Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

Bu prosedürün genel amacı, eklem içi Monoiyodoasetat enjekte ederek ve mekanik duyarlılığı ve ağırlık taşıma açıklarını ölçerek fare diz ekleminde Osteoartrit ağrısı benzeri davranışın gelişimini gözlemlemektir. Bu yöntem, Osteoartritte ağrının altında yatan mekanizmaların hangileri olduğu ve gelecekteki tedavi için hangi farmakolojik hedeflerin en umut verici olduğu gibi Osteoartrit ağrısı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, uygulanmasının kolay olması ve MIA dozunu değiştirerek hastalık gerçekliğinin ayarlanmasına izin vermesidir.

Böylece model, test süresi boyunca sürekli ağrı benzeri tepkiler sağlar. Bu tekniğin anlamı, aşırı kilolu ağrı tedavisine kadar uzanır, çünkü MIA modeli geleneksel ağrı giderici tedavilere yanıt verir ve ilaç keşfi için yararlı olabilir. Bu protokol için, 8 ila 10 haftalık fareleri beşli gruplar halinde barındırmak ve barınma odasına alışmalarına izin vermek gelenekseldir.

Deneyi kurarken, her grubun ortalama vücut ağırlığını aynı tutarak fareleri randomize edin. Deneyciyi tedavilerine karşı kör etmek için hayvanları sayılarla etiketleyin. Enjeksiyon gününde, MIA çözeltisini istenen konsantrasyonlarda steril tuzlu su içinde hazırlayın.

Solüsyonu her zaman maske ve eldiven takarak hazırlayın. Önerilen en yüksek doz on mikrolitre başına bir miligramdır. Kontrol fareleri için steril salin kullanın.

Şimdi, bir Anestezik Arabası kullanarak bir fareyi uyuşturun. İlk önce bir izofluran odası kullanın ve enjeksiyon sırasında aynı gazı bir burun konisi yoluyla vermeye devam edin. Gözlere Oftalmik merhem uygulayın, böylece kurumazlar.

Anestezi bir ayak parmağı kıstırma kullanılarak onaylandıktan sonra, fareyi sırt üstü yatırın ve diz eklemini çevreleyen alanı alkolle düzeltin ve silin. Patellar tendon, patellanın altında beyaz bir çizgi olarak görünür hale gelecektir. Enjeksiyon bölgesini stabilize etmek için dizinizi bükülmüş bir pozisyonda sabitleyin.

İşaret parmağınızı diz ekleminin altına, başparmağınızı da ayak bileği ekleminin ön yüzeyinin üzerine koyun. Kesin enjeksiyon bölgesini bulmak için, patellanın altındaki boşluğu bulana kadar diz boyunca yatay olarak 26 gage iğne sürün. Ardından, alanı işaretlemek için hafif bir baskı uygulayın ve ardından iğneyi ve şırıngayı enjeksiyon için dikey olarak kaldırın.

İğneyi başparmağınızla yönlendirerek, tibiaya dik olan patellar tendonu yerleştirin. Herhangi bir direnç hissedilmemelidir. Enjeksiyonu giriş yerine yüzeysel yapın.

Enjeksiyonun derinliği bu model için kritik öneme sahiptir. İğnenin çok derine inmediğinden ve dolayısıyla ayak bileği ekleminden geçtiğinden emin olmak için büyük özen gösterilmelidir. Enjeksiyondan sonra, çözeltinin eşit bir şekilde dağılmasını sağlamak için dizinize masaj yapın.

Ardından, fareyi ısıtılmış bir ped üzerindeki temiz bir kurtarma kafesine geri yerleştirin ve iyileşmesine izin verin. Fareyi sternal yaslanma yeteneğini yeniden kazanana kadar gözlemleyin. Ardından, ev kafesine geri koyun.

Davranışsal deneylere başlamadan önce daima bir önlük, eldiven ve maske giyin. Testten iki gün önce, fareleri test odasına getirin ve her birinin iki saatlik oturumlarda bir tel örgü ızgara üzerindeki akrilik kabinlerde olmaya alışmalarına izin verin. Test günlerinde, testten önce hayvanları 60 dakikaya kadar alıştırın.

