Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Bu yöntem, mikroçevretümör büyümesini nasıl desteklediği veya belirli bir ilacın meme kanserinin ilerlemesini etkili bir şekilde engelleyip engelleyemeyeceği konusunda kanser alanındaki anahtar soruların yanıtlatılabiliyor. Tümör indüksiyon tekniğinin en önemli avantajları hiçbir cerrahi gerekli olduğunu ve hangi yerinde meme kanseri kurmak için daha az invaziv bir şekilde olmasıdır. Bu tekniği kullanarak, tümör hücreleri meme yağ yastığı içinde büyümek, uygun doku ortamında, daha yakından deri altı enjeksiyon veya fare hücrelerine ksenogreft daha insan meme kanseri ilerlemesini taklit.

Ke-Xin Cao, teknisyenimiz ve ben, Gan-Lin Zhang'a bu prosedürü göstermede yardımcı olacağız. Operasyondan bir gün önce, alıcı fareyi elle dizginle ve dördüncü meme uçlarının etrafında tıraş olmak üzere hayvanın göbek tarafını kürke çevirin. Kürkü ince bir tüy dökücü krem tabakası ile silin.

30 ila 60 saniye sonra krem kaldırmak ve yumuşak kağıt havlu ile fare kuru distile su kullanın. Operasyon günü, buz üzerinde steril bir mikrosantrifüj tüp, PBS konsantrasyonu mililitre başına beş hücre iki kez on için murine meme kanseri hücre süspansiyon seyreltmek. Her enjeksiyondan önce, fare başına 50 mikrolitre hücre içeren 45'e 16 iğneile donatılmış bir mililitreşli şırınga yükleyin.

Ve her uyuşturulmuş hayvanayak çimdik yanıt eksikliği onaylamak. Hayvanın gözlerine merhem uygulayın ve şırınganın takip etmesi için bir tünel oluşturmak için ilk farenin dördüncü meme ucunun etrafındaki deriyi çadırlamak için cımbız kullanın. Boyun eğdirici ile şırınga tutun yukarı bakacak ve subkutan meme beş ila 10 milimetre deri girin, iğne ucu neredeyse meme ulaşana kadar tünel aşağıdaki.

İlk meme etrafında cilt çadır cımbız kullanarak şırınga takip etmek için bir tünel oluşturur. İğne cızırtıcı uçları arasına girilmeli ve dokuiçine depresif yerine yukarı kaldırılmalıdır. Dikkatle bevel meme altında olana kadar meme yağ pediçine iğne ucu yukarı hareket ettirin ve kanser hücrelerinin yavaş bir enjeksiyon sağlamak için cilt çadırı bırakın.

Yerleştirimi üzerine, dikkatle bevel meme altında olana kadar meme yağ pediçine iğne ucu kadar hareket ettirin. Ve doğru yere hücrelerin teslimini sağlamak için direnç hissedeceksiniz. Tüm hücreler enjekte edildiğinde, iğneyi hafifçe yana çevirin ve şırıngayı yavaşça geri çekin.

Hiçbir sıvı sızıntısı yapmak için, 10 ila 20 saniye boyunca iğne yarasına basınç uygulamak için bir pamuklu bez kullanın. Enjekte edilen meme ucu, merkezinde meme ucu ile, şeffaf, beyaz, düz küre olarak görünmelidir. Tümör hacmini belirlemek için, fare göbek tarafını dizginlemek ve tümör uzunluğu ve genişliğini ölçmek için bir kaliper kullanın.

Tümörün biyolüminesansını yakalamak için, görüntülemeden 10 dakika önce farenin boynunun arkasına kilogram başına 150 miligram D-luciferin enjekte edin. Ve uygun biyolüminesans görüntüleme parametreleri altında primer tümör ve metastazbiyolüminesans görüntüleri yakalamak. Uygun deneysel zaman noktasında, deriden tümör hasat makas kullanın.

Ve ameliyat sonrası ağrıyı dindirmek için cerrahi bölgeye analjezik solüsyon uygulayın. Daha sonra standart protokollere göre cerrahi dikişler ile cildi kapatın. Hayvan Tam iyileşme kadar izleme ile bir ısınma lambası altında kurtarmak için izin verin.

Birincil tümörü iki eşit parçaya kesmek için neşter kullanın. Sonraki hematoksilin ve eozin boyama ve immünohistokimya için% 4 paraformaldehit dokunun doku yarısı saklayın. Batı lekeleme veya RNAi izolasyon için sıvı nitrojen diğer yarısını dondurun.

Uygun deneysel uç noktada standart diseksiyon protokollerine göre akciğerleri hasat ve PBS organ yıkayın. Sonra hematoksilin ve eozin boyama ile metastazı doğrulamak için% 4 paraformaldehit akciğerleri düzeltmek. Primer tümör büyümesi tümör hacmi ve yaşayan tümör hücreli biyolüminesans ile ölçülebilir, gösterildiği gibi.

Ya sekonder tümör kurulmamıştır ya da primer tümörün güçlü biyolüminesans sinyalleri zayıf sinyallerle küçük metastatik fosi saptanabilir. Rezeksiyondan sonra uzak organların metastatik focisinden gelen biyolüminesans sinyali tespit edilip analiz edilebilir. Hem primer meme tümörü hem de akciğer kesitlerinin hem atokoksilin hem de eozin boyama ile morfolojisinin analizi, tümör hücresi aşılanmış hayvanlarda anti-CD31 mikrodamar belirteci boyama ile kanıtlandıkça artmış anjiyogenezin ortaya çıkar.

Bu işlemi denerken, tümör hücrelerini teslim etmeden önce iğne ucunun doğru yerde olduğundan emin olmak önemlidir. Bu prosedürü takiben, atomizers, hayvan ultrason gibi, in vivo primer tümörün mesane takviyesi hakkında ek sorulara cevap için yapılabilir. Bu teknik, gelişiminden sonra tümörigenez ve tümörigenez ile ilgili temel faktörlerin ve yolların araştırılmasında ilaç geliştirme alanında araştırmacıların önünü açmış ve murine hayvan modellerinde anti-kanser ilacının mekanizmalarının araştırılmasını sağlar.

Isofluran veya diğer gaz anestezisi ile çalışmanın dozunun son derece zor olabileceğini ve aktif karbon maskesi kullanmak gibi önlemlerin bu işlemi yaparken her zaman alınması gerektiğini unutmayın.