Name: Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Keşfedin, spektral alan optik koherens tomografi ve tarama lazer oftalmolojisi kullanarak Cx3cr1 muhabir farelerde retinal kalınlık ve mikroglial hücre dağılımını gerçek zamanlı ve invaziv olmayan şekilde değerlendirmeyi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser İsviçre Ulusal Bilim Vakfı (SNSF; #320030_156019) bir grant tarafından desteklenmiştir. Yazarlar Heidelberg Engineering GmBH, Almanya kelimelerinde destek aldı.

tüm yordamlarda kullanılan 24 kim gfp Cx3cr1 organizatörü altında hızlı BALB/c yetişkin erkek ve dişi fareler vardı. Fareler ARVO açıklamaya göre Ophthalmic ve vizyon araştırma hayvanlar kullanımı için tedavi edildi ve tüm yordamları hayvan refah İsviçre Federal düzenlemelerini göre İsviçre hükümetinin kabul edildi. Fareler medetomidine hidroklorid (0.75 mg/kg) ve ketamin (45 mg/kg) subkutan enjeksiyon tarafından anestezi. Uygun anestezi olduğunu doğruladı solunum hızı ve hayvan izleyerek &#39; s refleks bir kuyruk tutam karşı. Deney sonunda, CO 2 inhalasyon ile fareler euthanized.
 Not: görüntüleme her oturum (en fazla 20 dk) olabildiğince hızlı bir şekilde gerçekleştirmek, katarakt oluşumu beri aşağıdaki anestezi retina görselleştirme 30 engel olabilir.
 1. sistem yapılandırması <ol><li>bilgisayarı açın.</li>
	<li>Güç kaynağı açın. İleti &#34; başlangıç Alım modülü &#34; aygıtın Denetim Masası ekranda görünecektir.</li>
	<li>Çift yazılımı çalıştırmak için yazılımın masaüstü kısayolunu tıklatın.</li>
	<li>Veritabanı görünümü'nü tıklatın &#34; hasta eklemek &#34; simgesi.</li>
	<li>Açılan pencerede, gerekli tüm bilgileri ekle (Soyadı, adı, başlık, doğum tarihinizi, seks ve hasta-ID) ve'ı tıklatın &#34; Tamam &#34;. Pop penceresinde kornea eğriliği için 2 mm ve'ı tıklatın &#34; ok &#34;.</li>
	<li>78 D standart oftalmik temassız slit lamba camı standart 30 ° optik önünde konumlandırın ve güvenli bir şekilde bant ile tutturmak.</li>
	<li>Filtre kolu cihazın soldaki gösterge üzerinde konumlandırılmış emin olun &#34; A &#34; IR + OCT ve AF ( şekil 1) görüntüleme izin verecek.</li>
</ol> 2. Fare hazırlık <ol><li>Kullanım 0.75 mg/kg ve bir ketamin medetomidine hidroklorid doz doz 45 mg/kg fosfat tamponlu tuz çözeltisi (anestezi çözüm hazırlamak için PBS, pH 7,4) içinde. Böylece, bir 20 g fare için ketamin son hacmiyle 50 µL PBS 18 µL medetomidine hidroklorid 15 µL karıştırın. Bir hafta kadar çözüm 4 ° C'de depolayın.</li>
	<li>Fare scruff ile kavramak ve Gözbebeklerin büyümesinden elde etmek için her göz tropicamide %0,5 + phenylephrine hidroklorid %2.5 bir damla uygulamak.</li>
	<li>Fareyi kontrol altında tutmak ve anestezi çözüm 50 µL subkutan insülin şırınga 30 G iğne için bağlı bir enjekte. Geri Isıtma yastığını yerleştirilir onun kafes içinde fare koymak. Fare tamamen uyuşturulmuş kadar 3-5 dk bekleyin. Anestezi derinliği değerlendirmek için fare kuyruk tutam. Kornea refleksi yavaşça fare kornea bir pamuk bez ile dokunarak kontrol edin. Olumlu hiçbir refleks görülmektedir, görüntüleme ile devam. 
	Not: Anestezi sırasında solunum hızı izlemek önemlidir. Fare tamamen uyuşturulmuş değil, solunum hızı acı bir uyarıcı artacaktır.</li>
	<li>% 2 hydroxypropylmethylcellulose bir uygulama ile fare kornea damla her göz kulak hidrat.</li>
</ol> 3. SD-Ekim <ol><li>cihazın çene kalan ( şekil 1) bağlı özel yapım platformunda yaklaşık 32 ° c ısınma bir yama yerleştirin.</li>
	<li>Sağ gözü görüntü platformu ( şekil 1) sol tarafında fare yerleştirin. Fareyi sağ yörüngesini objektif yüzleri ve onun beden platformun sol tarafında yüzükoyun yatıyor olun.</li>
	<li>Hydroxypropylmethylcellulose bir damla sağ gözü üzerinde uygulamak ve dikkatle 4 diyoptri katı gaz geçirgen kontakt lens üzerinde konumlandırın (küresel güç:-25.00 +25.00 diyoptriden için). Kontakt lens dengeli tuz solüsyonu (BSS) depolar. Objektif kapmak için zarar görmemesi için plastik veya silikon forseps kullanın.</li>
	<li>Sarı kutu satın alma modülü ( şekil 2A üzerinde yeşil kutu) başlatmak için Denetim Masası görüntü sağ köşesinde tuşuna basın. Sarı kutu yeşile döndürür ve kontrol paneli menüsünden-ecek gözükmek üstünde belgili tanımlık perde ( şekil 2A).</li>
	<li>B-inceden inceye gözden geçirmek edinimi için kontrol panelindeki ( şekil 2A) IR + OCT seçeneğini belirleyin. Seçili ayarları kontrol panelindeki mavi vurgulanır.</li>
	<li>Select &#34; Retina &#34; altında &#34; uygulama ve yapısı &#34; yazılım ve hareket objektif fare göz doğru micromanipulator istimal belgili tanımlık aygıt ( şekil 1). Retina odaklanan önce şuna bir göstergesi &#34; OD &#34; ekranın sol alt tarafında seçilir. Tanımlar yazılımı otomatik olarak (OS) sol ve sağ (OD) gözü temel amacı konumuna. 
	Not: amaç platform ortasına konumlandırdıysanız, bir hata iletisi ekranın altında görüntülenir. Yazılım doğru göz tanıyana kadar bu durumda fare biraz yeniden konumlandırmak.</li>
	<li>Kadar büyük damarları açıkça içinde fundus imge bilgisayar ekranın sol üstünde görülür odak topuzu ile retina üzerinde odaklanmak. Micromanipulator sol veya kamera bu yönde taşımak için sağa veya saat yönünde veya saat yönünün tersine, kamera taşımak için sırasıyla yukarı veya aşağı doğru çevirerek kamera taşımak. 
	Not: platform üzerinde fareyi yeniden konumlandırmak veya kızılötesi görüntü optik sinir kafasından tercih edilen lokalizasyonu ulaşmak için objektif yukarı veya aşağı taşımak.</li>
