Name: Fekal Glukokortikoid Analizi: Tek tırnaklılarda in Non-invaziv Adrenal İzleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Öğrenin tek tırnaklılarda invaziv olmayan adrenal izleme yöntemini; dışkı glukokortikoid metabolit analiziyle uzun vadeli stres yanıtlarını değerlendirin. Bu teknik evcil atlar ve vahşi zebra popülasyonları için hayvan refahı araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu el yazmasının üretimi için finansman Nottingham Trent Üniversitesi tarafından sağlanmıştır. Yazarlar, atlarının kullanımı ve protokolde kullanılmak üzere dışkı örneklerinin sağlanması için Üniversite avlu müdürü Anna Gregory'ye teşekkür etmek istiyor. Chester Hayvanat Bahçesi Yaban Hayatı Endokrinoloji Laboratuvarı'na da olanaklarının kullanımı için teşekkür ederiz.

Etik açıklama: Alan örnekleme ve hayvan denekleri prosedürleri Nottingham Trent Üniversitesi&#39;nde Animal, Kır ve Çevre Bilimi (ARES) Okulu tarafından onaylanmıştır. Dışkı Örneklerinde 1. Koleksiyonu NOT: Dışkı örnekleri ve metanol tutarken eldiven giyilmelidir. Bir hayvan gibi de giyilmelidir bir laboratuvar önlüğü gibi zoonotik hastalık, koruyucu giysiler muzdarip olabileceğini güçlü bir şüphe varsa. <ol><li> dışkılama aşağıdaki (birkaç saat için dakika içinde) en kısa sürede dışkı örnekleri toplamak ve örnek bir torbaya koyun. yaklaşık 10 g toplam ağırlığa sahip bir defecated numunenin üç ila beş Alt-numûnelerin al. zaman ve toplama, bireysel kimlik tarihi ile çanta Etiket ve analize kadar -20 ° C&#39;de örnek dondurmak. </li><li> tüm örnekleri dondurmak, hatayı en aza indirmek için -20 ° C kadar çalışma tamamlandığında sonra tek bir toplu olarak analiz için bir araya örnekleri toplamak. &lt;/ Li&gt; </ol> 2. Dışkı Hormon Ekstraksiyon <ol><li> Oda sıcaklığında çözülmeye dışkı örnekleri bırakın. </li><li> Numuneler el ile kendi örnek torba içinde her numune karıştırılarak homojenize emin olun. </li><li> Her bir numune, ağırlığa tekne bir mikro 0.50 dışkı maddesi (g 0.003 ±) ağırlığında için daha sonra bir 8 ml bir cam şişeye dışkı aktarın. Her bir numune için yeni bir ağırlık teknesi kullanın ve her bir numune arasında% 30 metanol ile cımbız temizleyin. </li><li> 5% 90 ml metanol ile, dışkı maddesinin 0.5 g &#39;ını: su, ve oda sıcaklığında bir orbital çalkalayıcıda O / N sallayın. </li><li> Ertesi sabah, örnek karıştırın ve daha sonra 600 g&#39;de 20 dakika boyunca santrifüj. </li><li> 37 ° C lik bir sıcaklığa ayarlanmış bir su banyosu içinde rafa 16 x 125 mm cam tüpe 2 ve yerine metanol fraksiyonu süzün. Bir çeker ocak içinde hava ile kuruyana kadar buharlaştırın. ekstraksiyon şişeyi yıkayın ve bertaraf için bir klinik atık torbasına kalan dışkı pelet yerleştirin. </li><li> % 100 1 ml metanol dışkı özü yeniden askıya ve 12 x 75 mm2 bir polipropilen tüpü içine transfer. Hemen analiz edilinceye kadar -20 ° C&#39;de kap saklayın. </li></ol> 3. Hormon Analizleri <ol><li> poliklonal kortikosteron CJM006 antiserum kullanarak bir enzim bağlantılı-immunoassay (EIA) ile analizi yürütmek. NOT:. İkinci ÇED (Kortizol R4866 antiserum test edilmiştir, fakat bu (Bölüm 4.1 bakınız) poliklonal kortikosteron CJM006 antiserum ve kortizol R4866 antiserum ve ilgili HRP en CJ Munro, California Üniversitesi tarafından sağlanan biyokimyasal doğrulama adımı gerçekleştirmek için başarısız, Davis, CA </li><li> 1 ile antiserumun seyreltilir: kaplama tamponu (0.05 M NaHCO3, pH 9.6) &#39;de 15,000 tekrar pipet ve 50 ul bir pipet kullanarak, / göz 50 ul, 96 oyuklu bir mikrotitre plakası yükleyin. Bir plaka kapatıcı ile örtün ve plaka, 4 ° C&#39;de O / N inkübe edin. (N, spesifik olmayan bağlayıcı gözenekler temsil kaplanmamış iki kuyu boşSB). </li><li> Kullanımdan hemen önce, bir otomatik mikrotitre plaka yıkayıcısı (0.15 M NaCl,% 0.05 Tween 20 yıkama çözeltisi) kullanılarak, mikro ölçüm levhaları, beş kez yıkayın. </li><li> 1000 ug / - NSB en için oyuk başına 50 ul ve &#39;sıfır&#39; kuyu [EIA tampon maddesi (0.1 M napo 4, 0.149 M NaCl,% 0.1 sığır serum albümini, pH 7.0) içinde, sadece] standartları (kortikosteron, 3.9 plakaları yük kuyu) veya uygun 01:20 ÇED tamponu seyreltilmiş dışkı özü numuneleri (,) bölüm 4.1&#39;e bakınız. Standartlar ve sıfır sırasıyla üç kez ve dört nüsha olarak çalıştırılmalıdır. Sulandırılmış dışkı özü örnekleri ve NSB en nüsha halinde çalıştırılmalıdır. </li><li> 70.000: 