Name: Karabiber Bitkilerinde Phytophthora capsici için Etkili Bir Aşılama Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-16T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Keşfedin, Phytophthora capsici ile karabiber bitkilerinde etkili bir aşılama yöntemini. Bu teknik, bitki-patojen etkileşimlerini çalışmak için geleneksel yöntemlere göre daha güvenilir ve kararlı sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2020YFD1001200), Çin Tarım Araştırma Sistemi (CARS-11), Hainan Eyaleti Akademisyenleri için İnovasyon Platformu'nun özel araştırma fonu (YSPTZX202154), Çin'in Hainan Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (321RC652) ve Çin Doğa Bilimleri Vakfı (No. 31601626) tarafından finansal olarak desteklenmiştir.

1. Karabiber kesme tesislerinin enfeksiyon için hazırlanması
<ol><li>Dezenfekte edilmiş bir budama bıçağı veya secateurs kullanarak sağlıklı ve kuvvetli bir şekilde büyüyen ortotropik bir karabiber dalından 0,5 cm çapında yaklaşık 40 cm uzunluğunda beş düğümlü bir kesim yapın. Plagiotropik dalların alt üç düğümünü budayın, üst iki düğüm yaklaşık 10 yaprak bozulmadan kalır.</li>
	<li>Toprak ve hayvan gübresi (gübresi veya koyun gübresi) içeren köklenme substratını 1: 1 oranında hazırlayın. Köklenme substratını 20 dakika boyunca 121 °C'de otoklav yapın.</li>
	<li>Kesimleri köklenme substratına yaklaşık 50°'lik bir açıyla yerleştirin, üçüncü düğüm sadece substratın yüzeyine ve substratın üzerindeki bu düğümdeki aksiller tomurcuklara dokunur. NOT: Burada kullanılan torba şu boyutlara sahiptir: 40-60 cm yükseklik, 25-30 cm çap.</li>
	<li>Bitkinin köklerinin üzerine 10-20 L su dökün. Kesimleri, köklenme ve büyüme için 25-30 ° C sıcaklıkta% 90 gölgeli bir seraya yerleştirin.</li>
</ol>2. Phytophthora capsici'nin (P. capsici) yayılması
NOT: Çin Tropikal Tarım Bilimleri Akademisi7, Baharat ve İçecek Araştırma Enstitüsü'nün bitki koruma laboratuvarında bir Phytophthora capsici kültürü stoğu tutulmaktadır.
<ol><li>Patates yumrularını akan musluk suyunun altında fırçalayın ve temizleyin ve ardından 200 g patatesi 1cm3'lük küpler halinde kesin. Bazı küpleri 800 mL çift damıtılmış su (ddH 2 O) içeren bir beherin içine yerleştirin ve20dakika kaynatın.</li>
	<li>Yerçekimi filtrasyonu kullanarak suyu çift gazlı bezle filtreleyin. Filtrata 20 g dekstroz ve 15 g agar ekleyerek veddH 2O ile 1 L'ye kadar olan hacmi doldurarak patates dekstroz agarını (PDA) hazırlayın. karışımı 121 ° C'de 20 dakika8 boyunca otoklav edin.</li>
	<li>Sterilize edilmiş PDA'nın 20 mL'sini sıvı halde laminer hava akış davlumbazının içine 9 cm çapında yuvarlak bir Petri kabına dökün. Yoğuşmayı önlemek için kapakları laminer hava akış davlumbazının içinde kapakları açık olan PDA plakalarını gece boyunca açık bırakın.</li>
	<li>Bir test tüpü içindeki Phytophthora capsici stoğundan miseliyi almak için bir aşılama döngüsü kullanın. İnokulumu, PDA ile temas halinde misel tarafı ile bir Petri kabına yerleştirin.</li>
</ol>3. Karabiber enfeksiyonu
<ol><li>Kuluçka<ol>
<li>Substrat yüzeyinin 5 cm yukarısında ve aşılama için gövdedeki köklere yakın bir alan tanımlayın.</li>
		<li>Bir tıpa delici kullanarak bir Petri kabında PDA üzerindeki Phytophthora capsici kültürünün büyüyen kenarında 0,5 cm çapında miselya çapında bir disk oluşturur.</li>
		<li>Bir şırınga iğnesi kullanarak gövdeye zarar verin ve seçilen aşılama alanında üçgen bir desende üç delik açın. Her deliği bir misel diski ile örtün. Yaralı bölgenin misel diskleriyle tamamen kaplandığından emin olmak için delikleri birbirine yakın konumlandırın.</li>
		<li>Misel disklerini, kurumayı önlemenin bir yolu olarak sterilize edilmiş nemlendirilmiş pamuklu pedlerle örtün. Aşılama disklerinin konumunu korumak için pedi gövdeye bir polietilen şeritle bağlayın. NOT: Aşılamadan 8 saat sonra aşılanan delikler siyaha döndü ve lezyon zaman geçtikçe uzadı. Yapraklar sarardı ve düştü ve aşılanan bitki aşılamadan 7-10 gün sonra öldü. Kontrol tesislerinde lezyon gelişmedi. Genlerin çoğu, kontrol grubuna kıyasla Phytophthora capsici ile aşılamayı takiben farklı şekilde eksprese edildi. Enfekte dokuların histopatolojik analizi, Phytophthora capsici'nin ksilemde kolonize olduğunu göstermiştir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İlgilenilen bitki malzemelerini numune alın ve sonraki çalışmalarda kullanılmak üzere -80 ° C'de sıvı azotta saklayın. NOT: Deneylerden önce sıvı azot, plastik torbalar, işaretleyici kalemler, dal makasları ve diğer malzemeler hazırlanmıştır.</li>
	<li>Belirli bitki materyalleri kullanım için örneklendikten sonra, kalan tüm bitki materyallerini, kalan Phytophthora capsici kültür ve kültür ortamını ve bu aşılama çalışmasında kullanılan tüm aletleri ve laboratuar malzemelerini otoklav edin.</li>
</ol>