	<li>Hassasiyet topuzu azaltmak için saat yönünün tersine veya fundus görüntü parlaklığını artırmak için saat yönünde çevir. Ne zaman en iyi odak elde bir SD-Ekim B-tarama ekranın sağ tarafta görünür. 
	Not: B-inceden inceye gözden geçirmek odak noktası ayarlayarak görüntülenir olamaz, klavye kombinasyonu Ctrl + Alt + üst karakter + O tuşlarına basın. B-inceden inceye gözden geçirmek ekranda görünene kadar açılan pencerede başvuru kol değerini ayarlayın.</li>
	<li>( şekil 2B tek satırda) desen menüsünden tek tarama ekranın sağ altta seçin.</li>
	<li>Micromanipulator ( şekil 1) cihazın sol, sağ, ileri veya geri (kamerayı bu yönde için) açmak B-inceden inceye gözden geçirmek üstü ve altı arasında bulunan olmasını sağlamak için pencere köşeleri, SD-Ekim tarama.</li>
	<li>Ayarla otomatik gerçek zamanlı (sanat) değeri yüksek kalitede görüntü elde etmek için en az 9. 
	Not: Sanat çeşitli ardışık taramaları sayı ortalaması alınarak görüntü kalitesini artırır. Yüksek &#34; sanat &#34; değer, daha yüksek sinyal gürültü oranı ve böylece görüntü kalitesi. Ancak, artırarak &#34; sanat &#34; değeri, edinme zaman da artırdı.</li>
	<li>Basın &#34; elde &#34; düğmesini ( Şekil 2) kontrol paneli ekranında ve görüntüleri.</li>
	<li>Fareyi sol göz görüntü ve adımları 3.2-3.12 tekrar yeniden konumlandırma.</li>
	<li>Plastik/silikon Forseps ile Kontakt lens çıkarın ve BSS yerleştirin.</li>
	<li>Hydroxypropylmethylcellulose taze bir damla ile fare kornea hidrat ve kağıt mendil ile aşırı kaldırmak.</li>
	<li>Standart 30 ° optik Saat yönünün tersine çevirerek kaldırmak.</li>
	<li>55 ° objektif mount ve adımları 3.4-3.12 her göz için yineleyin.</li>
</ol> 4. Floresans Imaging otomatik <ol><li>platform üzerinde fareyi hareket olmadan, IR kontrol panelinden seçin.</li>
	<li>Odak topuzu ile büyük retina damarları üzerinde odaklanmak.</li>
	<li>Kontrol panelinden seçin AF.</li>
	<li>Hassasiyet topuzu azaltmak için saat yönünün tersine çevirmek veya görüntü parlaklığını artırmak için saat yönünde.</li>
	<li>Hassasiyet topuzu basın ve ayarla &#34; sanat &#34; değeri 67 veya yüksek kalite elde etmek için daha fazla resim için.</li>
	<li>Ne zaman set &#34; sanat &#34; değer ulaştı, basın &#34; elde &#34; görüntü elde etmek için kontrol panelindeki. Durdurmayı yeniden ortalama hassasiyet topuzu tuşuna basın. Farklı retina Katmanlar görselleştirmek için odağı ayarlayın.</li>
	<li>55 ° objektif kaldırmak ve geniş alan 102 ° objektif mount. 4.1 adımları izleyin &#8211; 4,6 her fare ve her iki gözde her fare için.</li>
	<li>Tıklama &#8220; görüntüleri kaydetmek &#8221; pencere ve ardından sol üst kenarının üzerinde &#8220; çıkmak &#8221;. Görüntülerin bilgisayara kaydetmek için fareyi ekranın sağ tarafında yanında çift tıkırtı üstünde belgili tanımlık fare ad listeden. Çift ayrı ayrı her resmin üzerine tıklayın ve floppy disk simgesine tıklayın. Resmi olarak .tif, .bmp, .jpg veya .png, istediğiniz klasöre kaydedin. Yazılım basın çıkmak için &#8220; dosya &#8221; ve &#8220; çıkmak &#8221;.</li>
</ol> 5. Anestezi ters <ol><li>hydroxypropylmethylcellulose bir damla fare gözlerle hidrat ve fare bir Isıtma yastığı iade.</li>
	<li>Hazırla atipamezole çözüm medetomidine hidroklorid yatıştırıcı etkileri tersine çevirmek için 2.25 mg/kg dozda. 20 g fare için 150 µL PBS son bir hacim içinde atipamezol 9 µL ekleyin. Bir hafta kadar çözüm 4 ° C'de depolayın.</li>
	<li>sonra anestezi enjeksiyonu (Adım 2.2), enjekte atipamezole çözüm 150 µL subkutan min.</li>
	<li>Anestezi kurtarma kadar fare izleyin. Fare tam olarak kurtarılan (5-10 dk sonra atipamezole enjeksiyon) ne zaman geri, kafese. Kurtarma bir tarafta koydu onun beden açmak için yetenek hayvan simgesiyle yürüyüş etkinliği ve yanıt olarak çevre stimülasyon tepki yeniden kazanmak.</li>
</ol> 6. El ile retina kalınlık ölçüm SD-Ekim görüntülerden <ol><li>OCT inceden inceye gözden geçirmek belgili tanımlık hayvan adını çift tıklatarak açın.</li>
	<li>30 ° veya 55 ° lens ile elde edilen B tarama açık.</li>
	<li>Seç &#34; kalınlığı profil &#34;.</li>
	<li>Basın &#34; düzenleme katman Segmentations &#34; simgesi ( şekil 2B). Yazılımı otomatik olarak iç sınırlama tanımlar ve temel membran.</li>
	<li>Gerekirse, el ile düzeltin iç sınırlama pozisyon ve baz membran. Bunu yapmak için ekran ve ardından kırmızı daire seçeneği ( şekil 2B) sol taraftan değiştirilecek katman'ı seçin. Hareket satırı değiştirin için fare düğmesini daireyle basmış.</li>
	<li>İlgili katman doğru şekilde konumlandırmak için satırı değiştirin. ' I tıklatın &#34; kaydedin ve kapatın &#34; pencereden çıkmak için. 
	Not: koroid yansıtırlık nedeniyle, belgili tanımlık bilgisayar yazılımı temel membran yanlış tespit edebilir. Böylece, retina kalınlığı ölçümleri geçmeden önce el ile tanımlamak için tercih edilir.</li>
	<li>Seç &#34; Retina &#34; altında &#34; katman &#34; seçeneği. Bir diyagramı retina kalınlığı ekranın altında görüntülenir.</li>
	<li>Seçili pozisyon için ya diyagram üzerinde ya da taramasında B-retina kalınlığı (µm gösterilen) görüntülemek için farklı bir konumda tıklatın.</li>
	<li>Optik sinir başı istenilen mesafe içinde retina kalınlık ölçümü ve elektronik tablodaki değerleri kopyalamak.</li>
	<li>5.1-5,9 her fare 30 ° ve 55 ° lens için için adımlar yineleyin.</li>
	<li>İstenen yazılım ile istatistiksel analiz.</li>
</ol>

