Name: Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Keşfedin insan glioblastoma hücrelerinin invaziv göç davranışlarını organotipik dilim kültürü modeliyle. Bu yöntem, tümör işgalini ve hasta spesifik tedavi yanıtlarını in vivo doku mimarisini koruyarak analiz etmenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Burada açıklanan dil kültürü konfokal görüntüleme protokolüne teknik uzmanlıkları ve katkıları için Dr. Lee Niswander ve Dr. Rada Massarwa&#39;ya teşekkür etmek istiyoruz. Dr. Kalen Dionne, beyin tümörü doku dilimleme ve kültür parametrelerinin optimize edilmesine ilişkin uzmanlık sağlayan ek teşekkürler sayesinde teşekkür ederiz.

<ol><li>Beadle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+myosin+II+in+glioma+invasion+of+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">The role of myosin II in glioma invasion of the brain.</a> Mol Biol Cell. 19, 3357-3368 (2008).</li>
<li>Farin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplanted+glioma+cells+migrate+and+proliferate+on+host+brain+vasculature%3A+a+dynamic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Transplanted glioma cells migrate and proliferate on host brain vasculature: a dynamic analysis.</a> Glia. 53, 799-808 (2006).</li>
<li>Panopoulos, A., Howell, M., Fotedar, R., Margolis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+motility+occurs+in+the+absence+of+actin+polymer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma motility occurs in the absence of actin polymer.</a> Mol Biol Cell. 22, 2212-2220 (2011).</li>
<li>Ivkovic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+inhibition+of+myosin+II+effectively+blocks+glioma+invasion+in+the+presence+of+multiple+motogens%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Direct inhibition of myosin II effectively blocks glioma invasion in the presence of multiple motogens.</a> Mol Biol Cell. 23, 533-542 (2012).</li>
<li>Assanah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+progenitors+in+adult+white+matter+are+driven+to+form+malignant+gliomas+by+platelet-derived+growth+factor-expressing+retroviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial progenitors in adult white matter are driven to form malignant gliomas by platelet-derived growth factor-expressing retroviruses.</a> J Neurosci. 26, 6781-6790 (2006).</li>
<li>Chaichana, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+glial+cytoarchitecture+from+ex+vivo+human+tumor+and+non-tumor+cerebral+cortical+explants%3A+A+human+model+to+study+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Preservation of glial cytoarchitecture from ex vivo human tumor and non-tumor cerebral cortical explants: A human model to study neurological diseases.</a> J Neurosci Methods. 164, 261-270 (2007).</li>
<li>Grube, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+fatty+acid+synthase+in+human+gliomas+correlates+with+the+WHO+tumor+grade+and+inhibition+with+Orlistat+reduces+cell+viability+and+triggers+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Overexpression of fatty acid synthase in human gliomas correlates with the WHO tumor grade and inhibition with Orlistat reduces cell viability and triggers apoptosis.</a> J Neurooncol. 118, 277-287 (2014).</li>
<li>Hovinga, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+notch+signaling+in+glioblastoma+targets+cancer+stem+cells+via+an+endothelial+cell+intermediate%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Inhibition of notch signaling in glioblastoma targets cancer stem cells via an endothelial cell intermediate.</a> Stem Cells. 28, 1019-1029 (2010).</li>
<li>Merz, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+cultures+of+human+glioblastoma+reveal+different+susceptibilities+to+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice cultures of human glioblastoma reveal different susceptibilities to treatments.</a> Neurooncol. 15, 670-681 (2013).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vorinostat+modulates+cell+cycle+regulatory+proteins+in+glioma+cells+and+human+glioma+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Vorinostat modulates cell cycle regulatory proteins in glioma cells and human glioma slice cultures.</a> J Neurooncol. 105, 241-251 (2011).</li>
<li>Verhaak, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+genomic+analysis+identifies+clinically+relevant+subtypes+of+glioblastoma+characterized+by+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22in+PDGFRA%2C+IDH1%2C+EGFR%2C+and+NF1.+Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Integrated genomic analysis identifies clinically relevant subtypes of glioblastoma characterized by abnormalities.</a> in PDGFRA, IDH1, EGFR, and NF1. Cancer cell. 17, 98-110 (2010).</li>
