Name: HUVEC tüp-formasyon assay doğal ürünlerin anjiyogenezi üzerinde etkisini değerlendirmek için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Keşfedin HUVEC tüp-formasyon assay yöntemiyle Ruta graveolens su ekstresinin anjiyogenez üzerindeki etkisini. Bu teknik damar ağı oluşumunu değerlendirmek için standart bir laboratuvar yöntemidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu iş Fondi di Ateneo tarafından Luca Colucci-d 'Amato ve VALERE program fonları tarafından Maria Teresa Gentile ve AıSC Fund IG18999 Maurizio Bifulco 'ya finanse edilmiştir.

1. RGWE hazırlık
<ol><li>Toplamak R. graveolens bir botanikçi gözetiminde ilkbahar/yaz aylarında bitkilerin yaprakları. Not: Bu durumda, yaprakları Napoli Botanik Bahçesi 'nde şifalı bitkiler deneysel bölümünde toplanan, Italya5. Bitki spontan, çok yıllık ve Akdeniz bölgelerinde mevcut (Şekil 1).</li>
	<li>Tartmak 250 g yaprakları ve ince makas ile onları doğrayın.</li>
	<li>Bir konik Flask yaprakları koymak ve 1 L damıtılmış su eklemek 250 g doğranmış yaprakları ve bir kaynatmak için 110 °C ' de 60 dakika için getirmek. aşırı buharlaşma önlemek için alüminyum folyo ile Flask kapak.</li>
	<li>Su özü temsil eden Sıvı fazdan haşlanmış yaprakları ayırmak için 3 mm-huni filtre kağıdı kullanın.</li>
	<li>Sıvı fazı bir 0,22 μm filtre ile filtreleyebilir, bir Beaker içinde toplayın. Parafilm ile kabı kapak ve ekstresi dondurmak-80 °c gece.</li>
	<li>Parafilm bir iğne ile 10-15 delik yapmak ve bir lyophilizer ekstresi lyophilize. Toz elde etmek için birkaç gün sürebilir unutmayın.</li>
	<li>Elde edilen tozu tartın, onu aliquots 'a böler ve gerekli olana kadar 4 °C ' de saklayın. Bir yıl boyunca saklamak mümkündür.</li>
	<li>Deneyler için gerekli olduğunda, bir stok çözüm hazırlamak, standart bir konsantrasyon 50 mg/mL damıtılmış su ile toz seyreltilmesi. Küçük hacimli (örn. 1 mL) farklı bir şekilde ayırın. Bu hazırlık, kullanılıncaya kadar-20 °C ' de depolanabilir ancak moleküllerin oksidasyonları nedeniyle birkaç gün boyunca 4 °C ' de depolanamaz. Dondurmayı ve çözülme kaçının.</li>
</ol>2. hücre kültürü
<ol><li>Endotel hücre büyüme ortamında HUVECs yetiştirmek: endotel bazal orta 1 μg/mL hidrokortizon ve 1 ng/mL epidermal büyüme faktörü,% 10 FBS ve penisilin/Streptomycin 37 °C ' de 5% CO2atmosferinde tamamlayıcı olarak desteklenmektedir.</li>
	<li>Zaman 80% confluent, her geçit 1:3 oranında Hücreleri Böl. Büyüme faktörlerine yanıt olarak belirgin farklar göstermez iki ila beş pasajlar, hücreleri kullanın. Altıncı geçişte sonra, hücreler parlak hale gelir ve jelli Bodrum matrisinde tüpler oluşturmayın.</li>
</ol>3. transfeksiyon
<ol><li>HUVECs% 70 konfluent olduğunda, istenilen gen ile transfekt.</li>
	<li>100 mm 'lik bir plaka için, kontrol olarak 1 μg boş pCDNA3 vektörü ve ilgi geni (Bu durumda kurucu aktif MEK [caMEK]) içeren 1 μg pCDNA3 vektörü kullanın.</li>
	<li>3 μL lipofektamin 2.000 ile karmaşık 1 μg DNA, azaltılmış serum orta ile seyreltilmiş (bkz. malzeme tablosu) 200 μL son hacmine. orta hücrelerden çıkarın ve 1 ml taze komple orta ile değiştirin; ardından, transfendirme çözümünü hücrelere ekleyin. 37 °C ' de,% 5 CO2ile kuluçinörün hücrelerine inkübe edilir. Ayrıca, üreticinin talimatlarını takiben, lipofektamin 2.000 farklı diğer transfeksiyon ajanlar kullanmak mümkündür.</li>
	<li>Transfeksiyondan sonra 7 mL komple taze orta 3 h ekleyin ve sonra, daha sonra 37 °C ' de hücreler için 24-48 h ile bir sonraki ilerlemeler devam etmeden önce inküye yapın. Transfeksiyon sonrası gün, orta taze komple orta ile değiştirin.</li>
</ol>4. tüp oluşumu tahlil
<ol><li>Serin bir 96-kuyu plaka ve Pipet uçları 4 °C ' de 1 saat boyunca jelli Bodrum hazırlanmadan önce.</li>