Ardından, kalibre edilmiş von Frey kıllarını arka pençenin plantar yüzeyine uygulayın. 0.07 gramlık bir saçla başlayın. Saçı üç saniye boyunca veya pençe çekilene kadar pozisyonda tutun.

On saniye sonra, tepki verdiği en büyük kuvvet bulunana kadar yukarı-aşağı yöntemini takip ederek bir sonraki saçı uygulayın. Bir gram kuvveti aşmayın. 0.1 gram veya daha azında meydana gelen bir yanıt allodin olarak kabul edilir.

Bir çekilme tespit edildiğinde, hayvanı tekrar test edin. Para çekmeye neden olan filamentin bir çentik altında bir filament ile başlayın. Ardından, herhangi bir tepki gözlenmeyene kadar kuvvet aralığında aşağı doğru devam edin ve ardından tepki kuvveti tekrar bulunana kadar kuvvetler arasında yükselin.

Amaç, bir k'değeri elde etmek için 6 yanıttan oluşan bir dizi toplamaktır. Enjekte edilen uzuv için pençeler inpsilateral ve kontralateral üzerinde işlemi tekrarlayın. Bu prosedür, bir taban çizgisi elde etmek için enjeksiyondan önce ve mekanik allodini gelişimini tespit etmek için enjeksiyondan birkaç gün sonra kullanılmalıdır.

Bu test, her kullanımdan önce 100 gram ağırlıkla kalibre edilmiş bir ağırlık ve kapasitans test cihazı kullanır. Von Frey testi gibi, bu testi de enjeksiyonlardan önce ve sonra gerçekleştirin. Başlamak için, her fareyi aparat üzerindeki bir Pleksiglas hazneye girmesi ve tutma kutusuna oturması için eğitin.

Bunu yapmak için, fareyi tutma kutusunun önüne yerleştirin, girişi 45 derece kaldırın ve farenin serbestçe içeri girmesine izin verin. Ardından kutuyu kapatın. Hayvanların oturma pozisyonu alana kadar serbestçe hareket etmelerine izin verin.

Fare hareketsiz kalana ve odanın her iki tarafına da yaslanana kadar bu eğitimi en az iki gün boyunca tekrarlayın. Her bir arka pençe, ölçüm için uygun kayıt pedine yerleştirilmelidir. Ölçümün toplanması bir saniye sürer.

Her seansta her bir arka pençede doğan ağırlığın üç ayrı ölçümünü yapın. İpsilateral ve kontralateral pençeler tarafından taşınan ağırlık farkını hesaplamak için ortalama değerleri kullanın. Hayvanlar, bir pençede yüzde 45 veya daha az ağırlık taşıma dengesizliği gösterirlerse aşırı duyarlı olarak kabul edilirler.

İpsilateral arka pençelerde MIA'nın neden olduğu mekanik aşırı duyarlılığın bir zaman seyri, bir dizi doz kullanılarak yapıldı. En düşük MIA dozu, onuncu günde eşiklerde% 50'lik bir düşüşe ve 28. günde% 70'lik bir düşüşe neden oldu. En yüksek doz, beşinci güne kadar önemli bir eşik düşüşüne neden oldu.

Ağırlık taşıma değişiklikleri de hesaplandı. En düşük MIA dozunun ağırlık taşıma üzerinde ölçülen bir etkisi yoktu. Ancak bir sonraki en büyük doz, enjeksiyondan on gün sonra ipsilateral pençe üzerinde taşınan ağırlıkta önemli bir azalmaya neden oldu.

Bu videoyu izledikten sonra, farenin dizine eklem içi MIA enjeksiyonlarının nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamalısınız. ve ağrı benzeri davranışın gelişimini değerlendirmek için uygun testler yapın. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, uygun şekilde gerçekleştirilirse, enjeksiyon için fare başına beş dakika içinde yapılabilir.

Bu prosedürü denerken, hayvanları her zaman sakin tutmayı unutmamak önemlidir. Monoiyodoasetat ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman eldiven ve maske takmak gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın. Bu prosedürü takiben, ek soruları yanıtlamak için histoloji ve immüno, diz ekleminin kimyası gibi diğer yöntemler de uygulanabilir.

Geliştirildikten sonra, bu teknik, Osteoartrit ağrısı alanındaki araştırmacıların kemirgenlerde hastalığın farmakolojisini keşfetmelerinin yolunu açtı.