<li>Gill, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI-localized+biopsies+reveal+subtype-specific+differences+in+molecular+and+cellular+composition+at+the+margins+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">MRI-localized biopsies reveal subtype-specific differences in molecular and cellular composition at the margins of glioblastoma.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 111, 12550-12555 (2014).</li>
<li>Snuderl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+amplification+of+multiple+receptor+tyrosine+kinase+genes+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Mosaic amplification of multiple receptor tyrosine kinase genes in glioblastoma.</a> Cancer cell. 20, 810-817 (2011).</li>
<li>Kakita, A., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+and+dynamics+of+SVZ+cell+migration+in+the+postnatal+forebrain%3A+monitoring+living+progenitors+in+slice+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Patterns and dynamics of SVZ cell migration in the postnatal forebrain: monitoring living progenitors in slice preparations.</a> Neuron. 23, 461-472 (1999).</li>
<li>Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I., van Cappellen, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+in+cell+and+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Sem+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tracking in cell and developmental biology.</a> Sem Cell Dev Biol. 20, 894-902 (2009).</li>
<li>Parker, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gefitinib+selectively+inhibits+tumor+cell+migration+in+EGFR-amplified+human+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Gefitinib selectively inhibits tumor cell migration in EGFR-amplified human glioblastoma.</a> Neurooncol. 15, 1048-1057 (2013).</li>
<li>Brat, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudopalisades+in+glioblastoma+are+hypoxic%2C+express+extracellular+matrix+proteases%2C+and+are+formed+by+an+actively+migrating+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Pseudopalisades in glioblastoma are hypoxic, express extracellular matrix proteases, and are formed by an actively migrating cell population.</a> Cancer Res. 64, 920-927 (2004).</li>
<li>Shweiki, D., Itin, A., Soffer, D., Keshet, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+induced+by+hypoxia+may+mediate+hypoxia-initiated+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor induced by hypoxia may mediate hypoxia-initiated angiogenesis.</a> Nature. 359, 843-845 (1992).</li>
<li>Shamir, E. R., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organotypic+culture%3A+experimental+models+of+mammalian+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organotypic culture: experimental models of mammalian biology and disease.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15, 647-664 (2014).</li>
<li>Charles, N. A., Holland, E. C., Gilbertson, R., Glass, R., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21446047">The brain tumor microenvironment.</a> Glia. 60, 502-514 (2012).</li>
<li>Di Cristofori, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vacuolar+H%2B+ATPase+is+a+novel+therapeutic+target+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">The vacuolar H+ ATPase is a novel therapeutic target for glioblastoma.</a> Oncotarget. 6, 17514-17513 (2015).</li>
<li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> Proc Natl Acad Sci USA. , 8352-8356 (2010).</li>
<li>Gerlach, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slice+cultures+from+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%3A+a+novel+test+system+for+drug+susceptibility+and+mechanisms+of+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Slice cultures from head and neck squamous cell carcinoma: a novel test system for drug susceptibility and mechanisms of resistance.</a> Br J Cancer. 110, 479-488 (2014).</li>
<li>Holliday, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+practicalities+of+using+tissue+slices+as+preclinical+organotypic+breast+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">The practicalities of using tissue slices as preclinical organotypic breast cancer models.</a> J Clin Pathol. 66, 253-255 (2013).</li>
<li>Maund, S. L., Nolley, R., Peehl, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+comprehensive+characterization+of+a+faithful+tissue+culture+model+of+the+benign+and+malignant+human+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Optimization and comprehensive characterization of a faithful tissue culture model of the benign and malignant human prostate.</a> Lab Invest. 94, 208-221 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