	<li>Bodrum hazırlık anda, buz üzerine plaka koymak (0 °C) ve ekleyin 50 her iyi soğuk matris μL eklemek kabarcıklar oluşumundan kaçınarak. Matris oda sıcaklığında katı hale gelen bu yana prosedür sırasında matris içeren şişe buz üzerinde tutulması gerektiğini unutmayın.</li>
	<li>En az 30 dakika için% 5 CO2 Ile 37 °c ' de kuluçvanın plakasını yerleştirin ve bodrumun polimerize edilmesini sağlar.</li>
	<li>Bu arada, hücreleri topla. HUVECs 'i 1 mL 'Lik bir 0,25% Trypsin/0.53 mM EDTA çözeltisi ile yıkayın; sonra, Trypsin-EDTA çözeltisi 2 mL ekleyin ve 5 dakika için 37 °C ' de inküye. hücre katmanının tamamen dağınık olduğunu doğrulamak için ters bir mikroskop altındaki hücreleri Inceleyin. Sonra, hücrelerin askıya alındığı orta toplamak ve 3 dakika için 264 x g santrifüjleme ile ayrılmış hücreleri hasat 1 ml fosfat-tamponlu tuzlu (PBS) onları resuspend.</li>
	<li>Hücreleri saymak için 0,2 mL PBS 0,5 mL ve 0,3 mL% 0,4 tripan mavi çözeltisi hücre süspansiyonu ekleyin. Oda sıcaklığında 5 dakika sonra, bir BüRkEr odasında hücreleri saymak.</li>
	<li>2 x 104 hücreli/50 μL konsantrasyonunda tam ortamda hücreleri resuspend. 2 x 104 hücrelerin konsantrasyonunda jelli Bodrum üzerine tohum ve onlara yerleşmek izin.</li>
	<li>Hücrelerin sayısına dikkat edin. Çok fazla veya çok az hücre, jel Bodrum üzerinde doğru şekilde tüpler oluşturmayabilir.</li>
	<li>Artan doz RGWE hazırlayın (0,01, 0,1, ve 1 mg/mL), kültür orta veya rutin (12, 120, ve 300 μg/mL) stok solüsyonu seyreltilmesi, tüm son hacim içinde 50 μL/Well, ve onları ekleyin 50 μL/Well hücre süspansiyonu. Her kuyunda son hacim 100 μL olacaktır. Her deneysel durum için dört ila altı kuyu hazırlayın. Bir kontrol olarak, 1:50 oranında kültür ortamında distile su (araç) seyreltik.</li>
	<li>37 °C ve 5% CO2 ' de kuluçoradaki hücreleri 6 ila 24 saat arasında değişen bir süre için inkübe etmek.</li>
	<li>6 ' dan 24 saat tohumdan sonra yayılan bir zaman aralığında hücreleri gözlemlemek, 10X büyütme bir faz kontrast mikroskop kullanarak. HUVECs 6 h içinde tüp benzeri yapıları oluşturmak edebiliyoruz ama 12-18 h sonra daha iyi sonuçlar gözlemlemek mümkündür. her bir kuyu üzerinde tüp benzeri yapıları fotoğraf ve her iyi üç ila beş rasgele alanlara ortalama görüntü.</li>
	<li>Görüntü satın aldıktan sonra, hücreler Bodrum matrisinden ayrılabilir ve tedavinin hücre sayısına etkisini değerlendirmek için sayılır. Her bir kuyu için, orta çıkarın, 24 U/mL konsantrasyonunda dispaz ekleyin ve 1 saat için 37 °C ' de plaka koymak. Sonra, her iyi, hangi hücrelerin askıya alınır ve 3 dk için 264 x g santrifüjleme ile ayrılmış hücreleri hasat orta toplamak 0,2 ml PBS onları resuspend. Hücreleri saymak için 0,2 mL PBS 0,5 mL hücre süspansiyonu ve 0,3 mL% 0,4 tripan mavi çözüm ekleyin. Oda sıcaklığında 5 dakika sonra, BüRkEr odasındaki hücreleri saymak.</li>
	<li>Tüp oluşumu tahlil sonuçlarını ölçmek için, en az üç tüp katılmak şube noktalarının sayısını saymak mümkündür. Uygun görüntü yazılımını kullanarak, her mikrografadaki her alan için şube noktalarının sayısını saymak ve ortalama ± standart hata (SE) her deneysel koşul için hesaplayın. İstatistiksel önemini değerlendirmek için iki kuyruklu t-testi kullanın.</li>
</ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+life%2C+disease+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in life, disease and medicine.</a> Nature. 438 (7070), 932-936 (2005).</li>
<li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+and+clinical+applications+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis.</a> Nature. 473 (7347), 298-307 (2011).</li>
<li>Ferrara, N., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+as+a+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis as a therapeutic target.</a> Nature. 438 (7070), 967-974 (2005).</li>
