Name: Kapiler Elektroforez Real Time Kitosan Films üzerine Peptit Aşılama Monitör (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: Öğrenin, kitosan filmlere peptit aşılamayı gerçek zamanlı izlemek için kapiler elektroforez yöntemini. Bu analitik kimya tekniği, reaksiyon kinetiği ve verimlilik hakkında hassas veriler sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MG, MO'C ve PC, Araştırma Tohum Fonu için WSU'daki Moleküler Tıp Araştırma Grubu'na, ayrıca tartışmalar için Michele Mason (WSU), Richard Wuhrer (İleri Malzeme Karakterizasyon Tesisi, AMCF, WSU) ve Hervé Cottet'e (Montpellier) teşekkür eder.

Kitosan Filmlerin hazırlanması 1. <ol><li> ultra saf su ile, 100 ml tam buzlu asetik asit 2 g tartılır. </li><li> % 2 a / a, asetik asit sulu çözeltisi, 100 ml ekleyin, kitosan tozu üzerinden 1.7 g tartılır. ya da alüminyum folyo ile ya da karanlıkta kaplı oda sıcaklığında karıştırma çubuğu ve manyetik bir karıştırma levhası ile 5 gün için karıştırın. </li><li> 1 saat süre ile, 23 ° C&#39;de 1.076 x g&#39;de çitosan dispersiyon santrifüjleyin. bir şırınga ile süpernatant toplayın ve çökelti atın. </li><li> Her bir film, kısım, oda sıcaklığında, 9 cm plastik Petri kabı içine çitosan süspansiyonu 10 ml. en az 7 gün süreyle kurumaya örtülü filmleri bırakın. </li><li> Kullanarak makas 1 x 1 cm kare şeklinde kuru filmler kesti. Not: Deney bu aşamada durdurulmuş olabilir. </li></ol> Fosfat tamponlu tuz 2. Hazırlık (PBS) <ol><li> 8 gr sodyum klorür tartılır, 0.2 g potasyum klorür, 1.44 g disodyum hidrojen fosphate ve 0.24 g potasyum dihidrojen fosfat. </li><li> ultra saf su 800 ml bu tartıldı kimyasal çözülür ve pH 7.4 olacak şekilde derişik hidroklorik asitle titre. Not: Deney bu aşamada durdurulmuş olabilir. </li></ol> pH 9.2 75 mM sodyum borat tampon maddesi 3. hazırlanması <ol><li> borik asit 3,0915 g tartılır. ultra saf su 75 ml içinde çözülür. </li><li> 10 M veya daha yüksek bir konsantrasyonda bir sodyum hidroksit solüsyonu ile 9.2 arasında bir pH değerine, borik asit çözeltisi titre edilir. Dikkat: Konsantre sodyum hidroksit çözeltileri aşındırıcı ve eldiven ele alınmalıdır. </li><li> ultra-saf su ile komple çözelti 100 ml elde edildi. Bu pH 9.2 bir 500 mM sodyum borat tampon verir. </li><li> 75 mM sodyum borat tampon, aşırı saf su ile 500 mM sodyum borat tampon ile seyreltilir. Not: Deney bu aşamada durdurulmuş olabilir. </li></ol> Kitosan Fi 4. hazırlanmasıAşılama Reaksiyon için LMS <ol><li> Oda sıcaklığında bir Petri kabındaki 2 saat 5 ml PBS, 10 kare kitosan film (1 x 1 cm) yıkayın. </li><li> Bu süre zarfında, hazırlamak ve kapiller elektroforez cihazı (adım 5) doğrulamak. </li></ol> Kapiler Elektroforez Enstrüman 5. Hazırlanması ve Doğrulama <ol><li> 50 mikron iç çapa sahip bir 43.5 cm çıplak erimiş silis kılcal hazırlayın ile ayarlanan uzunluğunda kılcal polimer dış kaplama zayıflatarak (toplam uzunluk, algılama penceresine etkili uzunluğu 43.5 cm tipik 35 cm olduğunu) künt kap sonra kılcal yakalamaya. <ol><li> girişten 8.5 cm polimer kaplama yakmak için bir çakmak kullanarak kılcal bir pencere oluşturmak ve soğuduktan sonra etanol ile silerek temizleyin. bir çakmak ile birkaç milimetre için her iki ucunda kılcal kaplama yakmak ve soğur sonra etanol ile silerek temizleyin. </li><li> Yeri kılcal inside algılama penceresi giriş ve çıkış bölgeleri eşit boylarda yerleştirerek ve kaset iğ etrafında sararak kılcal kaset takın ve. Sonra kapiller elektroforez cihazında kaseti yükleyin. </li></ol></li><li> Her ayırma için yöntemin parametrelerini ayarlamak. Yazılım menüsünde &quot;Tüm yöntemini düzenlemek&quot; sonra &quot;yöntemi&quot; seçeneğini seçin. (Örneğin 25 ° C, 10 dakika, 30 kV) ayrılması için kullanılan sıcaklık, süre, voltaj ve küçük şişeler ayarlayın. <ol><li> (Su içinde) 1 M sodyum hidroksit (su içinde), 0.1 M sodyum hidroksit, aşırı saf su ile 5 dakika 75 mM sodyum borat tampon maddesi ile 5 dakika ile 5 dakika ile 10 dakika: Ön şartlandırma bölümünde, arka arkaya basmaları ayarlamak bir dizi analiz ilk yöntem için, pH 9.2 de. </li><li> (Su içinde) 1 M sodyum hidroksit, pH 9 75 mM sodyum borat tampon maddesi ile 5 dakika ile 1 dakika: takip eden yöntemler için, önceden ayarlanmış şartlandırma bölümünde üst üste basması ayarlayın.2. </li><li> Enjeksiyon bölümünde, tüm yöntemler için 10 saniye boyunca 30 mbar basınç hidrodinamik enjeksiyon için parametrelerini ayarlamak. Ayırma bölümünde, tüm yöntemler için 9 dakika boyunca, 25 ° C&#39;de 30 kV&#39;a ayırma koşullarını ayarlamak. NOT: üreticileri arasında değişebilir CE cihazı çalıştırmak için prosedür olarak özel CE cihazının kullanım kılavuzuna başvurun. günde 1 M sodyum hidroksit solüsyonu hazırlayın. </li></ol></li><li> Enjekte edilir ve (75 mM sodyum borat tampon maddesi 450 ul seyreltilmiş, su içinde% 10 h / h dimetilsülfoksit 10 ul (DMSO)), nötr bir iç standart ayırın. Sonra enjekte ve aynı şekilde bir oligoacrylate standardı ayrı, kılcal geçerliliğini kontrol etmek (10 g ∙ L -1 de ultra saf suda çözünmüş Malzeme listesi bakınız). aşılama reaksiyonu başlatmak için hazır olana kadar burada dizisi Pause. </li></ol> Kitosan Film üzerine RGDS 6. Tırnak <ol><li> peptid tarttın (1 mg RGDS)ve bağlama maddeleri (3 mg EDC-HCl ve 2 mg NHS). </li><li> 2 saat PBS içinde çitosan filmi ıslatma başlamasından sonra peptit ve PBS 5 ml bağlama maddeleri çözülür. <ol><li> Bu çözeltinin 50 ul tablet alın. kısım için bir iç standart olarak nötral su içinde% 10 h / h DMSO 2 ul ekle. CE kısım analiz (adım 7). </li></ol></li><li> 5 ml PBS Petri kabı kitosan filmler durulanması için kullanılmıştır çıkarın. çitosan filmler içeren Petri kabı peptidi ve birleştirme ajanlarının 5 mi solüsyonu ilave. </li><li> parafın film Petri kabı kapak ve oda sıcaklığında bir orbital çalkalayıcı üzerine yerleştirin. set zamanlarda reaksiyon ortamı 50 ul alikotları alın. Not: CE toplam analiz süresi 15 dakika olan ve böylece bir alikosu her 15 dakikada bir (veya iki reaksiyonları paralel olarak izlenmektedir halinde her 30 dakika, vs.) alınabilir. <ol><li> Her al bir iç standart olarak nötral su içinde% 10 h / h DMSO 2 ul ekleiquot. NOT: Alikot en kısa sürede de alınır gibi CE analiz edilmelidir (adım 7). </li></ol></li><li> çalkalama ve bir alikot alımından 4 saat sonra, karıştırıcı Petri çanağı çıkarın. Petri kabı reaksiyon ortamı çıkarın. kitosan filmlerin durulama PBS 5 ml ekleyin. </li><li> , Petri kabı PBS çıkarın ultra saf su ile kitosan filmi durulayın ve onları gece boyunca kurumaya bırakın. ultra saf su çıkarın ve bir plastik Petri kabındaki -20 ° C&#39;de filmleri saklayın. </li></ol> Tırnak Reaksiyon 7. İzleme CE kullanma <ol><li> Enjekte edilir ve derhal bölüm 5.2 olarak analiz koşullar kullanılarak Petri kabı çıkarıldıktan sonra reaksiyon ortamının ayrı alikotları. </li><li> ayrılmaların tamamlandıktan sonra 10 dakika süre ile, aşırı saf su ile kılcal yıkayın. 10 dakika boyunca boş bir şişede (hava) ile bir flaş boyunca kurutun. NOT: Deney bu aşamada durdurulmuş olabilir. </li></ol> 8. Veri Trea<html> CE tment <ol><li> ayrılması sırasında akım ve (bu durumda DMSO) elektroozmotik hareketlilik marker göç zamanı hem oligoacrylate standart ayrılması için gözlenen benzeyen olduğunu kontrol ederek, her ayrılık geçerliliğini kontrol edin. NOT: varyasyon yaklaşık 50 uA ve 1.3 dakika göç zaman değerinin beklenen cari değeri kabul edilebilir% 10-15 kadar (daha yüksek bir tekrarlanabilirlik gerekiyorsa elektroforetik mobilite değerleri yerine göç kez kullanılmalıdır). </li><li> Her başarılı ayrılması için, sağ ihracat tıklayıp uygun bir sinyali seçmek, belirli bir veri kümesi seçerek kapiller elektroforez yazılımından ham veri ihracat. </li><li> CE tarafından kaydedilen ham veri dönüştürme (göç, zamanın bir fonksiyonu olarak, UV absorbans ile gösterilmiştir). Denklem 1 Aşağıdaki bir elektroforetik mobilite u içine X ekseni (göç zamanı t m) dönüştürmek: n 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 54549 / 54549eq1.jpg &quot;/&gt; (1) L D detektöre uzunluğudur, L T kılcal toplam uzunluğu, V gerilim olduğu ve T EO nötr tür olan (bu durumda DMSO iç standart) 27 göç zamandır. 28: Denklem 2 Aşağıdaki elektroforetik hareketlilik W (μ) bir dağılımına ham veri (au absorbans) Y-ekseni dönüştürmek <img alt="denklem 2" src="/files/ftp_upload/54549/54549eq2.jpg" /> (2) </li></ol> Peptid-aşılı Film 18 9. Ek Karakterizasyonu <ol><li> 4 mm solid-state NMR rotor kendi etrafında haddelenmiş peptid-aşılı kitosan filmlerin, yerleştirin. filmler şişer ve rotor kapatmak için, fosfat-tamponlu tuzlu su ile rotor doldurun. Birkaç saat bekleyin. </li><li> 13 filmi analiz &lt;/ sup&gt; C NMR spektroskopisi 18. </li></ol>