İnsan kanser dokusundan alınmış organotipik dilim kültürleri, klinik öncesi translasyonel deneyler için cazip ve az kullanılan bir platform sağlar. Tümör hücrelerinin doğal tümör mikro ortamındaki göç, çoğalma ve hücre ölümüne ilişkin nüfus düzeyindeki davranışlarının anlaşılması eksiktir. Kritik olarak, hücre davranışı seviyesinde dinamik, zamanla çözülmüş biçimde terapiye tümör tepkisinin incelenmesi, yeni tedavi direnci mekanizmalarına ışık tutabilir. İnsan tümör dilimi kültürleri, insan hastalık süreci ile mevcut <e...

Glioblastomun (GBM) laboratuvar çalışması, insan hastalığının gerekli patolojik özelliklerini, yani tümör hücresi migrasyonu ve istilasını sadakatle tekrarlayan model eksikliği nedeniyle engellenmektedir. 2D ve 3D in vitro invazyon testlerinin yanı sıra 3B kemirgen dilim kültür modelleri ile karşılaştırmalı çalışmalar, bu iki bağlamda mekanik olarak birbirinden farklı hücresel göç programlarını ortaya çıkarmıştır, bu bulgular 2D sistemlerinden insan hastalığına 1 , 2 , 3&#39;e çevrilebilirliği potansiyel olarak sınırlayıcıdır. Burada tarif edilen organotipik tümör dilim kültürü ve görüntüleme paradigması, cerrahi rezeksiyonla elde edilen ex vivo insan tümör dokusu dilimleri içindeki tümör hücresi göçünün incelenmesine izin verir. Böylece, cerrahi olarak rezeke edilen tümör dokusunun dilim kültürleri, zaman atlamalı konfokal mikroskopi ile birleştiğinde yerli halktaki tümör hücresi göçünü incelemek için bir platform oluştururlarDoku eritme veya kültür pasajı olmaksızın mikro ortam. İnsan tümörü ksenograftlarından, retroviral kaynaklı tümörlerden ve tümör invazyonu 1 , 2 , 3 , 4 , 5&#39;i çalışmak için hücresel bindirmelerden üretilen GBM&#39;nin kemirgen beyin dilim kültürü modellerini kullanan geniş literatür var. Yakın geçmişte, birkaç grup organotipik dilim kültürlerinin üretimini doğrudan insan GBM dokusundan 6 , 7 , 8 , 9 , 10&#39;dan anlattı. Bununla birlikte, dilimleme tekniği ve kültür ortamı ile ilgili yayınlanmış protokoller arasında belirgin bir farklılık var. Ayrıca, organotipik dilim kültürlerinin kullanımı, hücre sinyalindeki değişiklikleri içeren statik deneysel son noktalara odaklanmıştırNg, çoğalma ve ölüm. Burada tarif edilen protokol, zamana bağlı lokal tarama konfokal mikroskobu ile dinamik tümör hücresi davranışlarının zaman çözümlemeli gözlemini dahil ederek önceki dilim kültürü paradigmalarını genişletir. Arası 11 ve tümör içi, 12 yeni keşfi, insan GBM&#39;de 13 genetik çeşitlilik tümör hücre davranışları ve tedavi tümör yanıtı üzerindeki etkileri ile bu heterojenite bağlama öneminin altını çizmektedir. Burada, bir insan kanser dokusundan doğrudan dilim kültürlerinin kullanımı için, yakın zamanda gerçek zamanlı olarak tümör hücresi göçünü görselleştirmek için aerodinamik ve tekrarlanabilir bir protokol bildirdik.