<li>Ravishankar, D., Rajora, A. K., Greco, F., Osborn, H. M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavonoids+as+prospective+compounds+for+anti-cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Biochemistry+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Flavonoids as prospective compounds for anti-cancer therapy.</a> The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 45, 2821-2831 (2013).</li>
<li>Gentile, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruta+graveolens+water+extract+inhibits+cell-cell+network+formation+in+human+umbilical+endothelial+cells+via+MEK-ERK1%2F2+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Ruta graveolens water extract inhibits cell-cell network formation in human umbilical endothelial cells via MEK-ERK1/2 pathway.</a> Experimental Cell Research. 364 (1), 50-58 (2018).</li>
<li>Butler, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+products+to+drugs%3A+natural+product-derived+compounds+in+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Reports%22%5BJournal%5D)">Natural products to drugs: natural product-derived compounds in clinical trials.</a> Natural Product Reports. 25, 475-516 (2008).</li>
<li>Sulaiman, R. S., Basavarajappa, H. D., Corson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+product+inhibitors+of+ocular+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Natural product inhibitors of ocular angiogenesis.</a> Experimental Eye Research. 129, 161-171 (2014).</li>
<li>Risau, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of angiogenesis.</a> Nature. 386 (6626), 671-674 (1997).</li>
<li>Trung, N. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+for+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Science+%26+Development%22%5BJournal%5D)">In vitro models for angiogenesis.</a> Journal of Science & Development. 13 (4), 850-858 (2015).</li>
<li>Ucuzian, A. A., Greisler, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Models+of+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">In vitro Models of Angiogenesis.</a> World Journal of Surgery. 31, 654-663 (2007).</li>
<li>Simons, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Heart+Association+Council+on+Basic+Cardiovascular+Sciences+and+Council+on+Cardiovascular+Surgery+and+Anaesthesia.+State-of-the-Art+Methods+for+Evaluation+of+Angiogenesis+and+Tissue+Vascularisation%3A+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">American Heart Association Council on Basic Cardiovascular Sciences and Council on Cardiovascular Surgery and Anaesthesia. State-of-the-Art Methods for Evaluation of Angiogenesis and Tissue Vascularisation: A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Circulation Research. 116 (11), e99-e132 (2015).</li>
<li>Arnaoutova, I., Kleinman, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+angiogenesis%3A+endothelial+cell+tube+formation+on+gelled+basement+membrane+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">In vitro angiogenesis: endothelial cell tube formation on gelled basement membrane extract.</a> Nature Protocols. 5 (4), 628-635 (2010).</li>
<li>DeCicco-Skinner, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+tube+formation+assay+for+the+in+vitro+study+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51312(2014).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Doğal bileşikler yüksek kimyasal çeşitlilik ve biyokimyasal özgüllük ile karakterize ve potansiyel olarak terapötik moleküllerin bir kaynağını temsil eder. Burada, biz bitki R. graveolens su özü elde etmek için nasıl göstermek ve bir kolay gerçekleştirmek için tüp oluşumu tahlil önermek, güvenilir, ve nicel yöntemi anjiyojenez ÜZERINDE rgwe etkilerini araştırmak için yararlı. Bu R. graveolens yaprakları kaynatmak için önemlidir 1 h tam su özü elde emin olmak için. Daha az 1 h için kaynatma tüm molekülle...