<ol><li>Madeira, M. H., Boia, R., Santos, P. F., Ambrosio, A. F., Santiago, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+microglia-mediated+neuroinflammation+to+retinal+degenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Contribution of microglia-mediated neuroinflammation to retinal degenerative diseases.</a> Mediators Inflamm. , 673090(2015).</li>
<li>Ng, T. F., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-induced+migration+of+retinal+microglia+into+the+subretinal+space%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Light-induced migration of retinal microglia into the subretinal space.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (13), 3301-3310 (2001).</li>
<li>Langmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+activation+in+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Microglia activation in retinal degeneration.</a> J Leukoc Biol. 81 (6), 1345-1351 (2007).</li>
<li>Joly, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+phagocytes%3A+resident+microglia+and+bone+marrow+immigrants+remove+dead+photoreceptors+in+retinal+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cooperative phagocytes: resident microglia and bone marrow immigrants remove dead photoreceptors in retinal lesions.</a> Am J Pathol. 174 (6), 2310-2323 (2009).</li>
<li>Arroba, A. I., Alvarez-Lindo, N., van Rooijen, N., de la Rosa, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia-mediated+IGF-I+neuroprotection+in+the+rd10+mouse+model+of+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Microglia-mediated IGF-I neuroprotection in the rd10 mouse model of retinitis pigmentosa.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (12), 9124-9130 (2011).</li>
<li>Zhang, C., Lam, T. T., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+populations+of+microglia%2Fmacrophages+in+the+retina+and+their+activation+after+retinal+ischemia+and+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous populations of microglia/macrophages in the retina and their activation after retinal ischemia and reperfusion injury.</a> Exp Eye Res. 81 (6), 700-709 (2005).</li>
<li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+properties+of+the+mouse+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Optical properties of the mouse eye.</a> Biomed Opt Express. 2 (4), 717-738 (2011).</li>
<li>Lozano, D. C., Twa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+schematic+eye+from+in+vivo+biometry+and+the+correction+of+lateral+magnification+in+SD-OCT+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in SD-OCT imaging.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).</li>
<li>Vaz-Pereira, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+Coherence+Tomography+Features+Of+Active+And+Inactive+Retinal+Neovascularization+In+Proliferative+Diabetic+Retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Optical Coherence Tomography Features Of Active And Inactive Retinal Neovascularization In Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Retina. 36 (6), 1132-1142 (2016).</li>
<li>Kokona, D., Haner, N. U., Ebneter, A., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+macrophage+dynamics+with+optical+coherence+tomography+in+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging of macrophage dynamics with optical coherence tomography in anterior ischemic optic neuropathy.</a> Exp Eye Res. , (2016).</li>
<li>Makiyama, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macular+cone+abnormalities+in+retinitis+pigmentosa+with+preserved+central+vision+using+adaptive+optics+scanning+laser+ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Macular cone abnormalities in retinitis pigmentosa with preserved central vision using adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy.</a> PLoS One. 8 (11), e79447(2013).</li>
<li>Paques, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+fundus+imaging+by+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">High resolution fundus imaging by confocal scanning laser ophthalmoscopy in the mouse.</a> Vision Res. 46 (8-9), 1336-1345 (2006).</li>
<li>Joshi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneously+occurring+fundus+findings+observed+using+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy+in+wild+type+Sprague+Dawley+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Spontaneously occurring fundus findings observed using confocal scanning laser ophthalmoscopy in wild type Sprague Dawley rats.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 77, 160-166 (2016).</li>
<li>Muraoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+rabbit+retina+with+retinal+degeneration+by+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of rabbit retina with retinal degeneration by using spectral-domain optical coherence tomography.</a> PLoS One. 7 (4), e36135(2012).</li>
<li>Fischer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive%2C+in+vivo+assessment+of+mouse+retinal+structure+using+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography.</a> PLoS One. 4 (10), e7507(2009).</li>
<li>Bell, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vasculature+of+adult+zebrafish%3A+in+vivo+imaging+using+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal vasculature of adult zebrafish: in vivo imaging using confocal scanning laser ophthalmoscopy.</a> Exp Eye Res. 129, 107-118 (2014).</li>
<li>Bailey, T. J., Davis, D. H., Vance, J. E., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-domain+optical+coherence+tomography+as+a+noninvasive+method+to+assess+damaged+and+regenerating+adult+zebrafish+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Spectral-domain optical coherence tomography as a noninvasive method to assess damaged and regenerating adult zebrafish retinas.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (6), 3126-3138 (2012).</li>
<li>Huber, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+mouse+models+of+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Spectral domain optical coherence tomography in mouse models of retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (12), 5888-5895 (2009).</li>
<li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+of+Mouse+Retinal+Layers+Using+Automated+Segmentation+of+Spectral+Domain+Optical+Coherence+Tomography+Images%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis of Mouse Retinal Layers Using Automated Segmentation of Spectral Domain Optical Coherence Tomography Images.</a> Transl Vis Sci Technol. 4 (4), 9(2015).</li>
<li>Sim, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+in+vivo+labelling+of+infiltrating+leukocytes+in+the+mouse+retina+using+indocyanine+green+dye%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">A simple method for in vivo labelling of infiltrating leukocytes in the mouse retina using indocyanine green dye.</a> Dis Model Mech. 8 (11), 1479-1487 (2015).</li>
<li>Bosco, A., Romero, C. O., Ambati, B. K., Vetter, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+dynamics+of+retinal+microglial+activation+during+neurodegeneration%3A+confocal+ophthalmoscopic+imaging+and+cell+morphometry+in+mouse+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo dynamics of retinal microglial activation during neurodegeneration: confocal ophthalmoscopic imaging and cell morphometry in mouse glaucoma.</a> J Vis Exp. (99), e52731(2015).</li>
<li>Acton, J. H., Cubbidge, R. P., King, H., Galsworthy, P., Gibson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drusen+detection+in+retro-mode+imaging+by+a+scanning+laser+ophthalmoscope%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Drusen detection in retro-mode imaging by a scanning laser ophthalmoscope.</a> Acta Ophthalmol. 89 (5), e404-e411 (2011).</li>
<li>Greenstein, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+changes+associated+with+normal+and+abnormal+fundus+autofluorescence+in+patients+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Structural and functional changes associated with normal and abnormal fundus autofluorescence in patients with retinitis pigmentosa.</a> Retina. 32 (2), 349-357 (2012).</li>
<li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+fractalkine+receptor+CX%283%29CR1+function+by+targeted+deletion+and+green+fluorescent+protein+reporter+gene+insertion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion.</a> Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+for+Microglia+for+the+Maintenance+of+Synaptic+Function+and+Integrity+in+the+Mature+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Requirement for Microglia for the Maintenance of Synaptic Function and Integrity in the Mature Retina.</a> J Neurosci. 36 (9), 2827-2842 (2016).</li>
<li>Ebneter, A., Casson, R. J., Wood, J. P., Chidlow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+activation+in+the+visual+pathway+in+experimental+glaucoma%3A+spatiotemporal+characterization+and+correlation+with+axonal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Microglial activation in the visual pathway in experimental glaucoma: spatiotemporal characterization and correlation with axonal injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6448-6460 (2010).</li>
<li>Ebneter, A., Kokona, D., Schneider, N., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+Activation+and+Recruitment+of+Circulating+Macrophages+During+Ischemic+Experimental+Branch+Retinal+Vein+Occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Microglia Activation and Recruitment of Circulating Macrophages During Ischemic Experimental Branch Retinal Vein Occlusion.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 944-953 (2017).</li>
<li>Lin, Y. L., Potter-Baker, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+theoretical+models+from+adult+stroke+recovery+to+improve+use+of+non-invasive+brain+stimulation+for+children+with+congenital+hemiparesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Using theoretical models from adult stroke recovery to improve use of non-invasive brain stimulation for children with congenital hemiparesis.</a> J Neurophysiol. , (2017).</li>
<li>Combadiere, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CX3CR1-dependent+subretinal+microglia+cell+accumulation+is+associated+with+cardinal+features+of+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CX3CR1-dependent subretinal microglia cell accumulation is associated with cardinal features of age-related macular degeneration.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2920-2928 (2007).</li>
<li>Bermudez, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+cold+cataract+development+in+anesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Time course of cold cataract development in anesthetized mice.</a> Curr Eye Res. 36 (3), 278-284 (2011).</li>
<li>Toth, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+retinal+morphology+viewed+by+optical+coherence+tomography+and+by+light+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A comparison of retinal morphology viewed by optical coherence tomography and by light microscopy.</a> Arch Ophthalmol. 115 (11), 1425-1428 (1997).</li>
<li>Ebneter, A., Kokona, D., Jovanovic, J., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+Effect+of+Oral+CSF-1R+Kinase+Inhibitor+on+Retinal+Microglia+Revealed+by+In+Vivo+Scanning+Laser+Ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Dramatic Effect of Oral CSF-1R Kinase Inhibitor on Retinal Microglia Revealed by In Vivo Scanning Laser Ophthalmoscopy.</a> Transl Vis Sci Technol. 6 (2), 10(2017).</li>
<li>Gabriele, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+of+spectral-domain+optical+coherence+tomography+total+retinal+thickness+measurements+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Reproducibility of spectral-domain optical coherence tomography total retinal thickness measurements in mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6519-6523 (2010).</li>
<li>Nakao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wide-field+laser+ophthalmoscopy+for+mice%3A+a+novel+evaluation+system+for+retinal%2Fchoroidal+angiogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Wide-field laser ophthalmoscopy for mice: a novel evaluation system for retinal/choroidal angiogenesis in mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (8), 5288-5293 (2013).</li>
<li>Wang, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+of+fundus+hyperautofluorescent+spots+and+their+role+in+retinal+degeneration+in+a+mouse+model+of+Goldmann-Favre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Origin of fundus hyperautofluorescent spots and their role in retinal degeneration in a mouse model of Goldmann-Favre syndrome.</a> Dis Model Mech. 6 (5), 1113-1122 (2013).</li>
<li>Wang, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+origin+of+fundus+autofluorescence+in+patients+and+mice+with+a+defective+NR2E3+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Cellular origin of fundus autofluorescence in patients and mice with a defective NR2E3 gene.</a> Br J Ophthalmol. 93 (9), 1234-1240 (2009).</li>
<li>Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sick+photoreceptors+attract+activated+microglia+from+the+ganglion+cell+layer%3A+a+model+to+study+the+inflammatory+cascades+in+rats+with+inherited+retinal+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Sick photoreceptors attract activated microglia from the ganglion cell layer: a model to study the inflammatory cascades in rats with inherited retinal dystrophy.</a> Brain Res. 588 (1), 21-28 (1992).</li>
<li>Hughes, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+activated+sialoadhesin-positive+microglia+during+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Generation of activated sialoadhesin-positive microglia during retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (5), 2229-2234 (2003).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Mevcut madde retina B-inceden inceye gözden geçirmek toplama ve görüntüleme gfp olumlu microglia dağıtım fare retina görüntüleme aynı oturumda bir iletişim kuralı gösterir. SD-Ekim ve SLO giderek retina hastalığı hayvan modellerinde saat10,14,17,18,21üzerinde retina değişikliklerini bilgi sağlamak için kullanılır. Bu iletişim kuralı, Cx3cr1gfp/gfp</su...