<ol><li>Muthukumar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theory+of+electrophoretic+mobility+of+a+polyelectrolyte+in+semidilute+solutions+of+neutral+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Theory of electrophoretic mobility of a polyelectrolyte in semidilute solutions of neutral polymers.</a> Electrophoresis. 17, 1167-1172 (1996).</li>
<li>Barrat, J. L., Joanny, J. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarrat%2C+JL+%22in+Advances+in+Chemical+Physics%2C+Vol+Xciv+Vol.+94+Advances+in+Chemical+Physics%22">in Advances in Chemical Physics, Vol Xciv Vol. 94 Advances in Chemical Physics</a>. , John Wiley & Sons Inc. 1-66 (1996).</li>
<li>Fu, S. L., Lucy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+electrophoretic+mobilities.+1.+Monoamines%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Prediction of electrophoretic mobilities. 1. Monoamines.</a> Anal. Chem. 70, 173-181 (1998).</li>
<li>Harvey, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarvey%2C+D+%22Modern+Analytical+Chemistry%22">Modern Analytical Chemistry</a>. , McGraw Hill. (2000).</li>
<li>Oliver, J. D., Gaborieau, M., Hilder, E. F., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+robust+determination+of+monosaccharides+in+plant+fibers+in+complex+mixtures+by+capillary+electrophoresis+and+high+performance+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Simple and robust determination of monosaccharides in plant fibers in complex mixtures by capillary electrophoresis and high performance liquid chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1291, 179-186 (2013).</li>
<li>Oliver, J. D., Sutton, A. T., Karu, N., Phillips, M., Markham, J., Peiris, P., Hilder, E. F., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+robust+monitoring+of+ethanol+fermentations+by+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Applied+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Simple and robust monitoring of ethanol fermentations by capillary electrophoresis.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 62, 329-342 (2015).</li>
<li>Thevarajah, J. J., Sutton, A. T., Maniego, A. R., Whitty, E. G., Harrisson, S., Cottet, H., Castignolles, P., Gaborieau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+the+Heterogeneity+of+Chemical+Structures+in+Complex+Charged+Polymers+through+the+Dispersity+of+Their+Distributions+of+Electrophoretic+Mobilities+or+of+Compositions%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Quantifying the Heterogeneity of Chemical Structures in Complex Charged Polymers through the Dispersity of Their Distributions of Electrophoretic Mobilities or of Compositions.</a> Anal. Chem. 88, 1674-1681 (2016).</li>
<li>Toutounji, M. R., Van Leeuwen, M. P., Oliver, J. D., Shrestha, A. K., Castignolles, P., Gaborieau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+sugars+in+breakfast+cereals+using+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">Quantification of sugars in breakfast cereals using capillary electrophoresis.</a> Carbohydr. Res. 408, 134-141 (2015).</li>
<li>Miramon, H., Cavelier, F., Martinez, J., Cottet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Resolutive+Separations+of+Hardly+Soluble+Synthetic+Polypeptides+by+Capillary+Electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Highly Resolutive Separations of Hardly Soluble Synthetic Polypeptides by Capillary Electrophoresis.</a> Anal. Chem. 82, 394-399 (2010).</li>
<li>Mnatsakanyan, M., Thevarajah, J. J., Roi, R. S., Lauto, A., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+chitosan+by+degree+of+acetylation+using+simple+free+solution+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Separation of chitosan by degree of acetylation using simple free solution capillary electrophoresis.</a> Anal. Bioanal. Chem. 405, 6873-6877 (2013).</li>
<li>Taylor, D. L., Ferris, C. J., Maniego, A. R., Castignolles, P., in het Panhuis, M., Gaborieau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Gellan+Gum+by+Capillary+Electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Journal+of+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of Gellan Gum by Capillary Electrophoresis.</a> Australian Journal of Chemistry. 65, 1156-1164 (2012).</li>
<li>Thevarajah, J. J., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+and+characterization+of+synthetic+polyelectrolytes+and+polysaccharides+with+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Chem%22%5BJournal%5D)">Separation and characterization of synthetic polyelectrolytes and polysaccharides with capillary electrophoresis.</a> Adv. Chem. 2014, 798503(2014).</li>
<li>Sutton, A. T., Read, E., Maniego, A. R., Thevarajah, J., Marty, J. -D., Destarac, M., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purity+of+double+hydrophilic+block+copolymers+revealed+by+capillary+electrophoresis+in+the+critical+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Purity of double hydrophilic block copolymers revealed by capillary electrophoresis in the critical conditions.</a> J. Chromatogr. A. 1372, 187-195 (2014).</li>
<li>Righetti, P. G., Sebastiano, R., Citterio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+electrophoresis+and+isoelectric+focusing+in+peptide+and+protein+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Capillary electrophoresis and isoelectric focusing in peptide and protein analysis.</a> Proteomics. 13, 325-340 (2013).</li>
<li>Ali, I., Al-Othman, Z. A., Al-Warthan, A., Asnin, L., Chudinov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+chiral+separations+of+small+peptides+by+capillary+electrophoresis+and+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Sep.+Sci%22%5BJournal%5D)">Advances in chiral separations of small peptides by capillary electrophoresis and chromatography.</a> J. Sep. Sci. 37, 2447-2466 (2014).</li>
<li>Kasicka, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+capillary+and+microchip+electroseparations+of+peptides+%282011-2013%29%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Recent developments in capillary and microchip electroseparations of peptides (2011-2013).</a> Electrophoresis. 35, 69-95 (2014).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Capillary Electrophoresis (CE). Essentials of Analytical Chemistry. , JoVE. Cambridge, MA. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.jove.com/science-education/10226/capillary-electrophoresis-ce">http://www.jove.com/science-education/10226/capillary-electrophoresis-ce</a> (2016).</li>