Angiogenesis, önceden mevcut olanlarla yeni kan damarlarının oluşumuna yol açan ve embriyogenit ve organ büyümesi sırasında meydana gelen fizyolojik bir süreçtir. Yetişkinlikte, anjiyojenez sadece bisiklet yumurtası, gebelik sırasında plasenta, ve yara iyileşmesi ve onarımı sırasında aktive edilir. Anjiyojenez, endotelyal hücrelerin çoğalmasına, farklılaştırmaya ve bozulmamış bir vasküler ağ oluşturmak için göç edebilme yeteneğine bağlıdır1. Ancak, enflamatuar, metabolik ve romatizmal hastalıklar gibi çeşitli hastalıklarda anjiyojenik süreçler değiştirilir ve anjiyojenez aşırı olur. Ayrıca, kontrollü anjiyojenik süreçler de tümör progresyonu ve metasrik1uyarır. Bu nedenlerden dolayı, son on yıl içinde, araştırma çalışmaları kanser, oküler, eklem veya cilt bozuklukları2,3aşırı anjiyogenezi inhibisyonu amaçlayan yeni terapötik stratejilerin gelişmesine odaklanmaktadır.
Vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF) mevcut antianjiyojenik tedavilerin ana hedefini temsil eder4, ve birçok ANTI-VEGF monoklonal antikorlar geliştirilmiştir ve aşırı anjiyogenezi önlemek için sentezlenmiş. Ancak, bu sentetik ilaçlar şiddetli yan etkileri gösterir ve olumsuz maliyet-to-fayda oranı5,6var. Bu nedenle, tamamlayıcı ve şu anda kullanılan ilaçlar ile birleştirmek için minimal yan etkileri ile aşırı anjiyogenezi sınırlamak için yeni terapötik stratejiler bulmak zorunludur. Bu yeni ilaçlar, yüksek kimyasal çeşitlilik ve biyokimyasal özgüllük ile karakterize doğal ürünler arasında bulunabilir.
Bu yazıda, RGWE 'nin HUVECs 'in bir jelli Bodrum Matrix in vitro5' te tübüller oluşturabilme yeteneğinin etkisini değerlendirmek için basit bir yöntem öneriyoruz. Nitekim, rgwe gibi flavonoidler ve polifenoller gibi ikincil metabolitlerin bir karışımı olan rutin büyük bileşen5. Birçoğu zaten anti-inflamatuar ve vazokoruyucu ajanlar olarak test edilmiştir7,8,9,10,11. Dahası, Geçenlerde göstermiştir ki RGWE, ama rutin değil, HUVEC yeteneği bir jelli Bodrum matrisinde tübüller oluşturmak için inhibe edebiliyoruz ve bu fenomen MEK-ERK yolu tarafından aracılı olduğunu, potansiyel bir tedavi aracı olarak RGWE gösteren mümkün aşırı yeni kan damar oluşumu önlemek5.

