Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

Bu yöntem, transplantasyon ve organ koruma alanındaki önemli soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir. Bu yöntemin uygulamaları arasında yeni perfüzatların ve perfüzat katkı maddelerinin test edilmesi, organ değerlendirmesi için tasarlanmış yazılımların test edilmesi ve organların onarılması için tasarlanmış deneylerin yapılması yer alır. Bu tekniğin temel avantajı, burada sunulan normotermik ex vivo karaciğer perfüzyon modelinin basit, kolay tekrarlanabilir, düşük maliyetli ve geniş bir uygulama yelpazesine sahip olmasıdır.

16 gauge portal manşeti hazırlayarak başlayın. Borunun beş milimetrelik bir bölümünü kesin ve 2,5 milimetre ölçerek bölümün orta noktasını belirleyin. Orta noktada kesin ve borunun ön yarısını çıkarın.

Bu şimdi düz kısmı ezmek için bir hemostat kullanın. Bir dudak oluşturmak için anjiyokateterin diğer ucunu eritmek için bir çakmak kullanın. Daha sonra, 27 gauge anjiyokateterden enjeksiyon portunu keserek safra kanalı kanülünü hazırlayın ve geriye sadece kateter kalacak.

Bunu 27 gauge kanül borusunun 10 santimetrelik bir bölümüne bağlayın. Anestezi uygulanmış bir sıçanı, burnu anestezi burun konisine ve dört ekstremitesi hareketsiz olacak şekilde yerleştirin. Monitörü sol arka ekstremiteye takarak yaşamsal belirtileri izleyin.

Uygun anestezi derinliğini doğrulamak için bir ayak parmağınızı sıkıştırın. Hayvanın karnına %70 izopropil alkol püskürtün ve kurumasını bekleyin. Hayvanın üzerine steril bir örtü yerleştirin.

Daha sonra keskin bir makas kullanarak ksifoidden pubise orta hat kesisi yaptıktan sonra nazikçe karın zarına girin ve kası kesin. Karaciğerin alt sınırı seviyesinde bir haç oluşturmak için insizyonu yanal olarak sola ve sağa uzatın. Bu noktada, izofluran anestezisini %2'ye düşürünKavisli bir sivrisinek kelepçesi kullanarak ksifoid sürecini ve kaburga ekartörleri kullanarak kaburgaları geri çekin.

Daha sonra falciform, frenik ve gastrohepatik bağları kesmek için keskin bir makas kullanın. Sızıntıyı önlemek için frenik damarı orijinine mümkün olduğunca yakın bir 7-0 dikişle bulun ve bağlayın. Ardından, farenin içini boşaltmak için steril nemli bir pamuk uçlu aplikatör kullanın.

Bağırsakları% 0.9 normal tuzlu su ile nemlendirilmiş gazlı bezle sarın ve damar sistemini germemeye dikkat edin. Daha sonra fazla dokuyu çıkarmak için inferior vena kava üzerinde diseksiyon yapın. Çatallanmanın hemen üstünde IVC'nin arkasına diseke edin ve daha sonra kullanmak üzere 4-O ipek sütürden bir döngü geçirin.

Daha sonra, sağ adrenal vene maruz kalmayı sağlamak için sağ böbreği geri çekin ve karaciğerin sağ lobunu gazlı bezle üstün olarak geri çekin. Sağ adrenal veni IVC'ye mümkün olduğunca yakın bir 7-0 ipek sütürle bağlayın ve bağın distalinde koterize edin. Sonra dalak damarını dikkatlice inceleyin.

İki adet 7-0 ipek dikiş kullanarak bağlayın ve iki dikiş arasında kesin. Gastroduodenal arter etrafını inceledikten sonra, gastroduodenal arteri 7-0 ipek sütür ile bağlayın ve bağlayın. Daha sonra hepatik arterin etrafını inceleyin ve etrafına gevşek bir şekilde 7-0 ipek dikiş bağı yerleştirin.

Sonra, safra kanalını inceleyin. Daha sonra safra kanalının uzunluğunu kontrol edin, distal ucundan bağlayın ve safra kanalının etrafına ve mümkün olduğunca proksimal olarak bir dikiş halkası yerleştirin. Kanalın çapının yarısı kadar bir delik açmak için küçük bir makas kullanın ve safra kanalına proksimal olarak 27 gauge bir kateter yerleştirin.