<li>Taylor, D. L., Thevarajah, J. J., Narayan, D. K., Murphy, P., Mangala, M. M., Lim, S., Wuhrer, R., Lefay, C., O'Connor, M. D., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+monitoring+of+peptide+grafting+onto+chitosan+films+using+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Real-time monitoring of peptide grafting onto chitosan films using capillary electrophoresis.</a> Anal. Bioanal. Chem. 407, 2543-2555 (2015).</li>
<li>Rinaudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitin+and+chitosan%3A+Properties+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Polym.+Sci%22%5BJournal%5D)">Chitin and chitosan: Properties and applications.</a> Prog. Polym. Sci. 31, 603-632 (2006).</li>
<li>Li, Z., Leung, M., Hopper, R., Ellenbogen, R., Zhang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeder-free+self-renewal+of+human+embryonic+stem+cells+in+3D+porous+natural+polymer+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Feeder-free self-renewal of human embryonic stem cells in 3D porous natural polymer scaffolds.</a> Biomaterials. 31, 404-412 (2010).</li>
<li>Domard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+perspective+on+30+years+research+on+chitin+and+chitosan%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Polym%22%5BJournal%5D)">A perspective on 30 years research on chitin and chitosan.</a> Carbohydr. Polym. 84, 696-703 (2011).</li>
<li>Shekaran, A., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+engineering+of+extracellular+matrix-mimetic+bioadhesive+surfaces+and+implants+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta+Gen.+Subj%22%5BJournal%5D)">Nanoscale engineering of extracellular matrix-mimetic bioadhesive surfaces and implants for tissue engineering.</a> Biochim. Biophys. Acta Gen. Subj. 1810, 350-360 (2011).</li>
<li>Custodio, C. A., Alves, C. M., Reis, R. L., Mano, J. F. Immobilization of fibronectin in chitosan substrates improves cell adhesion and proliferation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCustodio%2C+CA+%22J.+Tissue+Eng.+Regen.+Med%22">J. Tissue Eng. Regen. Med</a>. 4, 316-323 (2010).</li>
<li>Boateng, S. Y., Lateef, S. S., Mosley, W., Hartman, T. J., Hanley, L., Russell, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RGD+and+YIGSR+synthetic+peptides+facilitate+cellular+adhesion+identical+to+that+of+laminin+and+fibronectin+but+alter+the+physiology+of+neonatal+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">RGD and YIGSR synthetic peptides facilitate cellular adhesion identical to that of laminin and fibronectin but alter the physiology of neonatal cardiac myocytes.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 288, C30-C38 (2005).</li>
<li>Lefay, C., Guillaneuf, Y., Moreira, G., Thevarajah, J. J., Castignolles, P., Ziarelli, F., Bloch, E., Major, M., Charles, L., Gaborieau, M., Bertin, D., Gigmes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+modification+of+chitosan+via+nitroxide-mediated+polymerization%5BTitle%5D)+AND+%22Polym.+Chem%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous modification of chitosan via nitroxide-mediated polymerization.</a> Polym. Chem. 4, 322-328 (2013).</li>
<li>Gartner, C., Lopez, B. L., Sierra, L., Graf, R., Spiess, H. W., Gaborieau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+Structure+and+Dynamics+in+Chitosan+Films+Investigated+with+Solid-State+NMR%2C+Dynamic+Mechanical+Analysis%2C+and+X-ray+Diffraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Interplay between Structure and Dynamics in Chitosan Films Investigated with Solid-State NMR, Dynamic Mechanical Analysis, and X-ray Diffraction.</a> Biomacromolecules. 12, 1380-1386 (2011).</li>
<li>Castignolles, P., Gaborieau, M., Hilder, E. F., Sprong, E., Ferguson, C. J., Gilbert, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+separation+of+oligo%28acrylic+acid%29+by+capillary+zone+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Macromol.+Rapid+Commun%22%5BJournal%5D)">High resolution separation of oligo(acrylic acid) by capillary zone electrophoresis.</a> Macromol. Rapid Commun. 27, 42-46 (2006).</li>
<li>Chamieh, J., Martin, M., Cottet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+in+Capillary+Electrophoresis%3A+Transformation+of+Raw+Electropherograms+into+Continuous+Distributions%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis in Capillary Electrophoresis: Transformation of Raw Electropherograms into Continuous Distributions.</a> Anal. Chem. 87, 1050-1057 (2015).</li>
<li>Maniego, A. R., Ang, D., Guillaneuf, Y., Lefay, C., Gigmes, D., Aldrich-Wright, J. R., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+poly%28acrylic+acid%29+salts+according+to+topology+using+capillary+electrophoresis+in+the+critical+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Separation of poly(acrylic acid) salts according to topology using capillary electrophoresis in the critical conditions.</a> Anal. Bioanal. Chem. 405, 9009-9020 (2013).</li>
<li>Chung, T. W., Lu, Y. F., Wang, S. S., Lin, Y. S., Chu, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+human+endothelial+cells+on+photochemically+grafted+Gly-Arg-Gly-Asp+%28GRGD%29+chitosans%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Growth of human endothelial cells on photochemically grafted Gly-Arg-Gly-Asp (GRGD) chitosans.</a> Biomaterials. 23, 4803-4809 (2002).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Burada açıklanan protokol sadeliği bu ideal yaygın uygulamaya uygun hale getirir. Ancak, özellikle dikkat aşağıdaki kilit adımların ödenecek gerekmektedir. Uygun CE enstrüman hazırlama Gün kılcal ve aletin geçerliliğini kontrol etmek için bilinmeyen numunelerin ayrılması hemen önce bilinen bir standart (aynı zamanda da ayrılmaların dizisinin sonu) ayırmak önemlidir. Bu standart, bir oligoacrylate 27 veya göç zamanları geniş bir aralığı...