<ol><li>Gordo, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+sequencing+of+black+pepper+root+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">High-throughput sequencing of black pepper root transcriptome.</a> BMC Plant Biology. 12 (1), (2012).</li>
<li>Leonian, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+and+fruit+blight+of+Peppers+caused+by+Phytophthora+capsici+sp.+Nov%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Stem and fruit blight of Peppers caused by Phytophthora capsici sp. Nov.</a> Phytopathology. 12 (9), 401-408 (1922).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+maize+resistance+by+its+neighbors%3A+Activating+1%2C4-benzoxazine-3-ones+synthesis+and+defense+gene+expression+to+alleviate+leaf+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Priming maize resistance by its neighbors: Activating 1,4-benzoxazine-3-ones synthesis and defense gene expression to alleviate leaf disease.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 830(2015).</li>
<li>Fonseca, C. E. L., Vianda, D. R., Hansen, J. L., Pell, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+among+forage+quality+traits%2C+vigor%2C+and+disease+resistance+in+alfalfa%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Science%22%5BJournal%5D)">Associations among forage quality traits, vigor, and disease resistance in alfalfa.</a> Crop Science. 39 (5), 1271-1276 (1999).</li>
<li>Altier, N. A., Thies, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+resistance+to+Pythium+seedling+disease+in+Alfalfa+using+a+culture+plate+method%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification of resistance to Pythium seedling disease in Alfalfa using a culture plate method.</a> Plant Disease. 79 (4), 341-345 (1995).</li>
<li>Pratt, R. G., Rowe, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+simplified+leaf+inoculation+procedures+for+identification+of+quantitative+resistance+to+Sclerotinia+trifoliorum+in+Alfalfa+seedling%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Evaluation of simplified leaf inoculation procedures for identification of quantitative resistance to Sclerotinia trifoliorum in Alfalfa seedling.</a> Plant Disease. 82 (10), 1161-1164 (1998).</li>
<li>Hao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+transcriptome+sequencing+of+black+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+an+analysis+of+genes+involved+in+phenylpropanoid+metabolism+in+response+to+Phytophthora+capsici%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">De novo transcriptome sequencing of black pepper (Piper nigrum L.) and an analysis of genes involved in phenylpropanoid metabolism in response to Phytophthora capsici.</a> BMC Genomics. 17 (1), 1-14 (2016).</li>
<li>Dong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+inoculation+and+classification+of+maize+ear+rot+caused+by+Fusarium+verticillioides%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Field inoculation and classification of maize ear rot caused by Fusarium verticillioides.</a> Bio-protocol. 8 (23), 3099(2018).</li>
<li>English, J. T., Laday, M., Bakonyi, J., Schoelz, J. E., Érsek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+molecular+characterization+of+species+hybrids+derived+from+induced+fusion+of+zoospores+of+Phytophthora+capsica+and+Phytophthora+nicotianae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycological+Research%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and molecular characterization of species hybrids derived from induced fusion of zoospores of Phytophthora capsica and Phytophthora nicotianae.</a> Mycological Research. 103 (8), 1003-1008 (1999).</li>
<li>Chatterjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+activity+of+some+phenolic+constituents+from+green+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+fresh+nutmeg+mace+%28Myristica+fragrans%29%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Antioxidant activity of some phenolic constituents from green pepper (Piper nigrum L.) and fresh nutmeg mace (Myristica fragrans).</a> Food Chemistry. 101 (2), 515-523 (2007).</li>
<li>Pfender, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+sporangia+and+release+of+zoospores+by+Phytophthora+megasperma+in+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Production of sporangia and release of zoospores by Phytophthora megasperma in soil.</a> Phytopathology. 67 (5), 657-663 (1977).</li>
<li>Nagila, A., Schutte, B. J., Sanogo, S., Idowu, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chile+pepper+sensitivity+to+mustard+seed+meal+applied+after+crop+emergence%5BTitle%5D)+AND+%22HortScience%22%5BJournal%5D)">Chile pepper sensitivity to mustard seed meal applied after crop emergence.</a> HortScience. 56 (2), 1-7 (2021).</li>
<li>Lamour, K. H., Stam, R., Jupe, J., Huitema, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oomycete+broad-host-range+pathogen+Phytophthora+capsica%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The oomycete broad-host-range pathogen Phytophthora capsica.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 329-337 (2012).</li>
<li>Hardham, A., Gubler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarity+of+attachment+of+zoospores+of+a+root+pathogen+and+pre-alignment+of+the+emerging+germ+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International+Reports%22%5BJournal%5D)">Polarity of attachment of zoospores of a root pathogen and pre-alignment of the emerging germ tube.</a> Cell Biology International Reports. 14 (11), 947-956 (1990).</li>
</ol>