<table><tbody><tr><td>DMEM Yüksek Glikoz&nbsp;</td><td>İnvitrojen (Gibco)</td><td>11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Neurobazal-A Orta, eksi fenol kırmızısı</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Takviyesi (50x), serum içermez</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL)</td><td>İnvitrojen (Gibco)</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Takviyesi</td><td>İnvitrojen (Gibco)</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>İnvitrojen (Gibco)</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>İnvitrojen (Gibco)</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Nistatin Süspansiyon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N1638-20ML</td><td>DPBS'de 10.000 birim / mL, aseptik olarak işlenmiş, BioReagent, hücre kültürü için uygun</td></tr><tr><td>UltraPure Düşük Erime Noktalı Agaroz</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>16520-050</td><td>65.5 &#176'da erir; C, 37 & # 176'da sıvı kalır; C ve hızla 25 &# 176;C'nin altına düşer.</td></tr><tr><td>Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 647'den İzolektin GS-IB4 Eşlenik</td><td>Termo Fisher (Moleküler Problar)</td> <td>I32450</td><td>Mikroglia/Makrofajları etiketlemek için ortamlarda kullanılır</td></tr><tr><td>pRetroX-IRES-ZsGreen1 Vector</td><td>Clonetech</td><td>632520</td><td></td></tr><tr><td>Retro-X Konsantratör&nbsp;</td><td>Clonetech</td><td>31455</td><td>Viral süpernatanların ultrasantrifüj olmayan konsantrasyonu için bağlayıcı reçine</td></tr><tr><td>pVSG-G Vector</td><td>Clonetech</td><td>631530</td>, <td>Retro-X Evrensel Retroviral Ekspresyon Sisteminin bir parçası</td></tr><tr><td>GP2-293 Viral paketleme hücreleri</td><td>Clonetech</td><td>631530</td>, <td>Retro-X Evrensel Retroviral Ekspresyon Sisteminin bir parçası</td></tr><tr><td>Siyanoakrilat Tutkal (Süper Yapıştırıcı)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z105899</td><td>Orta viskoziteli</td></tr><tr><td><güçlü>Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peel-A-Way Gömme Kalıbı (Kare - S22)</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>18646A-1</td><td>Tümör örneği gömme için kalıplar</td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Mikro Spatulalar</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50823</td><td>Kaşık bıçağının boynunda 45 derece bükme aleti</td></tr><tr><td>Kavisli Fisherbrand Diseksiyon İnce Sivri Forseps</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>08-875</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kenarlı Tıraş Bıçağı (Amerikan Güvenlik Tıraş Makineleri)</td><td>Fisher Scientific</td><td>17-989-001</td><td>Bıçak kenarı 0,009 "kalınlığındadır. Vibratom üzerine yüklenmeden önce kıvrımlı künt kenarlı kapak çıkarılır.</td></tr><tr><td>Leica VT1000 S Vibratom</td><td>Leica Biosystems</td><td>VT1000 S</td><td></td></tr><tr><td>Hidrofilik PTFE hücre kültürü insert&nbsp;</td><td>EMD Kırlangıç</td><td>PICM0RG50</td><td>30 mm, hidrofilik PTFE, 0.4 & m gözenek boyutu</td></tr><tr><td>35 mm Cam Tabanlı Bulaşıklar&nbsp;</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-20-C Kılıf</td><td>20 mm cam çapı. Lamel cam kalınlığı 1,5 mm</td></tr><tr><td>LSM 510 Konfokal Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>LSM 510</td><td>10x Hava Objektifi (c-Apochromat NA 0.45)</td></tr><tr><td>PECON Sahne Üstü İnkübatör</td><td>PeCON Almanya</td><td>(Üretimi Durduruldu)</td><td>İnkübatör PM 2000 RBT, Zeiss Mikroskopları ile kullanılmak üzere tasarlanmış uyumlu bir üründür.</td></tr></tbody></table>

tümör hücre göçü ve İnvaziv olmayan İlaçların hastaya Özel etkilerinin İncelenmesi İçin bir İnsan glioblastoma organotipik dilim kültürü modeli

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

Glioblastom (GBM), cerrahi, kemoterapötik ve radyasyon tedavisine rağmen son derece kötü klinik prognoz taşımaya devam etmektedir. Çevreleyen beyin parankim içine progresif tümör invazyonu, kalıcı bir terapötik zorluğu temsil eder. GBM için anti-migrasyon terapileri geliştirmek için, kontrollü deneyler için fizyolojik açıdan alakalı bir arka plan sağlayan model sistemleri esastır. Burada, cerrahi rezeksiyon sırasında elde edilen insan GBM dokusundan dilim kültürleri üretmek için bir protokol sunmaktayız. Bu kültürler, hayvan ksenograftları ya da tek hücreli kültürler aracılığıyla pasifleştirilmeden ex vivo denemeye izin verir. Ayrıca, tümör hücrelerinin migratör davranışını nicel olarak incelemek ve terapötiklerle ilişkili tepkiyi incelemek için hücre izlemeyle birlikte konvansiyonel mikroskopi taramalı zaman atlamalı lazer taramasını tarif ediyoruz. Dilimler, cerrahi doku ediniminden 90 dakika sonra tekrarlanabilir bir şekilde üretilir. Retroviral aracılı fluoresan hücre laBeling, konfokal görüntüleme ve tümör hücresi migrasyon analizleri daha sonra kültürden iki hafta içinde tamamlanır. İnsan GBM&#39;sinde artan göç davranışıyla ilişkili genetik faktörleri ortaya çıkarmak için bu dilim kültürlerini başarıyla kullandık. Ayrıca, modelin göç karşıtı tedavilere yanıt olarak hastaya özgü varyasyonu saptama yeteneğini doğrulamış bulunuyoruz. İleriye doğru ilerleyerek, insan GBM dilim kültürleri kişiselleştirilmiş nöro-onkolojik terapiyi ilerletmek için terapötik ajanlara tümör hassasiyetinin hızlı ex vivo değerlendirmesi için çekici bir platformdur.