50 ul / oyuk ile 1 EIA tamponu içinde seyreltilmiş etiket yaban turpu peroksidaz bağı ᵻ hemen takip etmektedir. </li><li> Oda sıcaklığında 2 saat boyunca karanlıkta mikrotitre inkübe edin. </li><li> 100 ul ile karanlıkta, oda sıcaklığında plakalar yıkama çözeltisi ile 5 kez mikrotitre plakalar, yıkama ve inkübe / welRT substrat [0.4 mM 2,2&#39;-azino-di- (3-etilbenztiyazolin-sülfonik asit) diamonyum tuzu, 1.6 mM H2O 2, 0.05 M sitrat, pH 4.0] l. kullanımdan hemen önce alt-tabakanın hazırlanması. </li><li> mikrotitre plakaları okumak için 405 nm bir dalga boyunda bir spectrophometer kullanın. Sıfır kuyu optik yoğunluk ile 1.0 0.8 ulaştığında levha kuluçka tamamlandıktan olarak kabul edilir. </li><li> Tekrarlanabilirlik sağlamak için, yaklaşık% 30 (EIA standardı),% 50 (biyolojik numune örneğin, yerli at dışkı ekstresinin havuz) ve% 70 (EIA standardı) bağlamak için ÇED tamponunda seyreltilmiş kontrolleri [ÇED standartları ya da biyolojik bir örnek kullanınız ] sırasıyla &lt;% 10 değişim ve &lt;% 15 oranında bir içi ve inter-analiz katsayılarını göstermek için. </li></ol> 4. Enzim Linked-immunoassay: Çalışma Tür ve Sex Doğrulama <ol><li> Biyokimyasal Doğrulama (Paralellik) <ol><li> ÇED tampon kullanarak, toplanmış fekal ekstra bir seri seyreltme gerçekleştirmekct, ideal olarak birkaç bireylerden şüphelenilen yüksek ve düşük hormon konsantrasyonu örneklerinden alınan (aralık: temiz, 1: 8192: 2 ile 1) ve 3. bölümde açıklandığı gibi ÇED çalıştırın. NOT: Dışkı özler seri seyreltme standart eğri ve lineer regresyon sonuçlarına bir deplasman eğrisi paralel verim BIR paralellik sağlanmıştır kabul edilir R2&gt; 0.90, bir yamaç&gt; 0.50 ve p &lt;0.05 göstermektedir. Standart eğri üzerinde% 50 civarında bağlayan seri seyreltilmiş dışkı özü tüm dışkı özler çalıştırmak için ideal bir seyreltme düşünülmelidir (örneğin, 1:20). lineer regresyon sonuçları R2&gt; 0.90 ve p &lt;0.05 göstermek zaman tahlil üzerinde düşünülen hiçbir girişim yoktur. </li></ol></li><li> Biyokimyasal Doğrulama (Girişim) <ol><li> % 50 sulandırılmış uygun toplanmış seyreltilmiş dışkı ekstresi [200 ul paralleli tarafından belirlenen bağlanma ile (3.9 1000 ng / çukur kortikosteron sıfır) seri olarak seyreltilmiş standartların 200 ul Spikesm (1:20)] ve ÇED analiz arsa ardından bölüm 3&#39;teki gibi ÇED üzerinde çalışan gözlenen konsantrasyon eksi beklenen konsantrasyonuna karşı arka plan (sıfır numunenin konsantrasyonu). NOT: standartlara seyreltilmiş toplanmış fekal ekstresinin eklenmesi önemli ölçüde miktarı beklenen ve lineer regresyon sonuçlarını değiştirmez vermezse R 2&gt; 0.90, 1.0 ve p &lt;0.05 yakın bir eğim verir. EIA ile hiçbir girişim elde edilmiştir. </li></ol></li><li> Biyolojik Doğrulama: NOT: Seçilen ÇED ilgi hormon biyolojik ilgili değişiklikleri ölçmek yeteneğine sahip bir gösteri [örneğin, bir farmakolojik aşağıdaki glukokortikoid konsantrasyonlarda artış ya da biyolojik bir meydan okuma (ACTH genellikle lisanslı bir işlemdir) (örneğin, psikolojik ve / veya çevre; bir fırsatçı düzensiz olay olması daha muhtemeldir)]. <ol><li> Seçin, özü ve glukokortikoid metabolit konsantrasyonları için dışkı örnekleri analizönce ve zorlu bir olaydan sonra 3 - bölümlerde 1 detaylı süreci kullanarak. NOT: zorlu bir olay özgü türler olacaktır. Bir örnek yöntemi yerli at için aşağıda verilmiştir. Atlar için zorlu olaylarla dolu örnekler yönetimi 9 ve hayvancılık prosedürleri 16 kullanımı dahil, daha önce yayınlanmıştır. zorlu olayın ardından glukokortikoid metabolit konsantrasyonlarında anlamlı bir artış gözlendi ve istatistiksel analiz kullanılarak onaylanmalıdır. Bu, tekrarlı ölçümlerde, örnek tarih ve bireysel etkisini uygun olan yerlerde içermelidir. Biyolojik doğrulama sonra elde sayılır. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Mormède, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploration+of+the+hypothalamic-pituitary-adrenal+function+as+a+tool+to+evaluate+animal+welfare%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Exploration of the hypothalamic-pituitary-adrenal function as a tool to evaluate animal welfare.</a> Physiology and Behaviour. 92 (3), 317-339 (2007).</li>
<li>Lane, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+non-invasive+glucocorticoid+measures+be+used+as+reliable+indicators+of+stress+in+animals%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Welfare%22%5BJournal%5D)">Can non-invasive glucocorticoid measures be used as reliable indicators of stress in animals?</a> Animal Welfare. 15 (4), 331-342 (2006).</li>