Ücretsiz çözüm kılcal elektroforezi (CE) kendi yük-sürtünme oranı 1,2 dayalı çözümler bileşikleri ayıran bir tekniktir. Şarj-boyutlu oranı genellikle literatürde açıklanan, ancak bu sadeleştirme bu çalışmada polipeptitleri dahil olmak üzere, polielektrolitler için geçerli değildir, ve aynı zamanda küçük organik moleküller 3 için uygun değildir gördü. CE bir durağan fazı, bir arka plan elektrolit (genellikle bir tampon) yok diğer ayırma teknikleri farklıdır. Bu teknik, 5, fermantasyon Brews 6 sentetik polimerler 7, gıda numuneleri 8 ve sıkıcı numune hazırlık yapmadan pek çözünür peptidler 9 ve üzerine aşılama bitki lifleri gibi karmaşık matrisler 4 örneklerin geniş bir ürün yelpazesi analiz kabiliyeti güçlü olmasını sağlar saflaştırılması. Bu çözünme sorunları var kompleks polielektrolitler (ler için özellikle önemlidirUCH nedenle kitosan 10 ve gellan sakızı 11) olarak birleştirilmiş ya da çözelti içinde çökeltilmiş ana kadar başarıyla örnek, süzme olmadan, analiz edilmiştir. Dahası, kahvaltılık tahıllar şekerlerin analizi suda 8 çöktürülmüş kahvaltı gevreği örneklerinin parçacıkları ile örnekleri enjekte çıkıyor. Bu aynı zamanda da dallı polielektrolitler veya kopolimerler 12,13 analizi için de geçerlidir. Kapsamlı çalışmalar da, özellikle proteomik 14, doğal ya da sentetik peptidler, 15 ve protein ve peptid 16 mikroçip ayırmaların şiral ayrımı için proteinlerin analizi CE tekniklerinin geliştirilmesi tamamlanmıştır. Ayırma ve analiz kılcal gerçekleşecek bu yana, sadece küçük örnek hacimleri ve çözücüler kromatografi 5,6,17 dahil olmak üzere diğer ayırma tekniklerinden daha düşük çalışma maliyeti için CE sağlayan kullanılmaktadır. CE tarafından ayırma hızlı olduğundan, monito veriyorReaksiyon kinetiğinin halka. Bu iyileştirilmiş hücre yapışması için 18 kitosan filmleri üzerine peptidlerin aşılama durumunda gösterilmiştir. Kitosan kitin N -deacetylation türetilmiş bir polisakkarittir. Nedeniyle çitosan en biyouyumluluk 21, 18,20 19 biyo yapışkanlar ve hücre büyümesi substratlar Chitosan filmler gibi çeşitli biyomedikal uygulamalar için kullanılabilir. Fibronektin, kolajenler ve laminin gibi özel hücre dışı matris proteinlerine Hücre bağlanması, doğrudan hücre 22 hayatta kalma ile bağlantılıdır. Özellikle, farklı hücre tipleri çoğu zaman hayatta kalma ve uygun işlev için, farklı hücre dışı matris proteinlerine eki gerektirir. Kitosan filmlerin Hücre eki fibronektin 23 aşılama yoluyla geliştirilmiş olduğu gösterilmiştir; Bununla birlikte, terkip, saflaştırma ve bu büyük proteinlerin aşılama ekonomik açıdan uygun değildir. Alternatif olarak, küçük peptidlerin bir serisi havE, büyük hücre dışı matris proteinlerinin özelliklerini taklit etmek mümkün olduğu gösterilmiştir. Örneğin, bu gibi fibronektin mimetikleri RGD peptitler (arjinin - glisin - aspartik asit) ve RGDS (arjinin - glisin - aspartik asit - serin) kolaylaştırmak ve hücre eki 24 geliştirmek için kullanılmıştır. Kitosan filmlerin üzerine RGDS kovalent aşılama vivo 18 fibronektin takmak için bilinen hücreler için gelişmiş hücre eki sonuçlandı. Daha büyük protein ikamesi aynı işlevselliği önemli bir maliyet düşüşü sağlamaktadır sahip küçük peptitler ile fibronektin seviyor. Daha önce 18 yayınlanan Burada, kitosan için aşılama peptid yapıldı. Daha önce gösterildiği gibi, bu yaklaşım için RGDS karboksilik asit işlevselleştirilmesi bağlama maddeleri EDC-HCL (1-etil-3- (3-dimetilaminopropil) karbodiimid) ve NHS (N-hidroksisukinimid) kullanarak, basit ve etkili bir aşılama sağlar üzerine aşılanmışkitosan filmi. Bu aşılama yöntemi önemli avantajı, çitosan veya peptit herhangi bir değişiklik gerektirmez, ve gelecekteki hücre kültür uygulamaları 18,20 ile uyumluluğu arttırmak için, sulu bir ortam içinde yürütülmektedir. bağlama maddeleri ve peptit şarj edilebilir CE reaksiyon kinetiği analizi için uygun bir yöntemdir. Önemlisi, CE aracılığıyla reaksiyon kinetiği analizi aşılama reaksiyonu gerçek zamanlı izlenmesini sağlar ve böylece hem optimize ve aşılama derecesinin miktarını sağlar. Rutin gerekli olmasa da, CE analizi sonuçları kovalent aşılama göstermek için katı hal NMR (Nükleer Manyetik Rezonans) Spektroskopisi 25,26 kullanılarak kitosan filmler üzerine aşılama peptidin doğrudan ölçülmesi ile off-line doğrulanabilir filmin 18 üzerine peptid. Bununla birlikte, katı hal NMR spektroskopisi ile karşılaştırıldığında, gerçek zamanlı analizi ile teminCE gerçek zamanlı olarak peptit tüketimi ve reaksiyonun kinetiği değerlendirmek, böylece yeteneğinin ölçümü sağlar. Yukarıda belirtilen yöntem basit ve aşılama ölçüde dolaylı ölçümü ile kitosan filmlerin üzerine aşılama peptid gerçek zamanlı analiz sağlar. gösterilen yöntem, farklı kimyasal reaksiyonlar sürece reaktanlar ya da şarj edilebilir analiz edilecek ürünlerin gerçek zamanlı kantitatif değerlendirmesi uzatılabilir.