<html> Grubumuz ilk GBM rezeksiyonu yapılan 50&#39;den fazla hastadan başarıyla dilim kültürleri üretmiştir. Bu dilim nesil, kültür, retroviral etiketleme, görüntüleme ve göç analizi protokolü tekrarlanabilir bir iş akışına dönüştürülmüştür ( Şekil 1 ). Kritik olarak, bu organotipik GBM dilimleri, kültürde 15 güne kadar patolojik özelliklerin ve mikroglianın korunması da dahil olmak üzere kültür boyunca kaynaklanan tümör dokusu ile uyuşma sergilediğini gösterir ( ...

Günümüzde glioblastoma (GBM) &#39;nin ex vivo modelleri, insan tümörü invazyonunun fizyolojik olarak ilgili çalışması için optimize edilmemiştir. Burada, taze insan GBM dokusundan alınan organotipik dilim kültürlerinin üretimi ve bakımı için bir protokol sunuyoruz. Zaman atlamalı mikroskopi ve kantitatif hücre göç analiz tekniklerinin bir açıklaması sağlanmıştır.

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...

Bu prosedürün genel amacı, primer insan glioblastoma hücrelerindeki invaziv migratuar davranışları gözlemlemek ve analiz etmektir. Bu yöntem, nöroonkoloji alanındaki "hastalık ilerlemesindeki ve tedavi yanıtlarındaki hastaya özgü farklılıkların temelinde yatan fenotipik ve moleküler özellikler nelerdir?" gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, glioblastomanın in vivo doku mimarisini ve hücresel heterojenliğini korurken primer hücrelerin doğrudan manipülasyonuna izin vermesidir.Her kuyucuğunda bir mililitre dilim kültürü bakım ortamı bulunan altı kuyucuklu bir plakadaki her kuyucuğa, steril pensler kullanarak boş PTFE kültür eklerini yerleştirerek başlayın. Tüm ekler eklendiğinde, plağı 37 °C ve %5CO2 sıcaklık ve atmosferdeki nemlendirilmiş, su ceketli bir doku kültürü inkübatörüne yerleştirin. Ardından, tümör doku parçalarını buz gibi soğuk işlem ortamı içeren bir Petri kabına yerleştirin ve yapışmış kırmızı kan hücrelerini uzaklaştırmak için dokuyu taze ortamla üç kez nazikçe yıkamak üzere bir pipet kullanın.Üçüncü yıkamadan sonra, bistüri kullanarak tümör parçalarını yaklaşık 3 x 3 x 10 mm şeritler halinde kesin; bu sırada yapışık damarl

a-human-glioblastoma-organotypic-slice-culture-model-for-study-tumor

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, bir 3B ortak kültür sisteminin gelişimini göstermektedir. Fare beyni dilimleri bir zar üzerine yerleştirilir ve floresan olarak etiketlenmiş insan beyni tümör hücrelerinin üzerinde büyümesine izin verilir. Sistem hazır olduğunda, görüntüleme için boyanır.

Organotipik Dilim Ko-kültür Modelinde Beyin Tümörü Kurulması

Video, glioblastoma dokusundan organotipik dilim kültürlerinin oluşturulmasını ve sürdürülmesini göstermektedir. İzole edilen doku bir agaroz matrisine gömülür ve bir vibratom kullanılarak ince kesitler elde edilir. Bu bölümler daha sonra bir mikroplaka içindeki geçirgen membran eklerine yerleştirilir ve uzun süreli bakım için bir dilim kültür bakım ortamında kültürlenir.

İnsan Glioblastoma Dokusundan Dilim Kültürlerinin Oluşturulması ve Sürdürülmesi

Kaynak: Parker, J. J., et al. Tümör Hücre Göçü ve Anti-İnvaziv İlaçların Hastaya Özgü Etkilerinin İncelenmesi için Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültür Modeli. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, konfokal mikroskopi ile yeşil floresan proteini (GFP) eksprese eden glioblastoma doku dilimlerinin görüntülenmesini göstermektedir. Tümör hücresi hareketini ve yönünü izlemek için tutarlı aralıklarla yüksek çözünürlüklü görüntüler yakalanır.