Deneysel Oftalmoloji retina patoloji incelenmesi genellikle histolojik teknikler kullanılarak değerlendirilir. Ancak, Histoloji hayvan euthanization gerektirir ve değişiklik doku güncel özellikler için neden olabilir. SD-Ekim ve SLO rutin klinik Oftalmoloji tanı amaçlı ve diyabetik makula ödemi9, anterior iskemik optik nöropati10veya retinitis pigmentosa11 gibi birkaç retina hastalıkları izleme kullanılır . SD-Ekim ve SLO daha fazla müdahale olmadan dilate pupil aracılığıyla görüntülenmiştir retina, yüksek çözünürlüklü görüntüler oluşturmak non-invaziv teknikler vardır. SD-Ekim SLO retina stereoskopik yüksek kontrastlı görüntüler üretmek için Floresans veri toplarken retina, kesitsel görüntüler oluşturmak için gelmekte veri toplayarak retina yapısı ve retina kalınlık bilgi sağlar. Günümüzde, her iki tekniğin de giderek daha küçük kemirgen12,13,14,15 (ya da bile Zebra balığı16,17) kullanarak deneysel Oftalmoloji kullanılır ve olabilir hem nitel ve nicel bilgi12,17,18,19,20,21sağlar.
Lipofuscins gibi endojen fluorophores birikimi ya da retina drusen oluşumu bu SLO tarafından auto floresan sinyali olarak görüntülenmeyecektir. Bu özellik, tanı ve yaşa bağlı makula dejenerasyonu veya retinitis pigmentosa22,23gibi retina hastalıkları izleme için değerli bir tekniği SLO yapar. Deneysel Oftalmoloji içinde görüntüleme (AF) otomatik Floresans belirli hücre tipleri muhabir fare satırlarındaki tespiti için kullanılabilir. Örneğin, fare heterozigoz gfp Cx3cr124 organizatörü altında bir ifade için in vivo görselleştirme mikroglial hücrelerinin normal retina ve microglia/makrofaj incelenmesi için avantajlı olan Dynamics retina hastalığı21. Microglia doku homeostazı ve doku onarımı yaralanma1,25,26üzerine çok önemli bir rol oynamak retina, ikamet makrofajlar vardır. Microglia harekete geçirmek içinde retina retina yaralanma, iskemi ve dejenerasyonu retina hastalığı2,3,4,5, bu hücrelerinde bir rolü düşündüren, bildirilmiştir 6.
Amacı mevcut protokolü, retina görüntüleme ve SD-Ekim kullanarak ve retina kalınlık ölçüm yapılmasına ve görselleştirme Cx3cr1gfp/gfp fare retina kullanarak gfp olumlu microglia hücreler için nispeten basit bir yöntem tarif etmektir SLO (Heidelberg Spectralis HRA + OCT sistemi). Bu iletişim kuralı çeşitli fare satırlarındaki sağlıklı ya da hasta retina görüntüleme ve kalınlığı ölçümleri için yararlı olabilir. Ayrıca, xarakteristikaları analizleri tanıma ve miktar microglia sayı ve microglia harekete geçirmek SLO21kullanarak retina içinde gerçekleştirilir. Merkezi sinir sistemi (MSS), dejeneratif hastalıklar ve retina27,28,29dahil ile ilişkili Microglia hücrelerdir. Böylece, mevcut protokolünde kullanılan iki yöntem birleştirerek, microglia dağıtım ve retina dejenerasyonu yapılabilir, hangi izleme hastalık şiddeti kolaylaştırabilir veya tedavi edici etkinliği içinde vivoyaklaşıyor.