<li>Morgan, K. N., Tromborg, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sources+of+stress+in+captivity%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Sources of stress in captivity.</a> Applied Animal Behaviour Science. 102, 262-302 (2007).</li>
<li>Nelson, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNelson%2C+RJ+%22An+introduction+to+behavioural+endocrinology+%283rd+Ed%29%22">An introduction to behavioural endocrinology (3rd Ed)</a>. , Sinaur associates Inc. Ohio, USA. 670-671 (2005).</li>
<li>Sapolsky, R. M., Romero, L. M., Munck, A. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+Do+Glucocorticoids+Influence+Stress+Responses%3F+Integrating+Permissive%2C+Suppressive%2C+Stimulatory%2C+and+Preparative+Actions%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">How Do Glucocorticoids Influence Stress Responses? Integrating Permissive, Suppressive, Stimulatory, and Preparative Actions.</a> Endocrine Reviews. 21 (1), 55-89 (2000).</li>
<li>Macdonald, K. M., Macdonald, I. A., Bokkenheuser, V. D., Winter, J., McLernon, A. M., Mosbach, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+of+steroids+in+the+human+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Degradation of steroids in the human gut.</a> Journal of Lipid Research. 24, 675-700 (1983).</li>
<li>Young, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+monitoring+of+adrenocortical+activity+in+carnivores+by+fecal+glucocorticoid+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+Comparative+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Non-invasive monitoring of adrenocortical activity in carnivores by fecal glucocorticoid analysis.</a> General and Comparative Endocrinology. 137, 148-165 (2004).</li>
<li>Merl, S., Scherzer, S., Palme, R., Mostl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+causes+increased+concentrations+of+glucocorticoid+metabolites+in+horse+faeces%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Equine+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Pain causes increased concentrations of glucocorticoid metabolites in horse faeces.</a> Journal of Equine Veterinary Science. 20, 586-590 (2000).</li>
<li>Yarnell, K., Hall, C., Royle, C., Walker, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Domesticated+horses+differ+in+their+behavioural+and+physiological+responses+to+isolated+and+group+housing%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Domesticated horses differ in their behavioural and physiological responses to isolated and group housing.</a> Physiology and Behaviour. 143, 51-57 (2015).</li>
<li>Wielebnowski, N., Watters, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applying+fecal+endocrine+monitoring+to+conservation+and+behaviour+studies+of+wild+mammals%3A+important+considerations+and+preliminary+tests%5BTitle%5D)+AND+%22Israel+journal+of+ecology+and+evolution%22%5BJournal%5D)">Applying fecal endocrine monitoring to conservation and behaviour studies of wild mammals: important considerations and preliminary tests.</a> Israel journal of ecology and evolution. 53, 439-460 (2007).</li>
<li>Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+fecal+steroids%3A+guidelines+for+a+practical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Measuring fecal steroids: guidelines for a practical application.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 75-80 (2005).</li>
<li>Uden, P., Rounsaville, G. R., Wiggans, G. R., Van Soest, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+measurement+of+liquid+and+solid+digesta+retention+in+ruminants%2C+equines+and+rabbits+given+timothy+hay%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">The measurement of liquid and solid digesta retention in ruminants, equines and rabbits given timothy hay.</a> British Journal of Nutrition. 48, 329-339 (1982).</li>
<li>Goymann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+monitoring+of+hormones+in+bird+droppings%3A+biological+validations%2C+sampling%2C+extraction%2C+sex+differences+and+the+influence+of+diet+on+hormone+metabolite+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Non-invasive monitoring of hormones in bird droppings: biological validations, sampling, extraction, sex differences and the influence of diet on hormone metabolite levels.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 35-53 (2005).</li>