<table><tbody><tr><td>HUVEC hücreleri</td><td>Clontech</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>EBM-2 bazal ortam</td><td>Clontech</td><td>cc3156</td><td></td></tr><tr><td>Tek quot kiti - takviyeler ve büyüme faktörleri</td><td>clontech</td><td>cc4147</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>96 oyuklu plakalar</td><td>Thermo Scientific</td><td>167008</td><td></td></tr><tr><td>15 mL konik tüpler</td><td>Sarstedt</td><td>62,554,502</td><td></td></tr><tr><td>10 mL tek kullanımlık serolojik pipet</td><td>Sarstedt</td><td>861,254,001</td><td></td></tr><tr><td>5 mL tek kullanımlık serolojik pipet</td><td>Sarstedt</td><td>861,253,001</td><td></td></tr><tr><td>1,000 &; mu; L pipet</td><td>Gilson</td><td>Pipetman classic</td><td></td></tr><tr><td>100 &mu; L pipet</td><td>Gilson</td><td>Pipetman classic</td><td></td></tr><tr><td>20 &mu; L pipet</td><td>Gilson</td><td>Pipetman classic</td><td></td></tr><tr><td>p1000 pipet uçları</td><td>Sarstedt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p20-200 pipet uçları</td><td>Sarstedt</td><td>70,760,502</td><td></td></tr><tr><td>Burker haznesi</td><td>Fortuna</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypan blu leke</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>mill-ex 0.22 & mu; m filtreler</td><td>Kırlangıç</td><td>SLGS033SS</td><td></td></tr><tr><td>Liyofilizatör</td><td>VirTis-SP Bilimsel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2</td><td>AirCos</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pen-Strep</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>100 mm çanak</td><td>Sarstedt</td><td>833,902</td><td></td></tr><tr><td>pcDNA3</td><td>Invitrogen</td><td>v79020</td><td></td></tr><tr><td>Lipofektamin-2000</td><td>Invitrogen</td><td>11668027</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td>Azaltılmış serum ortamı</td></tr><tr><td>Rutin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R5143-50G</td><td></td></tr><tr><td>Axiovert 25 mikroskop</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AmScope MD500 kamera</td><td>AmScope</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Thermo Scientific</td><td>D4818</td><td></td></tr><tr><td>Laboratuvar ısıtıcısı</td><td>Falc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ParaFilm</td><td>Amerikan Ulusal Can</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