Bir roma sandalet bağı dikişi kullanarak kateteri yerine bağlayın. Daha sonra, ceza damarına veya IVC'ye 0,5 mililitre heparin enjekte etmek için 27 gauge iğne kullanın. Daha sonra daha önce yerleştirilmiş 4-0 ipek sütürü kullanarak IVC'yi kelepçeleyin ve bağlayın ve daha önce yerleştirilmiş 7-0 ipek sütürü kullanarak hepatik arteri bağlayın.

Şimdi, portal veni sıkıştırmak için bir mikrocerrahi klips kullanın. 22 gauge anjiyokateter kullanarak portal veni kanüle edin ve karaciğer ağarana kadar 100 ünite heparin içeren 60 mililitre soğuk% 0.9 normal tuzlu su ile yıkayın. Karaciğeri yıkadıktan sonra, suprahepatik IVC'yi açığa çıkarın ve göğüste mümkün olduğunca yükseğe kesin.

Diyaframın etrafını keserek ve ardından hepatik arteri, IVC'yi, portal veni ve diğer bağları keserek hepatektomiyi gerçekleştirin. Karaciğeri kaldırın ve buz gibi %0.9 normal tuzlu su kabı yerleştirin. Son olarak, 16 gauge vasküler manşeti portal ven içine yerleştirin ve karaciğeri ex vivo normotermik karaciğer perfüzyon devresine bağlayın.

Her perfüzyona başlamadan önce, devre bileşenleri veya borular üzerinde hasar veya birikme olup olmadığını belirlemek için devrenin görsel muayenesi yapılmalıdır. Devrede bakteri veya başka maddeler birikiyorsa, parçalar değiştirilmeli veya temizlenmelidir. Perfüzatı dakikada iki mililitre akıtarak başlayın.

Portal ven basıncında herhangi bir ani yükselme olup olmadığını görmek için monitörü izleyin, çünkü bu damarın tıkandığını gösterebilir ve kanülün yeniden konumlandırılmasını gerektirebilir. 7-0 ipek sütür kullanarak perfüzat ve sütürün geri akışı için protal ven kanülünü manşetli portal ven içine yerleştirin. Her iki kanül de yerleştirildikten sonra, 10 ila 16 santimetre su aralığındaki fizyolojik basınca ulaşılana kadar perfüzatın akışını dakikada bir mililitre artırmaya başlayın.

Perfüzyon sırasında port öncesi ve sonrası porttan bir mililitre numune çıkarın. Her bir mililitrelik numuneyi iki adet 0,5 mililitrelik numuneye bölün. Kriyojenik tüplerdeki 0,5 mililitrelik alikotlardan birini sıvı nitrojen içinde dondurun ve kalan 0,5 mililitre perfüzat kullanarak arteriyel kan gazı analizi yapın.

Ardından, pH'ı ölçün ve pH 7.4'e geri dönmek için perfüzatı gerektiği gibi tamponlayın. Dört saatlik perfüzyondan sonra, karaciğeri perfüzyon devresinden ayırın. Karaciğeri 0,5 gramlık segmentlere bölün, kriyojenik tüplere aktarın ve sıvı nitrojeni dondurun.

ALT sıfır, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve 240 dakikalık perfüzyonda ölçüldü. 150, 180, 210 ve 240 dakikalarda siyah olarak gösterilen baz perfüzat artı PEG-CAT grubunda, baz perfüzat artı PEG-CAT grubunda önemli ölçüde daha az ALT vardır. Doku ATP'si, tek başına baz perfüzat grubuna kıyasla baz perfüzat artı PEG-CAT grubunda korundu.

Doku MDA üretimi, baz perfüzat grubunda, baz perfüzat artı PEG-CAT grubuna göre anlamlı olarak daha yüksekti. Toplam GSH, tek başına baz perfüzat grubuna kıyasla baz perfüzat artı PEG-CAT'te tutuldu. Normotermik ex vivo karaciğer perfüzyonunun önerilen her uygulamasının, atılan insan organlarında ve daha sonra insan karaciğerlerinde test edilmeden önce hayvan modellerinde metodik olarak test edilmesi gerekecektir.

Burada sunulan model, kolayca tekrarlanabilir olması, gereksiz testleri ortadan kaldırması ve düşük maliyetli olması nedeniyle idealdir. Bu videoyu izledikten sonra, fareler kullanılarak ucuz, kolayca tekrarlanabilir, normotermik bir ex vivo karaciğer perfüzyon modelinin nasıl uygulanacağını iyi anlamış olmalısınız.