Bu çalışmada, karabiber bitkisinde bazal kafa hasara ve etkili bir aşılama sistemi sağlamak için iğnelenmiştir. Misel peletleri daha sonra nemi korumak ve patojenin bitkiyi iyi enfekte etmesini sağlamak için üç deliği kapladı. Aşılamayı takiben, yapraklar sararmaya başladı ve düştü ve aşılanan bitkiler öldü. Kontrol tesislerinde lezyon gelişmedi. Çoğu gen, kontrol grubuna kıyasla Phytophthora capsici ile aşılamayı takiben farklı şekilde eksprese edildi. Mantar hastalıkları, önemli sayıda üründeki yapısal ve fizy...

Karabiber (Piper nigrum L.) odunsu bir tırmanışçı ve en önemli baharat bitkilerinden biridir. "Baharatların Kralı"1 olarak bilinir ve Asya, Afrika ve Latin Amerika'da 40'tan fazla ülke ve bölgede yetiştirilir. Phytophthora kök çürüklüğü, karabiberin en yıkıcı hastalığıdır ve oomisit Phytophthora capsici'den kaynaklanır. Bu patojen ayrıca salatalıkları, patlıcanları, acı biberleri ve domatesleri de enfekte eder 2,3. Karabiber ile, bütün bir ürün bazen bu hastalık tarafından yok edilebilir. Biber ekim alanlarının genişlemesi, Çin karabiber endüstrisinin gelişimini önemli ölçüde engelleyen dirençli çeşitlerin bulunmamasının bir sonucu olarak kısıtlanmıştır. Karabiber bitkilerinde Phytophthora capsici için etkili bir aşılama ve hassas bir örnekleme sistemi, bu bitki-patojen etkileşimini incelemek için gereklidir.
Germplazma kaynaklarında direncin tanımlanması ve taranması, patojenin patojenitesinin araştırılması ve dirençli çeşitlerin ıslahı ve kullanılması için temel gerekliliktir. Yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım, bitki türlerine ve patojen gruplarına dayanan çeşitli tanımlama yöntemleri kullanmaktır. Güncel tanımlama yöntemleri, son yıllarda geliştirilen popülasyon tanımlama, bireysel tanımlama, organ tanımlama, doku tanımlama, hücre tanımlama, biyokimyasal tanımlama ve moleküler tanımlamayı içerir 4,5. Bu alanlarda başarılar elde edildi ama birçok sorun da var. Hangi yöntem seçilirse seçilsin, tesis direnci tanımlamanın temel gereksinimleri, net hedefler, güvenilir sonuçlar ve basit, hızlı ve standartlaştırılması kolay yöntemler dahil olmak üzere tutarlıdır. Karabiber direncinin belirlenmesinde de bu ilkeye uyulmalıdır.