<li>Touma, C., sachser, N., Mostl, E., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sex+and+time+of+day+on+metabolism+and+excretion+of+corticosterone+in+urine+and+feces+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+comparative+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Effects of sex and time of day on metabolism and excretion of corticosterone in urine and feces of mice.</a> General and comparative Endocrinology. 130, 267-278 (2003).</li>
<li>Rattenbacher, S., Mostl, E., Hackl, R., Ghareeb, K., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+corticosterone+metabolites+in+chicken+droppings%5BTitle%5D)+AND+%22British+Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Measurement of corticosterone metabolites in chicken droppings.</a> British Poultry Science. 45, 704-711 (2004).</li>
<li>Yarnell, K., Hall, C., Billett, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+assessment+of+the+aversive+nature+of+an+animal+management+procedure+using+behavioural+and+physiological+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behaviour%22%5BJournal%5D)">An assessment of the aversive nature of an animal management procedure using behavioural and physiological measures.</a> Physiology & Behaviour. 118, 32-39 (2013).</li>
<li>Goymann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+use+of+non-invasive+hormone+research+in+uncontrolled%2C+natural+environments%3A+the+problem+with+sex%2C+diet%2C+metabolic+rate+and+the+individual%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Ecology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">On the use of non-invasive hormone research in uncontrolled, natural environments: the problem with sex, diet, metabolic rate and the individual.</a> Methods in Ecology and Evolution. 3, 757-765 (2012).</li>
<li>Sheriff, M. J., Dantzer, B., Delehanty, B., Palme, R., Boonstra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+stress+in+wildlife%3A+techniques+for+quantifying+glucocorticoids%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Measuring stress in wildlife: techniques for quantifying glucocorticoids.</a> Oecologia. 166, 614-619 (2011).</li>
<li>Watson, R., Munro, C. J., Edwards, K. L., Norton, V., Brown, J. L., Walker, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+versatile+enzyme+immunoassay+for+non-invasive+assessment+of+glucocorticoid+metabolites+in+a+diversity+of+taxonomic+species%5BTitle%5D)+AND+%22General+Comparative+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Development of a versatile enzyme immunoassay for non-invasive assessment of glucocorticoid metabolites in a diversity of taxonomic species.</a> General Comparative Endocrinology. 186, 16-24 (2013).</li>
<li>Touma, C., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+fecal+glucocorticoid+metabolites+in+mammals+and+birds%3A+the+importance+of+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Measuring fecal glucocorticoid metabolites in mammals and birds: the importance of validation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 54-74 (2005).</li>
<li>Millspaugh, J. J., Washburn, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+fecal+glucocorticoid+metabolite+measures+in+conservation+biology+research%3A+considerations+for+application+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+Comparative+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Use of fecal glucocorticoid metabolite measures in conservation biology research: considerations for application and interpretation.</a> General and Comparative Endocrinology. 138, 189-199 (2004).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Dışkı kortikosteron analizi atlarda adrenal aktivitenin uzun süreli desen değerlendirmek için bir araç sağlar. Yöntemin non-invaziv doğa tükürük ve plazma analizi 9 olmak üzere adrenal aktivitesini değerlendirmek için kullanılan diğer örnekleme yöntemleri karıştırıcı etkilerini ortadan kaldırmaktadır. Buna ek olarak teknik ücretsiz değişen atları okuyan eğer net bir non-invaziv bir avantaja sahiptir. Bu yöntemle ve uygun kullanımıyla ilgili görüşmek üzere çeşitli kilit nokta vardı...

