Measuring G-protein-coupled Receptor Signaling via Radio-labeled GTP Binding

Chirag Vasavda; Nicholas W. Zaccor; Paul C. Scherer; Charlotte J. Sumner; Solomon H. Snyder

doi:10.3791/55561

Radyo-etiketli GTP Bağlanması vasıtasıyla G-protein ile birleşmiş Reseptör Sinyalizasyonunun Ölçümü

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

Measuring G-protein-coupled Receptor Signaling via Radio-labeled GTP Binding

Radyo-etiketli GTP Bağlanması vasıtasıyla G-protein ile birleşmiş Reseptör Sinyalizasyonunun Ölçümü

Full Text

17,266 Views

10:13 min

June 9, 2017

DOI: 10.3791/55561-v

Chirag Vasavda*¹, Nicholas W. Zaccor*¹, Paul C. Scherer¹, Charlotte J. Sumner^1,2, Solomon H. Snyder^1,3,4

¹The Solomon H. Snyder Department of Neuroscience,Johns Hopkins University School of Medicine, ²Department of Neurology and neurosurgery,Johns Hopkins University School of Medicine, ³Departments of Pharmacology and Molecular Sciences,Johns Hopkins University School of Medicine, ⁴Department of Psychiatry and Behavioral Sciences,Johns Hopkins University School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Guanozin trifosfat (GTP) bağlanması, G-Protein-Çiftleşmiş Reseptör (GPCR) aktivasyonundaki en erken olaylardan biridir. Bu protokol, radyo-etiketli GTP analoğu, [35S] guanozin-5'-O- (3-tio) trifosfatın ([35S] GTPyS) bağlanmasını izleyerek spesifik GPCR-ligand etkileşimlerinin farmakolojik olarak nasıl karakterize edildiğini açıklamaktadır. Ilginin bir ligandına cevap.

Bu prosedürün genel amacı, G-proteinine bağlı reseptörler veya GPCR'ler içeren hücresel zarları izole etmek ve fonksiyonel bir GTP bağlama denemesi kullanarak GPCR farmakolojisini incelemektir. Bu yöntem, biyokimya alanında, yerleşik veya yetim G-proteinine bağlı reseptörlerin farmakolojik özellikleri ile ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Başlıca avantajları, basit, hızlı olması ve G-proteinine bağlı reseptör sinyallemesindeki en proksimal olayı ölçmesidir.

İlk olarak, insan embriyonik böbrek hücrelerini 10 mililitre tam DMEM'de 10 santimetrelik bir doku kültürü plakasına yerleştirin. Hücreleri 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte,% 70 ila% 80 birleşmeye ulaşılana kadar inkübe edin. İnkübasyonun ardından, üreticinin yönergelerine göre uygun bir transfeksiyon reaktifi kullanarak hücreleri HAMOR1 ile transfekte edin.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

Biyokimya Sayı 124 Hücresel fraksiyonlama membran hazırlama GPCR agonist antagonist GTPγS bağlanması farmakoloji μ-opioid reseptörü