<table><tbody><tr><td>Su</td><td>Kırlangıç: Deneyde</td><td></td><td>kullanılan tüm suyun Milli-Q kalitesinde olması gerekmektedir</td></tr><tr><td>Kitosan tozu (orta molekül ağırlığında)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>448877</td><td>lot MKBH1108V kullanılmıştır. Polisakkaritler</td></tr><tr><td>Asetik asit - Unilab</td><td>Ajax Finechem</td><td>2-2.5L GL</td><td>laboratuvar reaktifi</td></tr><tr><td>Dimetilsülfoksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4540</td><td>laboratuvar reaktifi, cilt için hafif tehlikeli, yutulduğunda tehlikeli</td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit gibi</td> doğal ürünlerde partiden partiye önemli farklılıklar meydana gelir;<td>Sigma-Aldrich</td><td>221465&nbsp;</td><td>laboratuvar reaktifi, aşındırıcı ve nbsp;</td></tr><tr><td>1-etil-3- (3-dimetilaminopropil) karbodiimid ve nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D80002</td><td>Cildi tahriş eder&nbsp;</td></tr><tr><td>N-hidroksisüksinimit&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>130672</td><td>Cildi tahriş edici</td></tr><tr><td>Sodyum klorür&nbsp;</td><td>Ajax Finechem</td><td>466-500G</td><td>laboratuvar reaktifi</td></tr><tr><td>Potasyum klorür - Univar</td><td>Ajax Finechem</td><td>384-500G</td><td>analitik reaktif, hafif cildi tahriş eden</td></tr><tr><td>Disodyum hidrojen fosfat - Unilab</td><td>Ajax Finechem</td><td>1234-500G</td><td>laboratuvar reaktifi, hafif cildi tahriş edici</td></tr><tr><td>Potasyum dihidrojen fosfat - Univar</td><td>Ajax Finechem</td><td>4745-500G</td><td>analitik reaktif, hafif cilt tahriş edici</td></tr><tr><td>Oligoakrilat standardı</td><td>ısmarlama</td><td></td><td>Sentetik protokol için referansa bakınız: Castignolles, P.; Gaborieau, M.; Hilder, E. F.; Sprong, E.; Ferguson, C.J.; Gilbert, R. G. Macromol. Rapid Commun. 2006, <güçlü>27</güçlü>, 42-46</td></tr><tr><td>Borik asit&nbsp;</td><td>BDH AnalR, Merck Pty Ltd</td><td>10058</td><td>Korozif</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit - Unilab</td><td>Ajax Finechem</td><td>A1367-2.5L</td><td>laboratuvar reaktifi, aşındırıcı</td></tr><tr><td>Erimiş silika boru</td><td>Polymicro (Molex)</td><td>TSP050375</td><td>Standart poliimid kaplamalı esnek erimiş silika kılcal boru, 50 &mikro; m iç çap, 363 & m dış çap&nbsp;</td></tr><tr><td>Agilent 7100 CE</td><td>Agilent Technologies</td><td>G7100CE</td><td>Kılcal elektroforez cihazı</td></tr><tr><td>Orbital çalkalayıcı&nbsp;</td><td>IKA</td><td>KS260</td><td></td></tr><tr><td>Elektronik terazi</td><td>Mettler Toledo</td><td>MS204S</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Sentez&nbsp;</td><td>Millipore ZMQS5VF01</td><td></td><td>Ultrasaf su filtrasyon sistemi</td></tr><tr><td>Parafilm&nbsp;</td><td>Labtek</td><td>PM966</td><td>Parafin mumu</td></tr></tbody></table>