Doğal alan koşullarında, hastalık direncinin tanımlanması birçok çevresel faktörden etkilenebilir. Bu nedenle, hastalık direncini tanımlamak için laboratuvarda müstakil yaprakların ve sulanan köklerin kullanılması önerilmiştir. Sağlıklı bitkilerden elde edilen genç yapraklar laboratuvarda in vitro olarak aşılandı ve bitkilerin hastalık direncini belirlemek için patojen aşılanarak hastalıklı yaprak alanı ölçüldü6. Bununla birlikte, in vitro yaprak aşılaması, moleküler etkileşim çalışmaları için değil, yalnızca genel direnç tanımlaması için kullanılabilir. Buna rağmen, hastalığa dirençli durum sıklıkla sulanan kök aşılamasında ortaya çıkar ve hastalık direnci için moleküler ıslahın takip çalışmasında belirsizliğe neden olur. Bu nedenle, hızlı ve basit iç mekan algılama yöntemleri çok önemlidir. Bu çalışma, laboratuvarda direnç tanımlaması için bir yöntem sunmayı amaçlamaktadır.

<table><tbody><tr><td>Agar tozu</td><td>Solarbio</td><td>A8190</td><td></td></tr><tr><td>Temiz tezgah</td><td>Haier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dekstroz</td><td>Xilong Scientific</td><td>15700501</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek sıcaklıkta sterilizasyon fırını</td><td>Zaelway</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri tabak plakaları</td><td>Biosharp</td><td>BS-90-D</td><td></td></tr></tbody></table>

karabiber bitkilerinde phytophthora capsici için etkili bir aşılama yöntemi

An Effective Inoculation Method for Phytophthora capsici on Black Pepper Plants

Piper nigrum L. (karabiber), dünya çapında ekonomik açıdan önemli bir baharat ürünü olan tipik bir odunsu asmadır. Karabiber üretimi, bir "boğulma noktası" sorunu olarak endüstri gelişimini ciddi şekilde etkileyen Phytophthora capsici'nin neden olduğu kök çürüklüğü hastalığından önemli ölçüde etkilenmektedir. Bununla birlikte, karabiberdeki direncin moleküler genetik mekanizması belirsizdir ve bu da yeni karabiber çeşitlerinin geliştirilmesinde yavaş ilerlemeye yol açmaktadır. Karabiber bitkilerinde Phytophthora capsici için etkili bir aşılama ve hassas örnekleme sistemi, bu bitki-patojen etkileşimini incelemek için gereklidir. Bu çalışmanın temel amacı, karabiberin bazal başının Phytophthora capsici ile aşılandığı ayrıntılı bir metodolojiyi göstermek ve aynı zamanda odunsu asma bitkilerinin aşılanması için bir referans sağlamaktır. Karabiber bitkisinin bazal kafası, ona zarar vermek için iğnelendi ve misel topakları, nemi korumak için üç deliği kapladı, böylece patojen bitkiyi iyi enfekte edebildi. Bu yöntem, toprak damlatma veya kök daldırma dahil olmak üzere geleneksel aşılama yöntemlerinin neden olduğu dengesizliği çözmenin daha iyi bir yolunu sağlar. Ayrıca, tarımsal hassas ıslahta bitkiler ve diğer toprak kaynaklı bitki patojenleri arasındaki etki şeklini incelemek için umut verici bir araç sağlar.