yöntem tarif amaçları adrenal aktivite non-invaziv bir değerlendirme sağlamak amacıyla at dışkısı kortikosteron konsantrasyonları analiz etmek. hipotalamus-hipofiz-adrenal (HPA) eksen aktivitesinin ölçülmesi esir ve yerli türler hem potansiyel caydırıcı durumlara tepki incelemek için kabul edilmiş bir yaklaşımdır. Referans tekniği ve en yaygın olarak kullanılan yöntem, ancak bu tür dışkı analizi gibi alternatif yöntemler bilgilerini kadar tür izleme olanağı kan örneği kendisinin neden olduğu stres üstesinden gelmek ve sağlamak amacıyla geliştirilmiştir kan plazması 1 &#39;in kullanımı olup. caydırıcı bir durum sırasında, fizyolojik homeostasis bozulur. ön hipofiz bezi üzerinde hareket eder ve adrenokortikotropik hormon (ACTH) salınımını uyarır salgılatıcı hormon (CRH) kortikotropin beyin sürümlerde hipotalamus. ACTH kan dolaşımına girer ve türünden salgılaması için adrenal korteksi uyarırs, belirli glukokortikoidler (GC). Glukokortikoidler yakından oldukça tutarlı nedenle genellikle diğer stres bağlantılı hormonların üzerinde 2 tercih ölçülen tüm enerji artan devletler üretilen daha stresli olaylarla bağlantılıdır. Glukokortikoidler atların birçok adaptif etkileri sorumludur. Enerji hızlı yağlı asitler ve glukoz şeklinde vücuda depolama sitelerinden mobilize, oksijen alımı sensör fonksiyonu 3 geliştirilmiş ve kan akımı hareket 4 için gerekli olmayan alanlara azaltılır, artar. Yanı sıra bir başa çıkma mekanizması olarak hareket olarak, Glukokortikoid stres kaynaklı artış da sonraki stresör 5 için hayvan hazırlamak için yardımcı olabilir. Hormon plazmadaki düzeyleri ve tükürük değerlendirilmesi gaita önlemler hormon metabolik son ürünü metabolitleri ölçmek, ancak gerçek dolaşan hormonu ölçüm içerir. Sirkülasyon steroid l katabolize edilenonlar bağırsak parça 6 içinde bakteri florasının enzimatik faaliyetleri kolaylaştırdı ileri değişikliklere uğrarlar safra için atılımı önce Iver. Bu nedenle, kan glukokortikoid yönelik bağışıklık dışkı glukokortikoid metabolitlerin 7 analizi için uygun olmayabilir. Dışkı toplanması, at için bir rahatsızlık ile gerçekleştirilebilir gibi, kortikosteron için dışkı analizi, koşullar, bir dizi HPA etkinliğini izlemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Atların dışkı içinde yükseltilmiş kortikosteron ameliyat sonrası tedavisi için veteriner hekimliğinde 8 boyunca ve kısıtlayıcı yuva 9 da dahil olmak üzere, potansiyel olarak caydırıcı durumlara cevap olarak bildirilmiştir. Fekal örnekleme zamanla toplanmış glukokortikoid düzeyi ziyade uzun vadeli, kronik veya mevsimsel desenleri 10 izlenmesi için uygun hale plazma ve tükürük tarafından sunulan zaman örnekleme noktasını yansıtır. Nedeniyle non-invaziv içinYöntemin niteliği, numuneler yakalama veya bağlama 11 gerek kalmadan bir birey için, art arda toplanabilir. Bir numune alma protokolü planlama Ancak, türe özgü bağırsaktan geçiş süresi dikkate alınmalıdır. Atlarda, bağırsaktan geçiş süresi bu • durumda, böbrek üstü tepkisi ve daha sonra kortikosteron metabolitleri HPA ekseninin ilk aktivasyon bir gün sonra dışkı ile saptanabilir yaklaşık 18 saat 12&#39;dir. Non-invaziv immunoassay teknikleri kullanılarak zaman araştırılan türler için dikkatli bir doğrulama 13 esastır. Buna ek olarak, hormon metabolit boşaltım cinsiyet farkları nedeniyle metabolizma hızı ve fareler 14. ve tavuk 15 de dahil olmak üzere çeşitli türlerin atılır kortikosteron metaboliti türü farklılıkları muhtemelen bildirilmiştir. th ayrıntılı gibi deney erkek ve dişi, evcil atlar uygulamalarında kullanmak için geçerli olan bu yöntemin bir parçası olarak, bu nedenle önemlie protokolü. Cinsiyetler arasındaki hormon metabolizmasında Bu fark ele alınması ve tahlil doğrulama parçası olarak dahil nadiren edilir henüz veri kalitesi için sonuçları vardır. Bu non-invaziv yöntem yerli atlar adrenal aktivitenin uzun süreli değerlendirmesini sağlar. protokol ayrıntıları testin geçerliliği ve tahlil tekniği kendisi hem de.

