İntraportal fare modeli pankreas adacıkları nakli

Pankreas adacık nakli normoglycemia tip 1 diyabet için bir yoludur. Bu makale nakli tekniği normal glikoz düzeyleri diyabetik farelerde korumak için intraportal rota üzerinden üzerinde duruluyor.

Ben Thomas Linn, Almanya'nın Giessen kentindeki Justus Liebig Üniversitesi'ndeki Diyabet Araştırma Grubu'nun baş araştırmacısıyım. Pankreas adacık nakli, tip 1 diabetes mellitus için bir tedavi yöntemidir. Deneysel adacık nakli böbrek kapsülüne yapılırken, klinik programlar intra-portal yolu tercih eder.

Bu nedenle, preklinik modellerde intra-portal adacık nakli ile ilgili daha fazla araştırmaya ihtiyaç olduğuna inanıyoruz. Örneğin, nakil yeri intravasküler olduğu için kana maruz kalan adacık bölgeleri. Ayrıca mikrocerrahi tekniği de biraz tecrübe gerektirir.

Örneğin, portal venin enjeksiyonundan sonra kanama meydana gelebilir veya anestezi veya alıcı farenin vücut ağırlığının korunması ile ilgili sorunlar olabilir. Bu nedenle, prosedürün görsel olarak açıklanmasının çok önemli olduğunu düşünüyoruz. Bu video, adacık naklinin portal içi rotasına odaklanmaktadır.

Diyabetik farelerde normal glisemi elde etmek için, siyah farelerde sinjeneik ve allojenik transplantasyon için kullanılabilir, aynı zamanda çıplak fare alıcılarında sinjeneik modellerde de kullanılabilir. İzole edilmiş adacıkları inkübatörden çıkarın ve bir akış tezgahının altına yerleştirin. Petri kabının dairesel sallanma hareketiyle adacıkları ortalayın.

100 mikrolitrelik ortamı mavi iğne yardımıyla bir ml'lik şırıngaya doldurun. Ardından 300 mikrolitre Hank's Solution'a 350 adacık ekleyin. Adacıkların yerleşmesine izin vermek için şırıngayı dikey konumda tutun.

Sesi 50 mikrolitreye düşürün. Mavi iğneyi kahverengi iğne ile değiştirin. Aynı şırıngaya, şırıngadaki 200 mikrolitrelik son hacme ulaşmak için üstüne 150 mikrolitre yoğunluk gradyan ortamı ekleyin.

Hava kabarcıklarından kaçının. Şırıngayı dikey konumda tutun. Adacıkların topaklanmasını önlemek için hafifçe döndürün.

Adacıklar iki ila üç dakika içinde şırınga konisine yerleşecektir. Üç günlük streptozotosin enjeksiyonundan sonra, elde taşınan glikoz ölçüm cihazı yardımıyla kuyruk damarını delerek kan şekeri seviyesini kontrol edin. Fareleri intraperitoneal enjeksiyon ile dalzilozin ve ketamin ile uyuşturun.

Fareleri ılık termal plaka üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Ayak parmağını sıkıştırarak anestezi derinliğini kontrol edin. Cildi derisiz enfekte edici ile temizleyin.

Gözlerin kurumasını önlemek için, göz merhemi ile nemli tutun. Cildi forsep ile tutarak ve makasla iki ila üç santimetre uzunluğunda orta kesi yaparak elektrotomi ile başlayın. Nemli tutmak için yara kenarlarının etrafına steril bir ıslak gazlı bez yerleştirin.

Bağırsak situsunu karın boşluğunun solunda ve dışında tutun. Duodenumu hareket ettirin ve pankreası bulun. Portal damarı ortaya çıkarmak için parmağınızı ve başparmağınızı kullanın.

200 mikrolitrelik adacıkları yavaşça portal ven içine enjekte edin. Kanamayı durdurmak için işaret parmağıyla delinme bölgesine altı dakika boyunca baskı uygulayın. Bağırsak situsunu, peritonumu ve karın kasları tabakasını dikkatlice tekrar pozisyona yerleştirin.

Forsep kullanarak cildi kaldırın, kas kesisini kapatın ve emilebilir ipek dikiş ile üst deri tabakasını kapatın. Bir yara iyileştirici uygulayın. Sıcak termal plaka üzerinde vücut ısısını 37 santigrat derecede tutun.

Yeterli bilinci geri kazanana kadar fareyi gözlemleyin. Ağrıyı yönetmek için sıvı ile birlikte tramadol sağlayın. Adacıkların transplantasyonundan sonra, strepto kaynaklı diyabetik farelerde litre başına 23 milimolar'dan litre başına 4.6 milimolar'a kadar birinci gün kan şekeri seviyesinde ani bir düşüş gözlendi.

Normal glisemi 121 güne kadar korundu. Vücut ağırlığı ve kan şekeri seviyesi kabaca aynı modeli takip etti. Streptozotosin enjeksiyonu ve ameliyatından sonra vücut ağırlığı azaldı; İkinci günden itibaren 25.3 gramdan 29.7 grama kadar normale doğru yükselme eğilimindedir.

Adacık naklinden sonra majör doku uyumluluk-uyumsuzluk farelerinde, kan şekeri seviyesi litre başına 4.4 milimol'e düştü ve normal glisemi 10 güne kadar gözlendi. Daha sonra reddetmeye başlar. Diyabetik farelerin vücut ağırlığı da benzer bir modeli takip eder.

Nakledilen pankreas adacıklarının karaciğere başarılı bir şekilde aşılanmasında. Bu çalışmada adacık transplantasyonunun intra-portal rotası araştırılmıştır. Bu protokol, diyabetik stresi azaltmada oldukça etkilidir ve adacık naklini keşfetmek için derinlemesine bir fırsat sağlar.

Bu protokol, yaklaşık 350 adacığın hiperglisemik durumu tersine çevirebildiğini doğrulamaktadır. Ayrıca, işlem sırasında farelerin hiçbiri ölmedi ve glisemik kontrol sağlandı.