kapiler elektroforez real time kitosan films üzerine peptit aşılama monitör

Capillary Electrophoresis to Monitor Peptide Grafting onto Chitosan Films in Real Time

Özgür-çözelti kılcal elektroforezi (CE), bir elektrik alanının uygulanmasıyla çözeltisi analitlerin genellikle şarj bileşikleri ayırır. kromatografi gibi diğer analitik ayırma teknikleri ile karşılaştırıldığında, CE, sağlam, ucuz ve etkili bir şekilde (karmaşık, doğal matrisler ya da polimerik bir numune sayısı için) herhangi bir numune hazırlamasını gerektirir. CE hızlı ve ayrılan bileşikler için gözlenen sinyal çözeltisi içindeki miktarı ile doğru orantılı olarak, gerçek zamanlı olarak (örneğin, kimyasal reaksiyon kinetiği) karışımların evrimi takip etmek için kullanılabilir. Burada, CE verimliliği sonraki biyomedikal uygulamalar için kitosan filmlerin üzerine peptidlerin kovalent aşılama izlemek için gösterilmiştir. Kitosan antimikrobiyel ve biyouyumlu özellikleri böyle hücresi büyüme yüzeylerde gibi biyomedikal uygulamalarda çekici bir malzeme yapmak. Kovalent peptid RGDS (arjinin aşılama - glisin -aspartik asit - serin) kitosan filmlerin yüzeyine hücre eki geliştirmeyi amaçlamaktadır. Tarihsel olarak, kromatografi ve amino asit analizi aşılanmış peptidin miktarı doğrudan ölçümünü sağlamak için kullanılmaktadır. Ancak, CE tarafından sağlanan örnek hazırlama hızlı ayrılması ve yokluğu peptid aşılama sürecinin eşit doğru ama gerçek zamanlı izlenmesini sağlar. CE ayrılması ve reaksiyon karışımının farklı bileşenlerinin ölçülmesi mümkün: (non-aşılı) peptid ve kimyasal ilave maddeleri içerebilir. Bu şekilde, CE kullanımı alt uygulamaları için geliştirilmiş filmler ile sonuçlanır. kitosan filmler katı hal NMR (Nükleer Manyetik Rezonans) Spektroskopisi vasıtasıyla karakterize edildi. Bu teknik daha zaman alıcı ve gerçek zamanlı olarak uygulanabilir, ancak peptit direkt ölçümü verir ve bu nedenle CE tekniğini doğrular.

CE kitosan filmleri üzerine peptidler (ör RGDS) aşılanmasını takip için uygundur. Müsait bağlama maddeleri kitosan üzerine aşılanabilir (Şekil 1) peptidi aktive EDC-HCl ve NHS bulunmaktadır. CE reaksiyon ortamından farklı ilgi molekülleri ayırabilmektedir. elektroferogramdaki üzerinde doruklarına atamak için, saf RGDS, EDC-HCl ve NHS, çözünmüş enjekte ve ayrı ayrı ayrıldı. Pik belirlemesinden sonra, reaksiyon ortamı enjekte edilmiştir ve çeşitli reaktifler <stro...

Ücretsiz çözelti kapiler elektroforezi, kimyasal reaksiyonların gerçek zamanlı olarak kantitatif olarak izlenmesini sağlayan hızlı, ucuz ve sağlam bir analitik yöntemdir. Hızlı, kullanışlı ve hassas analiz için faydası, burada gelişmiş hücre yapışması için kitosan filmler üzerine kovalent peptit aşılamasının analizi yoluyla gösterilmiştir.

Kapiler Elektroforez Real Time Kitosan Films üzerine Peptit Aşılama Monitör

Free-solution capillary electrophoresis (CE) separates analytes, generally charged compounds in solution through the application of an electric field. ...

