisi</td><td>Thermo Scientific</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>Gömme mikrosetler</td><td>Simport</td><td>M503-2</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (% 70)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>A405P-4</td><td></td></tr><tr><td>Su Banyosu</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-2SQ</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodalga</td><td>General Electric</td><td>ModelJES2051DNBB</td><td></td></tr><tr><td>Yapıştırıcı (Etil Siyanoakrilat)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1505-5G</td><td></td></tr><tr><td>10 mm tabaklar</td><td>BD Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>15 ml tüpler</td><td>BD Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr></tbody></table>

İlköğretim tümörleri ve / veya klinik öncesi için İlişkili metastazlarının ve tedavi klinik geliştirme ex vivo tedavisi tepki

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Yerleşik kanser hücre hatlarının moleküler analizi, son birkaç on yıldır kanser araştırmalarının temel dayanağı olmuştur. Hücre kültürü, terapötik duyarlılık ve direncin hem doğrudan hem de hızlı analizini sağlar. Bununla birlikte, son kanıtlar, terapötik yanıtın kanser hücrelerinin doğal moleküler bileşimine özel olmadığını, daha ziyade geleneksel kültürleme yöntemleriyle özetlenemeyen bir özellik olan tümör hücresi mikro ortamından büyük ölçüde etkilendiğini göstermektedir. Tümör ksenogreftlerinin uygulanması bile, ilaç dağıtımı/etkinliği hakkında zengin bilgi sağlasa da, insan tümörlerinde meydana gelen ve tümör yanıtını büyük ölçüde etkileyen tümör hücresi/mikroçevre karışmasını (yani çözünür faktörler) yakalayamaz. Bu kapsamda, preklinik ve klinik terapötik geliştirme için tedavi yanıtının doğrudan değerlendirilmesine olanak tanıyan bir ex vivo (taze doku kesiti) tekniği geliştirdik. Bu teknik, tedavi yanıtı boyunca tümör hücresi / mikro çevre bağlamında doku bütünlüğünü ve hücresel mimariyi korur ve ilaç etkinliğini değerlendirmek için daha kesin bir yol sağlar.

Bu çalışma için, ex vivo olarak teknik, bir ısı şoku proteini 90 inhibitörleri (Hsp90i) terapötik hassaslık / duyarlılık bir bağıntılı analizinde kullanıldı. Bu Hsp90i, meme kanseri primer tümörün, bir ER + invaziv duktal karsinom (IDC) ve ilişkili lenf nodu metastazı klinik öncesi değerlendirmede tedaviye yanıt ex vivo olarak analiz edildi   (Şekil 1). Birden fazla 200 um seri bölümleri Hsp90i bölgesinin sadece araç ve artan dozlarda (0.25, 0.50, 1.0 ve 2.5 uM) ile mu...

Kurulmuş kanser hücre hatları ve ksenogratflardır son birkaç yıldır kanser araştırma dayanak noktası olmuştur. Bununla birlikte, son bulgular terapötik tepki özellikle, tümör hücre mikro-ortamı tarafından etkilendiğini göstermektedir. Bu nedenle, ilaç geliştirme amaçları için primer tümör numunelerinin bir ex vivo analiz geliştirdik.

İlköğretim Tümörleri ve / veya klinik öncesi için İlişkili Metastazlarının ve Tedavi Klinik Geliştirme Ex Vivo Tedavisi Tepki

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

Aşağıdaki ex vivo ilaç yanıt tekniğinin amacı, yanıt veya IC 50 hedef dışı etkiler hakkında bilgi vermek ve direnç ve geri bildirim mekanizmalarının moleküler analizine izin vermek amacıyla ilaçların klinik öncesi ve klinik geliştirilmesinde uygulamaktır. Bu, ilk olarak, kesit almak için hemen laboratuvara taşınan canlı bir tümör örneğinin hızlı bir şekilde temin edilmesiyle elde edilir. Daha sonra, doku agros içine gömülür, bölümlere ayrılır ve çeşitli süreler boyunca terapötik olarak ilgili dozlarda ilgilenilen bir ilaçla tedavi edilir.Son olarak, kesitler, yanıt vermeyen tümör büyümesini geride bırakarak kuyucuklardan çıkarılır ve doku, tedavi edilen her bölümün bir H ve e slaytı hazırlanmadan önce formüle sabitlenir ve parafin gömülür. Sonuçlar, apoptozisi gösteren çekirdeklerin morfolojik değişikliklerine dayalı olarak ilaç tedavisini, tümörün yanıtını ve/veya metastazı göstermektedir. IC 50 ilaç yanıtının belirlenmesi, hedef dışı etkilerin tanımlanması ve yanıt vermeyen tümör büyümesinin direnç ve geri bildirim mekanizmalarının moleküler analizi değerlendirilir.Bu tekniğin, yerleşik kanser hücre dizilerinde veya primer hasta tümörlerinden hücresel izolatlarda ilaç yanıtının d

ex-vivo-treatment-response-primary-tumors-andor-associated-metastases

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bryostatin 1/Ionomycin Yoluyla Tümör-reaktif T hücrelerinin ex vivo Genişleme ve Ortak Gama Zinciri Sitokinler Formülasyon