<table><tbody><tr><td>Spectralis Görüntüleme sistemi (HRA+OCT)</td><td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>N/A</td><td>oftalmik görüntüleme platformu sistemi</td></tr><tr><td>Heidelberg Göz Gezgini</td><td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>N/A</td><td>Sürüm 1.9.13.0</td></tr><tr><td>78D standart oftalmik temassız yarık lamba lensi</td><td>Volk Optical Inc., Ohio, ABD</td><td>V78C</td><td></td></tr><tr><td>Spectralis geniş açı 55 derece</td> lens <td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>50897-002</td><td></td></tr><tr><td>ultra geniş alan 102 derece</td> lens <td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>50117-001</td><td></td></tr><tr><td>medetomidin hidroklorür 1 mg / mL (Domitor)</td> <td>Provet AG, Lyssach, İsviçre</td><td>Swissmedic Nr. 50'590 - ATCvet: QN05CM91</td><td>anestezik / analjezik</td></tr><tr><td>ketamin 50mg / ml (Ketalar)</td> <td>Parke-Davis, Zürih, İsviçre</td><td>72276388</td><td>anestezik</td></tr><tr><td>tropikamid %0.5 + fenilefrin HCl %2.5 (Augentropfen karışımı)</td><td>ISPI, Bern, İsviçre</td> N<td>/A</td><td>pupil dilatasyonu</td></tr><tr><td>Omnican İnsülin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm</td><td>B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Stra&szlig; e, Almanya</td><td>9151125</td><td></td></tr><tr><td>hidroksipropilmetilselüloz (Methocel 2%)</td><td>OmniVision, Neuhausen, İsviçre</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>+4 dpt sert gaz geçirgen kontakt lens</td><td>Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY</td><td>Yok</td><td>Taban Eğrisi: 7,20 - 8,40 mm Çap: 9,00 / 9,60 / 10,20 mm Güç: -25,00 ila +25,00 Diyoptri</td></tr><tr><td>dengeli tuz çözeltisi (BSS)</td><td>Inselspital, Bern, İsviçre</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>silikon forseps</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>atipamezol 5 mg/mL (Antisedan)</td><td>Provet AG, Lyssach, İsviçre</td><td>N/A</td><td>&alpha; 2 adrenerjik reseptör antagonisti</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 7</td><td>GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, ABD</td><td>N/A</td><td>istatistiksel analiz yazılımı</td></tr></tbody></table>

