Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1^gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Bu prosedürün genel amacı, sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial hücre dağılımı hakkında bilgi elde etmek için spektral alan optik koherens tomografi ve taramalı lazer oftalmoskopi kullanmaktır. Bu yöntem, deneysel oftalmoloji alanındaki retina anormallikleri ve mikroglial hücre birikimi arasındaki korelasyon hakkındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajları, bu bilgilerin gerçek zamanlı olarak non-invaziv bir şekilde elde edilebilmesidir.

Kornea sürüntüsüne yanıt verilmediğini onayladıktan sonra, fareyi platformun sol tarafına, sağ yörüngesi lense bakacak şekilde yüzüstü pozisyona getirin. Sağ göze artı dört diyoptri, sert, gaz geçirgen kontakt lens içinde bir damla hidroksipropil metilselüloz uygulayın ve çekim modülünü başlatın. B taramaları için, Uygulama ve Yapı altında Kızılötesi artı Optik Tutarlı Tomografi seçeneğini belirleyin, Retina'yı seçin ve lensi fare gözüne doğru hareket ettirmek için mikro manipülatörü kullanın.

Retinaya odaklanmadan önce, oculus dexter göstergesinin seçili olduğunu onaylayın, ardından monitör ekranının sol tarafındaki fundus görüntüsünde büyük damarlar net bir şekilde görünene kadar retinaya yakınlaştırmak için odak düğmesini kullanın. Kameranın konumunu gerektiği gibi ayarlamak için mikro manipülatörü kullanın, fundus görüntüsünün parlaklığını uygun şekilde azaltmak veya artırmak için hassasiyet düğmesini çevirin. Desen menüsünden Çizgi Tarama'yı seçin ve B taramasını spektral alan optik koherens tomografi veya SD-OCT tarama penceresinin üst ve alt köşeleri arasında hareket ettirmek için mikro manipülatörü kullanın.

Yüksek görüntü kalitesi elde etmek için Otomatik Gerçek Zamanlı değerini en az dokuz olarak ayarlayın ve Al'ı tıklatın. Tüm görüntüler elde edildiğinde, kontakt lensi gözden taze dengeli tuz çözeltisine aktarın ve korneayı taze bir damla hidroksipropil metilselüloz ile nemlendirin. Sol göz görüntülendikten sonra, standart 30 derecelik optiği çıkarmak için saat yönünün tersine çevirin ve ikinci bir görüntüleme turu için 55 derecelik lensi monte edin.

Otomatik floresansı değerlendirmek için, fareyi hareket ettirmeden kontrol panelinde Kızılötesi'ni seçin ve büyük retina damarlarına odaklanın. Otomatik floresan görüntülemeyi seçin ve görüntü parlaklığını gerektiği gibi ayarlamak için hassasiyet düğmesini kullanın. Hassasiyet düğmesine bir kez basın ve otomatik gerçek zamanlı değeri en az 67'ye ayarlayın.

Otomatik gerçek zamanlı değere ulaşıldığında, görüntüyü alın ve ortalamayı durdurmak için hassasiyet düğmesine ikinci kez basın. Deneysel olarak uygun olan farklı retina katmanlarını görselleştirmek için odağı ayarlayın. Tüm görüntüler elde edildiğinde, geniş alanlı 102 derecelik merceğe optik üzerine ve az önce gösterildiği gibi her bir gözdeki otomatik floresansı görüntüler.

Her görüntüdeki manuel retina kalınlığını ölçmek için, OCT taramasını açmak için ilk deney hayvanının adına çift tıklayın. 30 veya 55 derecelik lensle elde edilen bir B taraması açın ve kalınlık profilini seçin. Edit Layer Segmentations (Katman Segmentasyonlarını Düzenle) simgesini tıklayın.

Yazılım, iç sınırlayıcı ve taban membranlarını otomatik olarak tanımlayacaktır. Membranların konumunu manuel olarak düzeltmek için, değiştirilecek katmanı ve kırmızı daire seçeneğini seçin. Fare düğmesini basılı tutarak, ilgili katman doğru şekilde konumlandırılana kadar çizgiyi değiştirmek için daireyi hareket ettirin ve pencereden çıkmak için Kaydet ve Kapat'a tıklayın.

Katman seçeneği altında, Retina'yı seçin ve seçilen konum için retina kalınlığını görüntülemek için diyagramda farklı bir konuma tıklayın. Ardından retina kalınlığını ve optik sinir başından istenen mesafeyi ölçün ve değerleri bir elektronik tabloya aktarın. Cx3cr1 promotörü altında gfp'nin ekspresyonu için homozigot bir fareden alınan bu temsili SD-OCT tekli taramalarında, retina mimarisi hem 30 derece hem de 55 derece lens görüntülerinde net bir şekilde görselleştirilir.

Ancak 30 derece lens ile elde edilen taramalarda koroidin yüksek bir yansıtıcılığı gözlenir. SD-OKT'yi takiben, taramalı lazer oftalmoskopi, 102 derecelik lens ile elde edilen daha geniş fundus alanı kapsama alanına sahip 55 derece veya 102 derecelik bir lens kullanılarak retinadaki tek tek gfp pozitif mikroglial hücrelerin görüntülenmesine olanak tanır. SD-OCT taramalarında, iç sınırlayıcı ve taban membran retina sınırlarının manuel olarak düzeltilmesinden sonra, optik sinir başından aynı mesafe ölçüldüğünde tipik olarak 30 ve 55 derecelik lensler arasında retina kalınlığı ölçümünün iyi bir korelasyonu gözlenir.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa elli dakikadan daha kısa sürede tamamlanabilir. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, deneysel oftalmoloji alanındaki araştırmacıların in vivo olarak küçük kemirgenlerde retina patolojisini keşfetmelerinin yolunu açtı.