Bu anti-kanser tedavisi için, görüntüleme yanıt için bir yöntem...

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

Burada, tümör hücresi metabolizmasının gerçek zamanlı izlenmesi, in vivo tavuk embriyosu koryo-allantoik membran (CAM) metastaz modeli ile birleştirildiğinde, tümör hücrelerini DNA'ya zarar veren kemoterapötiklere duyarlı hale getirme yetenekleri açısından yeni anti-kanser hedeflerini/ajanlarını değerlendirmek için kullanılır.

Kanser İlaç Duyarlılık Etkinliğinin Değerlendirilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; İn Vivo</em

Farelerde floresan haberci kullanılarak, akciğer metastazı olan tümör hücre stromanın etkileşimleri ex vivo canlı görüntüleme için nispeten basit bir yöntem tarif eder. iplik disk konfokal mikroskopi kullanılarak, bu teknik, en az 4 saat boyunca canlı hücre görüntülenmesini sağlayarak ve diğer enflamatuar akciğer koşulları incelemek için adapte edilebilir.

Ex Akciğer Metastaz ve Bunların mikroçevresinin Canlı Görüntüleme vivo

Bu protokol ortotopik pankreas tümörlerinin cerrahi nesil ve taze izole mürin pankreas tümörlerinin hızlı sindirim açıklar. Sindirimden sonra, canlı bağışıklık hücresi popülasyonları daha fazla downstream analizi için kullanılabilir, akış sitometri ile hücre içi sitokin tespiti için T hücrelerinin ex vivo stimülasyon dahil.

Ortotopik Pankreas Tümörlerinin Üretimi ve Tümör Efiltrasyonu T Hücre Sitotoksisitesinin Ex vivo Karakterizasyonu

Burada bir tümörün genomik yapısına dayalı olarak seçilen hedefe yönelik tedavilerin etkinliğini test etmek için bir protokol sayılacağız. Protokol, yapısal DNA düzenlemelerinin tanımlanması ve doğrulanması, hastaların tümörlerinin farelere engraftasyonu ve ilgili ilaçlara verilen yanıtların test edilmesi olarak tanımlanmaktadır.

Yapısal DNA Alterasyon Analizi ve Hasta Kaynaklı Ksenogreftler Kullanılarak Kanserde Hedefli Tedavilerin Test Edilmesi

Açıklanan yaklaşım, akciğerlerdeki metastaz sayısı ve boyutunun ölçülmesine ek olarak meme kanseri metastazı oluşumunun ve büyümesinin gerçek zamanlı olarak izlenmesine olanak sağlamak için deneysel kuyruk ven metastazı tahlillerini in vivo canlı hayvan görüntülemeile birleştirir.

Kuyruk Ven Metastaz Tahlilleri ve Gerçek Zamanlı Vivo Görüntüleme Kombine Kullanımı Meme Kanseri Metastatik Kolonizasyon ve Yük Akciğerlerde Quantify için

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Bu makalede, canlı, hastaya bağlı, preklinik bir model sisteminde tümör ilaç yanıtlarının değerlendirilmesi için hasta kaynaklı eksplantların üretimi, ilaç tedavisi ve analizi için yöntemler açıklanmaktadır.

Hasta Kaynaklı Tümör, Hastalarda İlaç Direncini Tahmin Etmek İçin "Canlı" Preklinik Bir Platform Olarak Eksplantlar

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Keşfedin kanser dokularında ilaç yanıtını değerlendirmek için ekz vivo kesit tekniğini. Bu yöntem tümör mikroçevresini koruyarak ilaç etkinliği, direnç mekanizmaları ve yan etkilerin hassas analizini sağlar.

İlköğretim Tümörleri ve / veya klinik öncesi için İlişkili Metastazlarının ve Tedavi Klinik Geliştirme Ex Vivo Tedavisi Tepki

Daha fazla video keşfet