<table><tbody><tr><td>Kortikosteron antikoru & HRP kiti</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>Artık UC Davis aracılığıyla mevcut değil - lütfen Arbor Tahlillerine bakın</td></tr><tr><td>Kortizol antikoru & HRP kiti</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>Artık UC Davis'te mevcut değil - lütfen Arbor Tahlillerine bakın</td></tr><tr><td>Kortikosteron sentetik standart hormon</td><td>Sigma Aldrich</td><td>50-23-7</td><td>Yutulması veya cilt teması halinde Harnful. Çeker ocakta kullanım</td></tr><tr><td>Kortizol sentetik standart hormon</td><td>Sigma Aldrich</td><td>15087-01-1</td><td>Yutulması veya cilt teması halinde zararlıdır. Çeker ocakta kullanım</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>67-56-1</td><td>Tahriş edici. Çeker ocakta kullanım</td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>144-55-8</td><td>Tahriş Edici</td></tr><tr><td>Sodyum Karbonat Susuz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>497-19-8</td><td>Tahriş</td></tr><tr><td>Edici Sodyum Fosfat Dibazik</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7558-79-4</td><td>Tahriş</td></tr><tr><td>Edici Sodyum Fosfat Monobazik</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10049-21-5</td><td>Tahriş Edici</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9048-46-8</td><td>Tahriş Edici</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9005-64-5</td><td>Tahriş Edici</td></tr><tr><td>Sitrik Asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>77-92-9</td><td>Tahriş Edici</td></tr><tr><td>ABTS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>30931-67-0</td><td>Tahriş</td></tr><tr><td>Edici Hidrojen Peroksit %30</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>7722-84-1</td><td>Tahriş</td></tr><tr><td>Edici Sodyum</td><td>Klorür Sigma Aldrich</td><td>7647-14-5</td><td>Tahriş Edici</td></tr><tr><td>Tampon kapsüller - pH 4</td><td>VWR</td><td>332732B</td><td></td></tr><tr><td>Tampon kapsüller - pH 7</td><td>VWR</td><td>332742D</td><td></td></tr><tr><td>Tampon kapsüller - pH 10</td><td>VWR</td><td>332762H</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik Asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>435570</td><td>Tahriş edici. Çeker ocakta kullanım</td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>Tahriş Edici</td></tr><tr><td>Analitik terazi</td><td>Fisher Scientific</td><td>BFS-525-010A</td><td></td></tr><tr><td>Hava kompresörü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bilgisayar + yazıcı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>buzdolabı-dondurucu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kurutma aparat</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>+ boru</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yanıcı sıvı saklama dolabı</td><td>VWR</td><td>649-002</td><td></td></tr><tr><td>Çeker ocak</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıcak plaka karıştırıcı</td><td>VWR</td><td>640-282</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka okuyucu</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka yıkayıcı</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research&reg; pipetler - çoklu paket seçeneği 2</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet - 1.000 ve mikro; l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet - 200 & l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet - 20 & l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tekrarlayıcı pipet</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet dolgusu</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Orbital çalkalayıcı</td><td>Progen Bilimsel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonikatör</td><td>Hilsonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıcak su banyosu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Su arıtma sistemi</td><td>Kırlangıç</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fekal glukokortikoid analizi: tek tırnaklılarda in non-invaziv adrenal İzleme