Bu kapiler elektroforez yönteminin genel amacı, peptitlerin kitosan filmler üzerine aşılama reaksiyonunu gerçek zamanlı olarak izlemektir. Bu yöntem, reaksiyonun nasıl ilerlediği ve aşılama sürecinin ne kadar verimli olduğu gibi analitik kimya ve polimer kimyası alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, herhangi bir numune hazırlama işlemine gerek duyulmaması ve reaksiyon karışımının gerçek zamanlı olarak analiz edilebilmesidir.Bu yöntem reaksiyon süreçleri hakkında bilgi sağlayabilse de, bir anti-kanser ilacın ilaç taşıyıcısına bağlanması veya pirinç ya da kahvaltılık gevreklerin sindirimi gibi bir sisteme de uygulanabilir. İki gram glasiyal asetik asit tartın ve ultra saf su ile 100 mililitreye tamamlayın. 1,7 gram kitosan tozuna 100 mililitre %2 kütlece asetik asit sulu çözeltisi ekleyin.Oda sıcaklığında, alüminyum folyo ile kapatılmış olarak veya karanlıkta, bir karıştırma çubuğu ve manyetik karıştırıcı plaka ile beş gün boyunca karıştırın. Kitosan dispersiyonunu 23 °C'de, 1.076 ×g hızında bir saat boyunca santrifüj edin. Santrifüj işleminin ardından, süpernatantı bir şırınga yardımıyla toplayın ve çökeleği atın.Her film için, oda sıcaklığında 10 mililitre kitosan süspansiyonunu dokuz santimetrelik plastik bir Petri kabına paylaştırın. Filmleri kurumaları için kapalı olarak en az yedi gün bekletin. Kurumuş filmleri makas kullanarak birer santimetrelik kareler şeklinde kesin.Deney bu aşamada durdurulabilir. 10 adet kare kitosan filmi, oda sıcaklığında bir Petri kabı içerisinde beş mililitre PBS ile iki saat boyunca yıkayın. Bu süre zarfında, kapiler elektroforez cihazını hazırlayın ve doğrulayın.Kılcal borunun polimer dış kaplamasını, belirlenen uzunlukta küt uçlu bir aletle zayıflatıp ardından kılcal boruyu kırarak, 50 mikrometre iç çapında ve 43.5 santimetre uzunluğunda çıplak erimiş silika bir kılcal boru hazırlayın. Girişten 8.5 santimetre uzaklıktaki polimer kaplamayı bir çakmak yardımıyla yakarak kılcal boru için bir pencere oluşturun. Kılcal boru soğuduktan sonra etanol ile temizleyin.Ardından, kapilerle kaplamayı her iki uçtan birkaç milimetre boyunca bir çakmakla yakın. Soğuduktan sonra, etanol ile ikinci kez temizleyerek silin. Kapileri deteksiyon penceresinin içine yerleştirin ve giriş ile çıkış kısımlarına eşit uzunluklarda konumlandırıp kasetin millerine sararak kapiler kasete monte edin.Ardından, kaseti kapiler elektroforez cihazına yerleştirin. Her ayırma işlemi için yöntemin parametrelerini ayarlayın. Yazılım menüsünden Method seçeneğini, ardından Edit the Entire Method seçeneğini belirleyin.CE koşullarını düzenlemek için CE sekmesini seçin. Ayırma işlemi için kullanılacak sıcaklığı, süreyi, voltajı ve vialleri belirleyin. Ön Koşullandırma bölümünde, ardışık yıkama işlemlerini ayarlayın.Dizideki ilk yöntem için 10 dakika 1 molar sodyum hidroksit, beş dakika 0,1 molar sodyum hidroksit, beş dakika ultra saf su ve beş dakika pH 9,2'de 75 milimolar sodyum borat tamponu kullanın. Aynı prosedürü takip ederek dizideki diğer yöntemleri kontrol edin. Sonraki yöntemler için, Ön Koşullandırma bölümündeki ardışık durulamaları bir dakika 1 molar sodyum hidroksit ve beş dakika pH 9,2'de 75 milimolar sodyum borat tamponu olarak ayarlayın.Enjeksiyon bölümünde, tüm yöntemler için 10 saniye boyunca 30 milibar basınçla hidrodinamik enjeksiyon parametrelerini ayarlayın. Ayırma bölümünde, tüm yöntemler için ayırma koşullarını 25 santigrat derecede dokuz dakika boyunca 30 kilovolt olarak ayarlayın. Nötr bir iç standardı enjekte edin ve ayırın.Nötr iç standart için, 450 µL 75 mM sodyum borat tamponu ile seyreltilmiş, su içinde %10 hacim/hacim DMSO'nun 10 µL'sini kullanın. Sekansa başlamadan önce, sekans parametrelerinin doğru klasöre ve dosya numarasına ayarlandığından emin olun. Ardından deneyi başlatmak için Sequence düğmesine basın.Standartların ayrılması, bir deney yürütülmeden önce cihazın doğrulanmasına olanak tanır. Bu, başarılı bir deney için temel gerekliliktir. Ardından, kapiler kineserliliğini kontrol etmek için aynı yöntemle bir oligoakrilat standart enjekte edin ve ayırın.Aşılama reaksiyonu başlayana kadar sekansı burada durdurun. RGDS'nin kitosan filme aşılanmasını gerçekleştirmek için öncelikle peptidi ve kenetleme ajanlarını tartın. Kitosan filmin PBS içinde bekletilme işleminin başlamasından iki saat sonra, peptidi ve kenetleme ajanlarını beş mililitre PBS içinde çözün.Bu çözeltiden 50 µL'lik bir alikot alın ve internal nötr standart olarak su içinde hacimce hacme %10 DMSO'dan iki µL ekleyin. Alikotu, öncekiyle aynı analiz koşullarını kullanarak kapiler elektroforez ile analiz edin. Ardından, kitosan filmlerini durulamak için kullanılan PBS'yi Petri kabından uzaklaştırın.Peptit ve kenetleme ajanlarından oluşan beş mililitrelik çözeltiyi, kitosan filmlerin bulunduğu Petri kabına ekleyin. Petri kabını parafin film ile kapatın ve oda sıcaklığında orbital çalkalayıcıya yerleştirin. Belirlenen zamanlarda reaksiyon ortamından 50 µL'lik alikotlar alın.Reaksiyon ortamından alınan alikotların derhal analiz edilmesi gerekmektedir. Gerçek zamanlı analize olanak sağlamak için uygun adımlar hızlı bir ardışıklıkla uygulanmalıdır. Her bir alikota iç neutral standart olarak suda %10 hacim/hacim DMSO'dan 2 µL ekleyin.Alikotları alındıkları anda kapiler elektroforez ile analiz edin. Ayırmalar tamamlandığında, kapileri 10 dakika boyunca ultra saf su ile durulayın. Dört saatlik çalkalama ve alikot alma işleminin ardından, Petri kabını çalkalayıcıdan çıkarın.Reaksiyon ortamı Petri kabından uzaklaştırıldıktan sonra, kitosan filmleri durulamak için beş mililitre PBS ekleyin. PBS'yi Petri kabından uzaklaştırın, kitosan filmlerini ultra saf su ile durulayın ve gece boyunca kurumaya bırakın. Filmleri plastik bir Petri kabında -20 °C'de saklayın.Kimyasal reaksiyonun ilk alikvotuna ait temsilci sonuçlar, farklı kimyasal reaktantların ayrımını göstermektedir. Bu aşamadaki RGDS peptit piki reaksiyonun başlangıç noktasıdır ve aşılama verimliliğini nicelleştirmek için kullanılabilir. Aşılama reaksiyonu sürekli olarak izlendikçe, RGDS pikinin alanı sabit kalana kadar azalmaya devam eder ve bu durum deneyin sona erdiğini belirtir.Reaksiyon ilerledikçe beklendiği üzere, EDC HCl pikinin sağında ikinci bir pik belirir. RGDS pikinin zamana göre entegrasyonu, peptid tüketiminin hesaplanmasına olanak tanır. PBS içindeki kitosan filmlerinin şişmiş durumdaki NMR spektroskopisi; RGDS aşılama işleminin, kitosan filminin ve RGDS peptidi ile aşılanmış veya PBS içinde şişmiş kitosan filminin tespit edilmesini sağlar.Yıldız işareti RGDS'ye atanan sinyalleri temsil eder. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, işlem düzgün bir şekilde yürütülürse altı saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, tüm çözeltilerin önceden hazırlanmasının önemli olduğunu unutmamak gerekir.Bu prosedürün ardından, grafik deneylerinin doğrudan doğrulanması gibi ek soruları yanıtlamak amacıyla katı hal hayvan spektroskopisi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, kimyasal reaksiyonların izlenmesinde serbest çözelti kapiler elektroforezinin nasıl kullanılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

capillary-electrophoresis-to-monitor-peptide-grafting-onto-chitosan

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Biz gelecekteki nükleik asit temelli tedaviler için daha iyi kontrol ve sentez üniforma ve özelleştirilebilir polyplexes sağlaması bekleniyor polielektrolit polyplexes oluşumunu araştırmak için yeni ve güçlü bir entegrasyon sahipliği yapacaktır (QD-FRET) ve Mikroakiskan sunuyoruz.