Şekil 1 , P. capsici aşılamasını takiben karabiber yapraklarının semptomlarını göstermektedir. Şekil 2 , P. capsici aşılamasını takiben karabiber saplarının semptomlarını göstermektedir. Patojen, karabiberi bazal gövdede enfekte etti; yaprak sararması, solgunluğun ortaya çıkması, ksilem kahverengileşmesi ve damar kararmasının yavaş yavaş ortaya çıkması gibi semptomlar. Şekil 3 , Phytophthora capsici ile aş...

Karabiber bitkisinin bazal kafasını iğnelemek, ona zarar vermek için kısa ve zaman kazandıran bir yöntemdir. Burada, karabiber bitkilerini enfekte etmek için bir video ile ayrıntılı adımlar sağladık.

Karabiber Bitkilerinde Phytophthora capsici için Etkili Bir Aşılama Yöntemi

Piper nigrum L. (black pepper) is a typical woody vine that is an economically important spice crop across the world. Black pepper production is ...

Aşağıdaki deney, karabiber bitkilerinde Phytophthora capsici için etkili bir aşılama ve hassas örnekleme yöntemi sunmaktadır. Tipik bir odunsu asma olan karabiber, ekonomik açıdan önemli bir baharat ürünüdür. Karabiber üretimi çoğunlukla Phytophthora capsici'nin neden olduğu kök çürüklüğü hastalığından etkilenir ve endüstriyel gelişmeyi ciddi şekilde etkilemiştir.Karabiber bitkilerinde Phytophthora capsici için etkili bir aşılama ve hassas bir örnekleme sistemi, bitki-patojen etkileşiminin incelenmesi için önemlidir. Bu çalışmanın temel amacı, karabiberin bazal başının Phytophthora capsici ile aşılandığı ayrıntılı bir metodolojiyi göstermek ve ayrıca odunsu asma bitkilerinin aşılanması için bir referans sağlamaktır. Bu yöntem, toprak damlaması veya kök daldırma gibi geleneksel aşılama yönteminin getirdiği dengesizliği çözmek için daha iyi bir yol sağlar.Deneysel prosedürler. Karabiber kesimleri iki ay boyunca kontrollü ortamda ekilir. Alt kültür Phytophthora capsicive ve 25 santigrat derecenin altında beş gün boyunca kuluçkaya yatırın.Enfeksiyon gününde, agar blokları iğne tarafından yapıştırılan üç delik üzerinde kaplanır. Ve son olarak, hastalık semptomlarını karakterize edin. Karabiber kesme tesislerinin enfeksiyon için hazırlanması.Ortotropik dalları 40 santimetre uzunluğunda ve 0,5 santimetre çapında kesin ve alt düğümlerdeki plajiyotropik dalları steril bıçak ve secateur ile çıkarın. Kesilen dal, su kaybını azaltmak için üstte iki düğüm ve beş yaprak içermelidir. Üst kısmı düz bir kesime ve alt kısmı eğik bir kesime kesin.Karabiber kesiminin köklenme substratı, gübresi, koyun gübresi vb. gibi toprak ve hayvan gübresini içeren bir karışım halinde bire bir oranında hazırlandı. Toprak 20 dakika boyunca yaklaşık 121 santigrat derecede otoklavlandı. Köklenme substratlarını yerleştirmek için 30 santimetre çapında ve 50 santimetre yüksekliğinde üreme torbalarını kullanın.Substratları doldurmak için 50 derecelik bir eğim hazırlayın. Kesimler, substratın altında üçten fazla düğüm bulunan 50 derecelik bir açıyla yerleştirildi. Köklenme ortamı ile kaplandılar ve yardımcı kısım ortama yapışmalıdır.Son olarak, kesimler tamamen sızdı. Kesimi yerleştirmek için düz kesim benimsendi. Phytophthora capsici kültürlerinin hazırlanması.Hastalıksız patatesleri seçin. Patatesleri temizleyin ve küçük kareler halinde kesin. 200 gram patatesi 800 mililitre çift damıtılmış suya koyun ve 20 dakika kaynatın.Sonra karışımı süzün. 