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

At türlerinde adrenal aktivite, kortikosteron metabolitleri için dışkı analizi ile değerlendirilebilir. Potansiyel olarak caydırıcı bir durum sırasında, beyindeki hipotalamustan kortikotropin salgılayan hormon (CRH) salınır. Bu, hipofiz bezinden adrenokortikotrofik hormonun (ACTH) salınımını uyarır ve bu da adrenal bezden glukokortikoidlerin salınmasını uyarır. Atlarda, glukokortikoid kortikosteron, at uçuş davranışını desteklemek için gereken çeşitli adaptasyonlardan ve ardından caydırıcı durumdan uzaklaştırılmasından sorumludur. Kortikosteron metabolitleri atların dışkısında tespit edilebilir ve değerlendirme, uzun vadeli adrenal aktivite modellerini değerlendirmek için invaziv olmayan bir seçenek sunar. Dışkı değerlendirmesi, kan plazması ve tükürük analizi dahil olmak üzere adrenal aktiviteyi izleyen diğer tekniklere göre avantajlar sunar. Yöntemin non-invaziv doğası, sonuçları karıştırabilecek örnekleme stresini önler. Aynı zamanda zaman içinde tekrarlanan örnekleme fırsatı sağlar ve serbest dolaşan atlarda yapılan çalışmalar için idealdir. Bu protokol, ilişkili biyokimyasal doğrulamaya ek olarak, kortikosteron için dışkıyı değerlendirmek için kullanılan enzime bağlı immünolojik testi (EIA) tanımlar.

Yurtiçi atları (n = 16, 8 kısrak, 8 geldings) 15 yıl (± 3) yaş ortalaması ile cinsiyete ve sosyal izolasyon (n = 4 at / tedavi) artan seviyeleri ile dört konut tasarımları tabi göre gruplandırıldı. yakından doğal yaşam simülasyonu, bir sürü ortamında yaşayan Konut 1. katılan atlar. kapalı ahırda çiftler yaşayan Konut 2 dahil atlar. Konut 3 tutulan atlar ahırlarda ancak diğer atlar ve atlar konut 4 dahil toplam izolasyon görsel temas yalnız ev sahipliği yapmıştır. <p class="jove_conte...

At türlerinde adrenal aktivite, kortikosteron metabolitleri için dışkı analizi ile değerlendirilebilir. Yöntem, hem evcil hem de serbest dolaşan atlarda uzun vadeli kalıpları değerlendirmek için invaziv olmayan bir seçenek sunar. Bu protokol, ilgili enzime bağlı immünolojik testi ve ilişkili biyokimyasal doğrulamayı tanımlar.

Fekal Glukokortikoid Analizi: Tek tırnaklılarda in Non-invaziv Adrenal İzleme

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

Bu prosedürün genel amacı, dışkı glukokortikoid metabolitlerinin ekstraksiyonu ve analizi yoluyla equine türlerinde adrenal aktivitenin invaziv olmayan bir yöntemle nasıl değerlendirilebileceğini göstermektir. Bu yöntem, evcil atlardaki bakımevi protokollerinin fizyolojik etkilerinden Afrika zebra vahşi popülasyonlarına kadar, refah değerlendirmesi alanındaki temel soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hem evcil hem de serbest dolaşan atlarda uzun süreli adrenal aktiviteyi ölçmek için invaziv olmayan bir seçenek sunmasıdır.Deney günü, oda sıcaklığında çözündürme işleminden sonra, her bir örnek torbası içerisinde karıştırarak dışkı örneklerini manuel olarak homojenize edin. Ardından, her bir örnek için temiz bir tartım kabı kullanarak mikro terazide uygun miktarda dışkı ölçün ve örnekleri bireysel sekiz mililitrelik cam şişelere aktarın. Daha sonra, her örneğe beş mililitre suda %90 metanol ekleyin ve örnekleri oda sıcaklığında, orbital sallayıcıda gece boyunca sallayın.Ertesi sabah, örnekleri vorteksleyin ve santrifüjleyin. Santrifüj işleminin sonunda, metanol fraksiyonlarını ayrı 16 x 125 mm'lik cam tüplere boşaltın. Ardından tüpleri kısa süreliğine

fecal-glucocorticoid-analysis-non-invasive-adrenal-monitoring

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Zebra balığı larvalarını kullanarak glukokortikoid stres hormonu sinyali için bir kimyasal tarama sisteminin prosedürünü ve veri analizini açıklıyoruz: Glukokortikoid Duyarlı İn vivo Zebra Balığı Luciferaz Aktivitesi (GRIZLY) testi. Test, metabolizasyon gerektiren veya endojen glukokortikoid üretimini etkileyen bileşikler tarafından glukokortikoid sinyalizasyonu üzerindeki etkileri hassas ve spesifik olarak tespit eder.

Bir Zebra balığı Larva Lusıferaz Muhabir Sistemi ile glukokortikoid Signaling&#39;den için bir Kimyasal Tarama Prosedürü

Kortizol (CORT) insanlarda ve primatlarda artan saç gövdesine birikir. Biz yüksek hassasiyet ve duyarlılığı ile saç Cort çıkarma ve analiz yöntemleri açıklanmaktadır. Saç CORT ölçülmesi özellikle aya haftalık dönemler boyunca kronik stres değerlendirmek için çok uygundur.