huvec tüp-formasyon assay doğal ürünlerin anjiyogenezi üzerinde etkisini değerlendirmek için

HUVEC Tube-formation Assay to Evaluate the Impact of Natural Products on Angiogenesis

Angiogenesis, endotel hücre proliferasyonu, farklılaşma ve göç gibi farklı süreçler içeren, yeni kan damarlarının oluşumuna yol açabilecek ve çeşitli sinyal iletim yollarından oluşan bir olgudur. Burada, tüp oluşumu tahlil doğal ürünlerin anjiyogenez üzerinde etkisini değerlendirmek ve ilgili moleküler mekanizmaları araştırmak için basit bir in vitro yöntemi olduğunu göstermektedir. Özellikle, Ruta graveolens (rgwe) su özü varlığı, endotel hücreleri artık bir hücre hücre ağı oluşturmak mümkün ve insan göbek ven endotel hücre üzerinde rgwe etkileri (HUVEC) tüp oluşumu tarafından kaldırılmıştır MEK kurucu aktivasyonu.

Rgwe 'nin anjiyogenezi üzerinde etkisini değerlendirmek için, bir tüp oluşumu tahlili, bir jel Bodrum matrisinde yürütülmüştür. Üzerine yetiştirdiğinizde, HUVECs, uzatılmış görünen ve birbirleriyle bir hücre hücresi ağı oluşturmak için birbirine bağlayan hücrelerden kaynaklanan tüp benzeri yapıları oluşturur (Şekil 2). Şekil 3' te, biz kontrol koşullarına kıyasla rgwe Ile tedavi HUVECs dalları sayısının önemli ölçüde düşük olduğu...

Burada, biz su ekstresinin etkilerini değerlendirmek Ruta graveolens gemi ağ oluşumu üzerinde bir tüp oluşumu tahlil kullanarak bir jelli Bodrum matris.

HUVEC tüp-formasyon assay doğal ürünlerin anjiyogenezi üzerinde etkisini değerlendirmek için

Angiogenesis is a phenomenon that includes different processes, such as endothelial cell proliferation, differentiation, and migration, that lead to the ...

Tüp oluşumu Tahlil yeni kan damarlarının oluşumuna yol açan çeşitli adımların altında yatan moleküler mekanizmaları incelemek için bir in vitro testtir. Bu tizin bileşikleri ve anjiyogenez ile ilişkili sinyal basamakları belirlemek için izin verir. Bir testle, RGWE gibi doğal bir bileşiğin endotel hücrelerinin tüp benzeri bir yapı oluşturma yeteneğini azalttığını, hücre canlılığını etkilemediğini ve bu etkinin MEK/ERK yolunun aktivasyonuna bağlı olduğunu gösterebiliyoruz. Testi doğru sayıda hücre yle gerçekleştirmek önemlidir. Aslında, çok az veya çok fazla hücre tüplerin doğru oluşumuna izin veremedi. Bu nedenle, hücrelerin doğru sayısını bulmak için bir ön test yapmak için tavsiye edilir. Luca Olga Pastorino, laboratuvarımda doktora öğrencisi, prosedürleri gösterecek. İlk olarak, ruta graveolens ilkbahar ve yaz aylarında yaprakları toplamak. Konik bir şişeye 250 gram doğranmış yaprak koyun ve el yazmasında açıklandığı gibi bir litre distile su, kaynatın ve süzün. Ertesi gün, yaprak ekstresi lyophilize için bir lyophilizer kullanın. Toz elde ettikten sonra, tartMak ve aliquots bölün. Kültür HUVECs endotel hücre büyüme orta, metin protokolüne göre. Hücreler %80 birleştiğinde, hücre

huvec-tube-formation-assay-to-evaluate-impact-natural-products-on

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video protokolü insan göbek kordonu, insan umbilikal ven endotel hücreleri (HUVEC) izolasyonu ve kültürü göstermektedir. Bir kere bu hücreler, in vitro Hughes laboratuvar gösterdiği Optimize Fibrin Jel Boncuk Testi gibi anjiyogenez tayinlerde için kullanılabilir izole edilmiştir.

İnsan umbilikal ven endotel hücreleri İzolasyon (HUVEC)

Bu video in vitro anjiyogenez tayininde bir protokol anjiyogenez özetlediği çeşitli aşamaları olduğunu göstermektedir. Zaman atlamalı çimlenme görüntüleri, lümen oluşumu, dallanma ve anastomoz - anjiyogenez temel özellikleri gösterilmektedir.

Anjiyogenez Çalışmaları için optimize edilmiş Fibrin Jel Boncuk Testi

Bir tüp oluşum denemesi tümör hücrelerinin damar etkinliğini değerlendirmek için kullanılır.