Birleştiren QD FRET Mikroakiskan Real-Time DNA Nanocomplex Self-Meclis Monitör

Bu, insan serumu ile düşük molekül ağırlıklı proteinler ve peptitler selektif geri kazanımı için gözenekli silis ince film dayanan bir teknoloji geliştirilmiştir. Bizim gözenekli cips fiziko-kimyasal özellikleri ince peptid zenginleştirme önemli kontrolü sağlamak ve sonuçta tanısal amaçlı serum proteom profil ayarlı edildi.

Biyomarker Discovery için Mezogözenekli Silika İnce Filmler üzerine düşük molekül ağırlıklı Protein Zenginleştirme

Bu makale, bir biofabrication yaklaşımı tarif: hücreleri ya da proteinler ile fonksiyonelleştirilmiş edilebilir biyouyumlu filmler oluşturmak üzere yanlı elektrotlar varlığında uyaran-tepkisel polisakaritler çökelmesi. Biz, laboratuar-on-a-çip etkileşimli uygulamalar için biofunctionalized yüzeyler oluşturmak için filmler gibi temel kullanımların üretimi için, bir tezgah üstü stratejisi göstermektedir.

Biofabrication ile Bio-Elektronik Arayüz Bridging

Burada doku mühendisliği için farklı katmanları arasında sürekli arabirimleri ile biyouyumlu, katmanlı matrisler oluşturmak için benzersiz bir strateji belirlemelidir. Böyle bir iskele çeşitli biyolojik, kimyasal ya da mekanik yardımlar yaparak hücre davranışı modüle ideal özelleştirilebilir ortamı...

Yoğunluk Gradient Katmanlı Polimerizasyonu (DGMP): Multi-bölmesi oluşturma için A Novel Tekniği, Doku Mühendisliği için Özelleştirilebilir İskelesi

Doku mühendisliği için iskeleler, hücresel nişin karmaşık biyokimyasal ve biyofiziksel mikro çevresini özetlemelidir. Burada, sürekli biyokimyasal salınımlı kompozit, çok bileşenli polimerik iskeleler oluşturmak için bir platform olarak arayüzey polielektrolit kompleksleştirme liflerinin kullanımını gösteriyoruz.

Biyomoleküllerin Geçici olarak Kontrollü Release için Yüzey Polielektrolit Elyaf Kompozit Yapı iskeleleri

poli (N-izopropil akrilamid) -graft-kondroitin sülfat oluşan enjekte edilebilir doku mühendisliği iskelesi (PNIPAAm-g-CS) içeren aljinat mikro hazırlandı. Özellikleri ve in vitro biyouyumluluk şişme yapışma mukavemeti, bu çalışmada incelenmiştir. Burada geliştirilen karakterizasyon teknikleri diğer thermogelling sistemleri için geçerli olabilir.

Doku Mühendisliği Aljinat mikropartiküllerin ile Thermogelling Poli (N-izopropil) -graft-kondroitin Sülfat Kompozitlerin Sentezi

Biyokimyasal ve yapısal analizleri glikozile proteinlerin homojen örnekleri nispeten büyük miktarda gerektirir. Burada, reaktif Cys thiols hedefleyerek bakterilerden saflaştırılmış rekombinant proteinlerin siteye özgü Glikozilasyon için verimli bir kimyasal yöntem mevcut.

Sistein Thiols rekombinant proteinler Vitro siteye özgü Glikozilasyon için hedefleme

Burada, floresan peptidler yerli protein yerine parçalanabilir substrat olarak kullanıldığı bir değiştirilmiş zymographic teknik için detaylı bir iletişim kuralı mevcut. Elektroforez floresan peptid zymograms Biyolojik örneklerin daha önceki zymographic teknikleri geniş proteaz tespiti sağlar.

Floresan peptid Zymography tarafından proteaz aktivitesinin algılama

Donma-eritme yöntemi çapraz ajanlar olmadan chitosan-poly (vinil alkol) hidrojeller üretmek için kullanılır. Bu yöntem için, elde edilen hidrojellerin özelliklerini ve uygulamalarını etkileyebilecek donma koşulları (sıcaklık, çevrim sayısı) ve polimer oranı göz önünde bulundurulması önemlidir.

Crosslinking Ajanlar ve Diflunisal Salınım Çalışmaları olmadan Chitosan-Poly(vinil alkol) Hydrogels hazırlamak için Bir Freeze-Eritme Yöntemi

Mevcut protokol, kitosan-genipin mikrojellerinin üretimi için emülsiyon bazlı olmayan bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu mikrojellerin boyutu hassas bir şekilde kontrol edilebilir ve pH'a bağlı şişlik gösterebilir, in vivo olarak bozulabilir ve zamanla sürekli bir şekilde salınan terapötik moleküllerle yüklenebilir, bu da onları doku mühendisliği uygulamaları için oldukça alakalı hale getirir.

Doku Mühendisliği Uygulamaları için Boyut Kontrollü ve Emülsiyonsuz Kitosan-Genipin Mikrojellerinin İmalatı

Bu makale, hücre dışı vezikül alt kümelerinin karakterizasyonu için artan verime sahip yeni nesil multiparametrik analitik platformlar önermektedir. Yöntem, bir mikroarray biyoçipinde sıkışmış veziküler hedefleri nitelemek için Raman spektroskopisi ile birleştiğinde, atomik kuvvet mikroskobu ile metrolojik ve morfomekanik analizlerle çoklanmış biyosensing yöntemlerinin bir kombinasyonuna dayanmaktadır.

Hücre Dışı Vezikül Alt Kümelerinin Analizi için Çok Katlı Yüzey Plazmon Rezonans Görüntüleme Çipi Üzerinde Multimodal Analitik Platform

Öğrenin, kitosan filmlere peptit aşılamayı gerçek zamanlı izlemek için kapiler elektroforez yöntemini. Bu analitik kimya tekniği, reaksiyon kinetiği ve verimlilik hakkında hassas veriler sağlar.

Kapiler Elektroforez Real Time Kitosan Films üzerine Peptit Aşılama Monitör

Daha fazla video keşfet