Ekstraksiyon ve İnsan ve Maymun Saç gelen Kortizol Analizi

Stres invazif olmayan bir değerlendirme için bir ihtiyaç vardır. Bu yazıda hafif akut stres yaban mavi göğüsleri göz bölge sıcaklığında önemli bir cevap algılamak için termal görüntüleme kullanarak basit bir protokol açıklar.

Termal Görüntüleme olmayan invaziv Yarı Kuşlar Stres Çalışması için

'Süper Seçici' adrenal Venöz örnekleme (ssAVS, gelen bir segmental adrenal Venöz örnekleme olarak da bilinir: söylüyor) hormonların aşırı miktarda üretmek adrenal segment(s) tanımlamak için bir mikro-kateter kullanarak gerçekleştirildi. SsAVS tekniği tanımlanmıştır, adrenal segmental lesion(s) ssAVS tarafından tespit edilmiştir durumlarda sunuldu ve ssAVS gelecek adrenal araştırma kullanışlılığı tartışıldı.

Bir roman yöntemi: Süper seçici Adrenal Venöz örnekleme

Adrenal korteks tarafından salgılanan hormon stres ve hastalıklara karşı hayvanlar için hayati önem taşımaktadır. Burada, adrenal hücreler kültür birincil fare için bir iletişim kuralı mevcut. Adrenal steroidogenesis ve lipit sentezi ilgi reaktif mekanizmalarının araştırılması için iyi bir tüp bebek platform olabilir.

Sıçan Adrenokortikal hücreleri ve deneyleri Steroidogenic fonksiyonların birincil kültür

Koala kürkünden kortizol ölçümü için en uygun ekstraksiyon çözücüsünü belirlemek için bir protokol sayılacağız. Bu protokolde kullanılan çözücüler metanol, etanol ve isopropanol'dür. Optimal bir ekstraksiyon çözücü belirlenmesi koalalar üzerinde kronik stresin etkisini belirlemek için güvenilir ölçüm kürk yardımcı olacaktır.

Koalak'da Kortizol Ölçümü (Phascolarctos cinereus) Kürk

Enterik glia, postoperatif komplikasyonlar da dahil olmak üzere bağırsak homeostazı ve hastalık süreçlerindeki rolleri nedeniyle giderek daha fazla tanınmaktadır. Acil keşif laparotomisinden iyileşen at hastaları, yüksek inflamatuar postoperatif durum riskinden muzdariptir ve bu da çalışma için tekrarlanabilir at enterik glial primer hücre kültürü oluşturmanın önemini vurgulamaktadır.

At Enterik Glial Kültürü ve At Kolikinde Nöral İnflamatuar Mekanizmanın Çalışmasına Uygulama

Fare adrenal korteks için zona glomerulosa ve zona fasciculata ile zenginleştirilmiş hücrelerin 2D birincil kültürlerini oluşturmak amacıyla sağlam ve tekrarlanabilir bir yaklaşım geliştirildi. Bu sistem, her bölgenin temel moleküler ve fonksiyonel özelliklerini koruyarak sinyal yolları, hormon üretimi ve adrenal kortikal hücre davranışının odaklanmış şekilde incelenmesini mümkün kılar.

Fare Adrenal Korteksinden Bölge Zenginleştirilmiş Birincil Kültürlerin Oluşumu

Adrenal medüller kromafin hücre kültürü sistemleri, in vitro ortamda bir uyarım-salgılanması kaplin çalışması için son derece yararlı. Bu protokol adrenaller incelemek ve sonra Adrenal korteks uzak sıyırma medüller bölgede izole etmek için kullanılan yöntemi göstermektedir. Tek kromafin hücrelerine medulla sindirim sonra gösterilmiştir.

Fare Adrenal Kromafin Hücre İzolasyonu

Değerlendirilmesi için yeni kök hücre tedavileri ile enjekte edilen hücrelerin in vivo takip non-invaziv önemlidir. Bu video demir oksit bazlı kontrast ajanlar ile insan mezenkimal ve embriyonik kök hücreleri, in vivo sonraki MR, in vivo olarak nasıl etiketlemek için size gösterecektir.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

Öğrenin tek tırnaklılarda invaziv olmayan adrenal izleme yöntemini; dışkı glukokortikoid metabolit analiziyle uzun vadeli stres yanıtlarını değerlendirin. Bu teknik evcil atlar ve vahşi zebra popülasyonları için hayvan refahı araştırmalarına katkı sağlar.

Fekal Glukokortikoid Analizi: Tek tırnaklılarda in Non-invaziv Adrenal İzleme

Daha fazla video keşfet