Glioblastoma Dokusunda Tümör Hücresi Migrasyonunun Hızlandırılmış Taramalı Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Görüntülenmesi

Karsinom hücreleri ile Organotipik beyin kesit kokültürü beyin dokusu karsinoma hücre istilası sürecinde floresan gibi parlak saha (video) mikroskopisi ile görselleştirme morfolojik değişiklikler sağlar. Bu model sistem ayrıca hücre değişimi ve ikmal yaklaşımlar sağlar ve manipülasyonlar ve analizlerin bir yelpazede sunuyor.

Bir Organotipik Beyin Dilim ve kanser hücrelerinin 3D Sferoid ile Coculture Sistemi

İnsan beyni tümörlerinin birçok türü, beynin belirli bölgelerine lokalizedir ve kültürde büyümesi zordur. Bu protokol, tümör mikroçevresinin rolünü ele alır ve organotipik bir fare beyin diliminde büyüyen floresan primer beyin tümörü hücrelerini analiz ederek yeni ilaç tedavilerini araştırır.

İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi

Organotypic Hipokampal dilim kültürler (OHSC) vivo durumu çok iyi taklit bir vitro modeli temsil. Burada biz vibratome tabanlı açıklar yüksek kaliteli dilimleri tümör hücreleri biyolojik davranışını veya yeni maddeler nöroprotektif potansiyelini değerlendirmek amacıyla elde etmek için iletişim kuralı Dilimleme geliştirilmiş.

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

Burada glioblastoma için kullanımı kolay bir istila çıktısını tanımlıyoruz. Bu töz glioblastoma kök benzeri hücreler için uygundur. İstilanın, göçün ve çoğalmanın kolay ölçülmesi için bir Fiji makrosu da tanımlanmıştır.

Glioblastoma için 3D Spheroid Model

Organotipik tümör doku dilimlerinde gerçek zamanlı ilaç yanıtını ölçmek için bir protokol uyguluyoruz. Burada özetlenen deneysel strateji, ekstrem koşullarda klinik veya fare tümörlerinden elde edilen doku dilimlerinde orta-yüksek iş yapma ilaç ekranları yürütmek için bir platform sağlar.

Organotipik Tümör Doku Dilimlerinde Gerçek Zamanlı İlaç Yanıtının Ölçülmesi

Civciv embriyoları, insan glioblastoma (GBM) beyin tümörlerini ovo ve in vivo beyin dilimi ko-kültürlerinde incelemek için kullanılır. GBM hücre davranışı, ex vivo ko-kültürlerde hızlandırılmış mikroskopi ile kaydedilebilir ve her iki preparat da deneysel son noktada ayrıntılı 3D konfokal analiz ile analiz edilebilir.

Civciv Embriyo Beynini, İnsan Glioblastoma Hücre Davranışının In Vivo ve Ex Vivo Analizleri için Bir Model Olarak Kullanma

Burada, genotip-fenotip bağımlılıklarını araştırmak ve glioblastoma tedavisi için potansiyel ilaçları taramak için laboratuvar mühendisliği glioblastoma organoidleri (LEGO) üretmek ve kullanmak için kapsamlı bir protokolün ana hatlarını çiziyoruz.

Laboratuvar Mühendisliği: Glioblastoma Organoid Kültürü ve İlaç Taraması

Yeni teşhis edilen ve tekrarlayan tümörlerden üretilen hastadan türetilen manyetik gliomakürleri kullanarak 3D glioblastoma göç modeli sunuyoruz. Bu platform, hastaya özgü göç dinamiklerinin görselleştirilmesine ve terapötik etkinliğin değerlendirilmesine olanak tanır. Test, protein lokalizasyonu ve ifade desenlerini değerlendirmek için göç sonrası çoklu eklenebilir.

Hipoksik Koşullarda Manyetik Nanopartikül Aracılı Sferoid Lokalizasyon ile Tekrarlanabilir 3D Glioblastoma Göç Testi

Keşfedin insan glioblastoma hücrelerinin invaziv göç davranışlarını organotipik dilim kültürü modeliyle. Bu yöntem, tümör işgalini ve hasta spesifik tedavi yanıtlarını in vivo doku mimarisini koruyarak analiz etmenizi sağlar.

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli (Video) | JoVE Journal

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli

Daha fazla video keşfet