vivo tayf alanlı optik koherens tomografi ve lazer ophthalmoscopy tarama cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) ve tarama lazer ophthalmoscopy (SLO), deneysel Oftalmoloji yaygın olarak kullanılır. Mevcut protokolünde ifade fareler yeşil flüoresan protein (gfp) Cx3cr1 organizatörü altında (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) microglia hücreleri vivo retina görüntü için kullanıldı. Microglia retina ikamet makrofajlar vardır ve birkaç retina hastalıkları1,2,3,4,5,6' karıştığı olmuştur. Bu iletişim kuralı retina B-bir oftalmik görüntüleme platformu sistemi kullanarak inceden inceye gözden geçirmek, SD-Ekim ve microglia hücre dağıtım SLO vivo içindeile Cx3cr1gfp/gfp farelerde görüntüleme ile üretimi için detaylı bir yaklaşım sağlar. İletişim kuralı birkaç muhabir fare satırlarında kullanılabilir. Ancak, burada sunulan protokolü için bazı sınırlamalar vardır. İlk olarak, SLO hem SD-Ekim, yüksek çözünürlüklü modunda kullanıldığında yüksek Aksiyel çözünürlük ama yanal çözünürlük ile veri toplama düşüktür (3,5 µm ve 6 µm, sırasıyla). Ayrıca, SLO odak ve doygunluk düzeyinde son derece parametre seçimi ve doğru hizalama göz bağlıdır. Ayrıca, insan hasta farelerde yüksek toplam optik güç fare göz nedeniyle zorlu için tasarlanan aygıt kullanarak insan gözünün karşılaştırıldığında; Bu büyütme yanlışlıklar7, lateral hangi da büyütme diğerleri arasında fare objektif tarafından bağlı yol açabilir. Ancak, eksenel tarama pozisyon karşın yanal büyütme bağlıdır, eksenel SD-Ekim ölçümleri doğru8.

Burada sunulan iletişim kuralını kullanarak, SD-Ekim tarar ve SLO görüntüleri Cx3cr1gfp/gfp fareler aynı görüntüleme oturumunda elde edilmiştir. Şekil 3 temsilcisi SD-Ekim 30 ° veya bir 55 ° lens (şekil 3A) ve temsilcisi SLO görüntüleri ile elde edilen tek inceden inceye gözden geçirmek nerede gfp olumlu microglia hücreleri görselleştirildiği 55 ° veya bir 102 ° lens ile elde içerir. Koroid daha yüksek yansıt...