Tümör Hücrelerinin vaskülojenik Faaliyet değerlendirin bir Matrigel Tabanlı Tüp Oluşumu Testi

Fizyolojik anjiyogenez ve yoksun Normal erişkin vaskülarize memeli doku çalışma için kullanılan cerrahi müdahaleye maruz kalmamış: (i) başlatılması ve test ajanların intraperitoneal uygulanması aşağıdaki anjiyogenez geliştirilmesi; ve sistemik uygulanması aşağıdaki (ii) anjiyogenez değişiklik Test ajanlar seçilir.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

Tüp formasyonu deneyi in vitro olarak anjiyojenezi ölçmek için bir hızlı, ölçülebilir bir yöntemdir. Endotel hücreler, koşullu ortam ile bir araya yerleşen ve bazal zar özü ekilir. Tüp oluşumu saat içinde meydana gelir ve yeni oluşan tübülleri kolayca ölçülebilir.

Endotel Hücre için Tüp Deneyi birleşimi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Anjiyogenezin Çalışması

Bu el yazması, kontrollü bir ortamda endotel hücre tüpü oluşumunu kullanarak belirli bir bileşiğin veya durumun anjiyogenez üzerindeki etkilerini ölçmek için bir tüp oluşturma testini açıklar.

Stratejik Endotel Hücre Tüp Oluşumu Testi: Azaltılmış Ekstrasellüler Matrix Ekstrasellüler Matrix ve Büyüme Faktörü Karşılaştırılması

miRNA tedavi kanser ilerleme düzenlenmesinde önemli potansiyele sahip. Aşağıda gösterildiği analitik yaklaşımlar hücre döngüsü ve anjiogenezi durdurma içinde bir birleşimsel miRNA tedavi faaliyetinin tanımlaması için kullanılır.

Kombinatorik miRNA düzenleyen hücre döngüsü ve anjiogenezi tedavilere analizi

Üç boyutlu eş-kültür spheroid anjiyogenez tsay sistemi fizyolojik anjiyogenezi taklit etmek için tasarlanmıştır. Co-kültür sheroidler iki insan vasküler hücre öncüleri, ECFCs ve MSCs oluşur ve kollajen jel gömülü. Yeni sistem anjiyojenik modülatörlerin değerlendirilmesinde etkilidir ve in vivo çalışmaya daha uygun bilgiler sağlar.

Endotel Kolonisi Oluşturan Hücreler ve Mezenkimal Kök Hücreler tarafından Oluşturulan Eş Kültür Sfaoidler Kullanılarak Üç Boyutlu Anjiyogenez Tsay Sistemi

Burada sunulan yöntem, reaktiflerin anjiyogenez veya vasküler geçirgenlik üzerindeki etkisini in vivo boyamadan değerlendirebilir. Yöntem, neo-damarları veya vasküler sızıntıyı görselleştirmek için kuyruk damarı yoluyla dekstran-FITC enjeksiyonunu kullanır.

Anjiyogenez Çalışmaları için Modifiye In Vivo Matrix Jel Plug Testi

Mevcut protokol, trofoblast hücreleri gibi hücrelerin, hücre dışı bazal membran matrisinin bir tabakası üzerinde kılcal benzeri yapılar halinde organize olduğu klasik in vitro anjiyogenez-tüp oluşum testinde oluşan tüp benzeri yapıların geri kazanılmasına izin verir. Geri kazanılan yapılar, çeşitli biyokimyasal analizler için RNA ve protein izolasyonu için kullanılır.

Farklılaşma İşaretleyici İfade Analizi için Anjiyogenez-Tüp Oluşum Testinden Trofoblast Hücre Geri Kazanımı

Keşfedin HUVEC tüp-formasyon assay yöntemiyle Ruta graveolens su ekstresinin anjiyogenez üzerindeki etkisini. Bu teknik damar ağı oluşumunu değerlendirmek için standart bir laboratuvar yöntemidir.

HUVEC tüp-formasyon assay doğal ürünlerin anjiyogenezi üzerinde etkisini değerlendirmek için

Daha fazla video keşfet