Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

Bu protokol, tümör hücre enjeksiyonu sırasında iltihabı en aza indirirken ve farelerin büyük kohortlar oluşturmak için yüksek bir üretim yöntemi sağlarken, doğal doku bölgesinde pankreas kanseri çalışma sağlar. Ultrason rehberliği kullanılarak karın cerrahisi ihtiyacı ortadan kalkar. Elimizde, UG-OTIM geleneksel ortotopik implantasyon agöre periton duvar tohumlama çok daha düşük bir oranına sahiptir.

UG-OTIM, pankreas tümörü mikro ortamının karakteristik histolojik ve immünbiyolojik özelliklerini yeniden ortaya koyan tümörler üretir ve bu nedenle klinik olarak ilgili bir ortamda yeni terapötik kombinasyonları araştırmak için kullanılabilir. Biz immüno-onkoloji ve kanser biyolojisi tedavileri için bu protokolü geliştirdi, ama diğer araştırma alanlarında kullanılabilir, diyabet gibi normal pankreas fonksiyonu veya hastalık durumları araştırmaları da dahil olmak üzere. İğne takılması ve enjeksiyonunun gerçek zamanlı ultrason görüntülemesi bu yöntemin ayrılmaz bir parçasıdır.

Yani adımın görsel gösterimi uygun teknik için çok önemlidir. İşleme başlamadan önce, pankreatik sünek adenokarsinom hücre hattını uygun miktarda steril, soğuk PBS'de askıya alıyoruz. Kafesleri 37 derece lik bir ısıtma plakası üzerine yerleştirin ve biyolojik güvenlik kabinini, indüksiyon odasını ve ultrason aşamasını uygun bir sterilantla iyice temizleyin.

Ultrason evresinin ısınma fonksiyonunu 37 dereceye ayarlayın ve anestezi indüksiyonundan sonra ilk hayvanın gözlerine merhem uygulayın. Ultrason aşamasında dorsal recumbency fare yerleştirin ve yavaşça bant ile sahneye üst ve alt ekstremiteleri güvenli. Orta hatta dalak bölgesi üzerinde karın üst sol kadranda piliçleştirici krem cömert bir tabaka uygulamak için steril bir pamuk ucu aplikatör kullanın.

Bir dakika sonra, hafifçe bir tuzlu ıslak gazlı bez ile aşırı tüy dökücü krem çıkarmadan önce saç kaldırmak için kuru bir gazlı bez ped kullanın. Daha sonra fareyi yeni temiz kafeslerden birine yerleştirin. Ultrason eşliğinde tümör hücre implantasyonu için, yüzey yere paralel olacak şekilde ultrason platformu ayarlayın ve fare nin başını sağa bakacak şekilde hayvanın sol tarafına standı.

Transdüser pozisyonunu enine karın görüntüsü elde edecek şekilde ayarlayın ve fare uzuvlarını bantla platforma sabitleyin. Farenin karıntemas için yavaşça transdüser indirin ve pankreas açıkça görülebilir kadar transdüser ayarlayın. Karın boşluğunda doğru bir oryantasyon sağlamak için sol böbrek ve dalak bulun.

Enjeksiyon yeri bulunduğunda, tümör hücresi süspansiyon25 mikro litre ile 29 gage 1/2 inç insülin şırınga yük ve steril bir alkol hazırlık pedi ile iğne ucu silin. Enjeksiyon yerinde gerginliği artırmak için fare deri ve periton duvarı kavramak için künt kenar forceps kullanın. Ultrason platformu yüzeyine yaklaşık 25 ila 45 derecelik bir açıda şırınga tutarak, yavaş yavaş deri ve periton duvarı ile iğne ilerlemek.

İğnenin doğrudan pankreasa doğru yol göstermek için ultrason görselleştirmekullanmadan önce iğneperteduvar dan delinmiş olduğunu onaylayın. İğne yerindeyken, tümör hücrelerini yavaşça enjekte edin. Pankreas içinde bir sıvı bolus oluşumu ultrason ile doğru enjekte pankreas belirgin olacaktır.

Süspansiyon tam hacim enjekte edildikten sonra, ve sıvı bolus ultrason ile görülebilir, yavaş yavaş fare karın dan iğne geri çekmeden önce çok hareketsiz şırınga tutun, enjekte hücreleri rahatsız etmemeye özen. Daha sonra fareyi tam iyileşme ye kadar izleyerek ısıtıcıda yeni ve temiz bir kafese yerleştirin. Pankreasta uygun iğne yerleşimi, iğne derinliği ve açısı da dahil olmak üzere bu protokolde kritik bir adımdır.

Sıvı bolus görselleştirilmesi başarılı bir tümör enjeksiyonu onaylamaya yardımcı olur. Enjeksiyon derinliğini kontrol etmek en zor yönüdür. Benim tavsiyem tripamboo enjeksiyonları ile pratik yapmak ve ultrason ve nekropsi hem de sıvı bolus onaylamak.

Haftalık ultrason görüntüleme ile tümör implantasyonu ve büyüme hızı nın izlenmesi tüm deneysel dönem boyunca pankreas sınırları içinde bulunan tümörler ortaya koymaktadır. Yüksek titer tümör enjeksiyonları düşük titre kohort ile karşılaştırıldığında enjeksiyondan üç hafta sonra tümör taşıyan hayvanların daha yüksek bir oranda sonuçlanır. Tümör başlangıcındagecikme rağmen, genel tümör büyüme hızı iki doz arasında önemli ölçüde farklı değildir.

Benzer şekilde, iki kohort arasındaki sağkalım oranı önemli ölçüde farklı olmasa da, düşük titrekohort biraz geliştirilmiş sağkalım eğilimi eğilimindedir. Yüksek titre kohort da dört hafta post-enjeksiyon ile, klinik öncesi çalışmalarda kaydedilebilir tümörler ile farelerin daha büyük bir oranda üretir. Fedakarlık üzerine ultrason güdümlü ortotopik tümör implantasyon modeli tümörlerin brüt anatomisi spontan KPC tümörlerine benzer ve histolojik analiz her iki modelde de benzer ve insan hastalığının morfolojisini özetleyen anormal duktal yapıların bir modelini göstermektedir.

Her iki modelde de tümörler T-Cells tarafından kötü bir şekilde infiltrasyona neden olur, ancak makrofajlar tarafından çok fazla infiltrasyona neden olur. Pankreas içine düzgün giriş sağlamak için uygun açıda şırınga tutmak için unutmayın, ve enjeksiyon ile devam etmeden önce iğne pankreas içinde olduğunu onaylamak için. Tümör büyümesi izlenebilir ve tümörler bir müdahalenin etkisini belirlemek için fostometri veya immünohistokimya ile analiz için hasat edilebilir.