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

Bu prosedürün genel amaçları, sırasıyla retinal kalınlık ve mikroglial hücre dağılımı hakkında bilgi edinmek için spektral alan optik koherens tomografisi ve taramalı lazer oftalmoskopisi kullanmaktır. Bu yöntem, deneysel oftalmoloji alanında retinal anomaliler ile mikroglial hücre birikimi arasındaki korelasyona ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajları, bu bilgilerin gerçek zamanlı ve invaziv olmayan bir şekilde elde edilebilmesidir.Kornea sürüntüsüne yanıt vermediği onaylandıktan sonra, fareyi platformun sol tarafına, sağ orbit lensine bakacak şekilde yüzüstü pozisyonda yerleştirin. Sağ göze, artı dört diyoptriye sahip rijit, gaz geçirgen bir kontakt lens içindeki bir damla hidroksipropil metilselüloz uygulayın ve veri toplama modülünü başlatın. B taramaları için, Uygulama (Application) altından Kızılötesi artı Optik Koherens Tomografi seçeneğini belirleyin; Yapı (Structure) altından Retina'yı seçin ve lensi fare gözüne doğru hareket ettirmek için mikro-manipülatörü kullanın.Retinaya odaklanmadan önce, oculus dexter göstergesinin seçili olduğunu doğrulayın, ardından monitör ekranının sol tarafındaki fundus görüntüsünde büyük damarlar net bir şekilde görünene kadar odak düğmesini kullanarak retinaya yaklaşın. Gerektiğinde kameranın konumunu ayarlamak için mikro-manipülatörü kullanın ve fundus görüntüsünün parlaklığını uygun şekilde azaltmak veya artırmak için hassasiyet düğmesini çevirin. Pattern menüsünden Line Scan seçeneğini belirleyin ve mikro-manipülatörü kullanarak B taramasını, spektral alan optik koherens tomografisi (SD-OCT) tarama penceresinin üst ve alt köşeleri arasında hareket ettirin.Yüksek görüntü kalitesi elde etmek için Otomatik Gerçek Zaman değerini en az dokuz olarak ayarlayın ve Acquire'a tıklayın. Tüm görüntüler elde edildikten sonra, kontakt lensi gözden taze dengeli tuz çözeltisine aktarın ve korneayı taze bir damla hidroksipropil metilselüloz ile nemlendirin. Sol gözün görüntülemesi tamamlandıktan sonra, standart 30 derecelik optiği çıkarmak için saat yönünün tersine döndürün ve ikinci bir görüntüleme turu için 55 derecelik lensi takın.Otofloresansta değerlendirmek için, fareyi hareket ettirmeden kontrol panelinden Infrared seçeneğini belirleyin ve büyük retinal damarlara odaklanın. Otofloresans görüntülemeyi seçin ve gerekirse görüntü parlaklığını ayarlamak için hassasiyet düğmesini kullanın. Hassasiyet düğmesine bir kez basın ve otomatik gerçek zamanlı değeri en az 67 olarak ayarlayın.Otomatik gerçek zamanlı değere ulaşıldığında, görüntüyü alın ve ortalamayı durdurmak için hassasiyet düğmesine ikinci kez basın. Deneye uygun şekilde, farklı retinal tabakaları görselleştirmek için odağı ayarlayın. Tüm görüntüler elde edildiğinde, optiğe 102 derecelik geniş alan lensini takın ve az önce gösterildiği gibi her gözdeki otofloresansı görüntüleyin.Her görüntüdeki manuel retinal kalınlığı ölçmek için, OCT taramasını açmak üzere ilk deneysel hayvanın adına çift tıklayın. 30 veya 55 derecelik lens ile elde edilmiş bir B taraması açın ve kalınlık profilini seçin. Katman Segmentasyonlarını Düzenle simgesine tıklayın.Yazılım, iç sınırlayıcı ve baz membranlarını otomatik olarak tanımlayacaktır. Membranların konumunu manuel olarak düzeltmek için, değiştirilmek istenen katmanı ve kırmızı daire seçeneğini belirleyin. Fare düğmesini basılı tutarak, ilgili katman doğru konuma gelene kadar çizgiyi değiştirmek için daireyi hareket ettirin ve pencereden çıkmak için Kaydet ve Kapat'a tıklayın.Katman seçeneği altından Retina'yı seçin ve seçilen konum için retinal kalınlığı görüntülemek üzere diyagramda farklı bir konuma tıklayın. Ardından, retinal kalınlığı ve optik sinir başından istenen mesafeyi ölçün ve değerleri bir hesap tablosuna aktarın. Cx3cr1 promotörü altında gfp ekspresyonu için homozigot olan bir fareden alınan bu temsili SD-OCT tek taramalarında, retinal mimari hem 30 derecelik hem de 55 derecelik lens görüntülerinde net bir şekilde görselleştirilmiştir.Bununla birlikte, 30 derecelik lens ile elde edilen taramalarda koroidin yüksek yansıtıcılığı gözlemlenmektedir. SD-OCT'yi takiben, tarayıcı lazer oftalmoskopisi, 55 derecelik veya 102 derecelik bir lens kullanarak retinadaki bireysel gfp pozitif mikroglial hücrelerin görüntülenmesine olanak tanır; 102 derecelik lens ile daha geniş bir fundus alanı kapsamı elde edilir. SD-OCT taramalarında, iç sınırlayıcı ve bazal membran retinal sınırlarının manuel düzeltmesinden sonra, optik sinir başından aynı mesafe ölçüldüğünde, 30 ve 55 derecelik lensler arasında retinal kalınlık ölçümü açısından tipik olarak iyi bir korelasyon gözlemlenir.Bu teknik bir kez kavrandığında, doğru şekilde uygulandığı takdirde elli dakikadan kısa sürede tamamlanabilir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, deneysel oftalmoloji alanındaki araştırmacıların küçük kemirgenlerdeki retinal patolojileri in vivo olarak incelemelerinin önünü açmıştır.

in-vivo-imaging-cx3cr1gfpgfp-reporter-mice-with-spectral-domain

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, bir fare enfeksiyöz üveit fare modelinde göz iltihabını tespit etmek ve ölçmek için in vivo bir görüntüleme tekniğini göstermektedir. Optik koherens tomografi (OCT) olarak bilinen teknik, hastalığın ilerlemesini değerlendirmek için gözün yüksek çözünürlüklü kesitsel görüntülerini üretir.

Bir Fare Modelinde Üveiti Değerlendirmek için Optik Koherens Tomografi Görüntüleme

Kaynak: Bosco, A.,  et al.  Nörodejenerasyon Sırasında Retinal Mikroglial Aktivasyonun İn Vivo Dinamiği: Fare Glokomunda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre Morfometrisi. J. Vis. Uzm. (2015) Bu video, bir fare glokom modelinde retinal mikroglianın in vivo görüntülemesini göstermektedir. Floresan protein eksprese eden retinal mikrogliaya sahip transgenik bir fare, bir oftalmoskop altına yerleştirilir. Kızılötesi aydınlatma, optik sinir başını (ONH) bulmak için kullanılır ve odak düzlemi,...

Glokomun Fare Modelinde Retinal Mikroglia'nın İn vivo Görüntülenmesi

Source: Jagodzinska, J., et. al., Optik Koherens Tomografi: Fare Retinal Ganglion Hücrelerini Görüntüleme In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  Bu videoda, optik nöropatili genetik olarak değiştirilmiş bir fare modelinde retina katmanlarını görüntülemek ve yapısal değişiklikleri değerlendirmek için spektral alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını gösteriyoruz.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Fare Retinasının İn Vivo Görüntülenmesi

Mikroglia aktivasyonu ve mikroglioz kronik nörodejenerasyona önemli tepkilerdir. Burada, in vivo, konfokal oftalmoskopi retinal CX3CR1-GFP + mikroglial hücreleri uzun süreli görselleştirme için yöntemler sunmak ve eşik ve morfometrik için belirlemek ve aktivasyonunu ölçmek için analiz eder. Biz yaşa bağlı glokomun erken evrelerinde mikrogliyal değişiklikleri takip.

Fare Glokomda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre morfometrisi: Nörodejenerasyonda sırasında Retina Mikroglial Aktivasyonu Vivo Dynamics

Bu el yazması ile yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) fare retinanın vivo içinde görüntüleme için bir protokol açıklar. Retina ganglion hücrelerinin (RGC) peripapillary bölgede çeşitli tarama ve açıklanan yaklaşımlar miktarının üzerinde duruluyor.

Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

Burada, boyuna vivo içinde görüntüleme kullanışlılığı lazer kaynaklı choroidal neovaskülarizasyon farelerde morfolojik değişiklikler takip içinde mevcut.

Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi

Burada sunulan canlı fare oküler yüzey görüntüleme için bir multifoton mikroskobik platformdur. Floresan transgenik fare hücre çekirdekleri, hücre zarları, sinir lifleri ve oküler yüzey içinde kılcal damarların görüntülenmesi sağlar. Kolaj nasyonal yapılardan elde edilen doğrusal olmayan ikinci harmonik nesil sinyalleri stromal mimariler için etiketsiz görüntüleme sağlar.

Fare Kornea ve Konjonktiva Canlı Görüntüleme için Özel Multifoton Mikroskop platformu

Burada, retinal dejenerasyon, glokom, diyabetik retinopati ve miyopi modellerinde retinal ve oküler yapıları in vivo olarak görselleştirmek için spektral-alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını açıklamaktayız.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Kemirgen Modellerinde Oküler Hastalığın İn vivo Yapısal Değerlendirmeleri

İn vivo görüntüleme, sağlık ve hastalıkta biyoloji çalışmaları için güçlü bir araçtır. Bu protokol, standart iki foton mikroskobu ile fare retinasının transpupiller görüntülemesini tanımlar. Ayrıca, retinanın birden fazla hücresel kohortunu floresan olarak etiketlemek için farklı in vivoimaging yöntemleri göstermektedir.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

Subkonjonktival enjeksiyondan sonra gözdeki lipozomların mekansal-zamansal dağılımını invaziv olmayan bir şekilde incelemek için fiberoptik konfokal lazer miksanoskopi (CLM) kullanımı için bir protokol sunuyoruz.

Fiberoptik Konfokal Lazer Mikroendoskopi Kullanılarak Oküler İlaç Dağıtım Sistemlerinin Spatio-Temporal In Vivo Görüntülemesi

Mevcut protokol, in vivo görüntülerde gözlenen retinal ganglion hücre akson demeti morfolojisini doğrulamak amacıyla in vivo görünür ışık optik koherens tomografi fibergrafi (vis-OCTF) görüntülerini aynı fare retinasının ex vivo konfokal görüntüleriyle hizalama adımlarını özetlemektedir.

Görünür Işık Optik Koherens Tomografi Fibergramlarının Aynı Fare Retinasının Konfokal Görüntüleri ile Hizalanması

Keşfedin, spektral alan optik koherens tomografi ve tarama lazer oftalmolojisi kullanarak Cx3cr1 muhabir farelerde retinal kalınlık ve mikroglial hücre dağılımını gerçek zamanlı ve invaziv olmayan şekilde değerlendirmeyi.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1^gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Daha fazla video keşfet