20 gram dekstroz ekleyin. Karışımı bir litreye çift damıtılmış suyla doldurun.Filtratın içine 15 gram agar tozu ekleyin. Ortamı şişelere dağıtın ve Parafilm kullanarak kapatın. Ortamı 20 dakika boyunca 121 santigrat derecede otoklavlayın.Hesaplanan patates agar ortamı, Petri çanak tabaklarına dağıtıldı ve katılaşma için steril tezgahta soğutuldu. Aşılama iğnesi, alkol yakan lamba kullanılarak ısıtılarak ve birkaç saniye soğutularak sterilize edildi. Steril aşılama kullanarak küçük mantar örnekleri alın ve PDA'ya yerleştirin.Miselyum plakanın yaklaşık dörtte üçünü kaplar. Kültürler daha fazla deney için hazır. Karabiber enfeksiyonu.Substratın yüzeyinden beş santimetre uzaktaki konum, kuluçka noktası olarak kabul edildi. Kuluçka yeri, enfektif sürenin uzamasını önlemeyi amaçlayan kökten uzak olmamalıdır. Pinpricking'in ayrıntılı adımları aşağıdaki gibidir.Bir tıpa delici kullanılarak Phytophthora capsici'nin bir miselyum peleti toplandı. Özellikle, plakanın kenarındaki yeni geliştirilen miselyum peletleri, daha yüksek enfektif aktiviteleri nedeniyle tercihen seçilmiştir. Bir sapı% 75 etanol kullanarak sterilize edin ve aşılama iğnesini kullanarak sterilize edilmiş konumda üç üçgen gözenek alın.Aşılama yerindeki üç üçgen gözenek, aşılama iğnesi kullanılarak sıkışmış ve üç gözenek üzerinde misel peletleri kaplanmıştır. Sekiz saat sonra, gözenekler genel olarak siyaha döndü. İnkübasyonun uzamasıyla genişleme genişletildi.Yedi ila on gün sonra, yapraklar sararır ve karabiber ölene kadar düşer. Sunum sonuçları aşağıdaki gibidir. Enfeksiyondan sonra, yaprak sararması ve solgunluğu, ksilem kahverengileşmesi ve damar kararması dahil olmak üzere karabiber bitkilerinde semptomlar görülür.Genlerin çoğu, Phytophthora capsici ile aşılamadan sonra, kontrol grubuna kıyasla farklı şekilde ifade edildi. Enfekte dokuların histopatolojik analizi, Phytophthora capsici'nin ksilemde kolonize olduğunu göstermiştir. Son. Bu çalışmada, etkili bir aşılama sağlamak için zarar görmesini sağlamak için bazal kafayı iğnelemek ve karabiberde ikiye katlama sistemi kullanılmıştır.Bu arada, bu protokol aynı zamanda inkübasyon için bir referans sağlamanın daha etkili bir yolunu temsil eder-Yöntemimiz daha fazla zaman verebilir ve daha kısa bir süre çalışabilir. Bu protokol, bir bitki ile toprak kaynaklı patojen arasında güçlü bir etkileşim sağlayan daha iyi sonuç sağlar. Bitkiler ve patojenleri arasındaki dinamik süreci tespit etmek için görünür ve uygundur.Yöntemimizde, karabiber bitkisinin bazal kafasını onlara zarar vermesi için iğnelemeye başlıyoruz. Daha sonra, hasarlı alan doğrudan Phytophthora capsici ile kaplanır ve nemi korur. Böylece patojen bitkiyi enfekte edebilir.Ayrıca, tarımsal hassas ıslahta bitkiler ve diğer toprak kaynaklı bitki patojenleri arasındaki etki tarzının incelenmesi için umut verici bir yol sunuyoruz.

an-effective-inoculation-method-for-phytophthora-capsici-on-black

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Kaynak: Rufián, J. S., et.al. Bitki dokusunda Pseudomonas Syringae genlerinin tek hücreli analizi. J. Vis. Exp. (2022)Bu video, Arabidopsis bitki yapraklarına bakteriyel bir patojenin girmesi için vakum sızma yöntemini gösteriyor. Yaklaşım, stoma yoluyla uniform girişi sağlamak için hazırlanmış bakteriyel süspansiyon ve vakum darbeleri kullanır ve kontrollü yaprak enfeksiyonuna yol açar.

Arabidopsis yapraklarına vakum infiltrasyonu yoluyla bakteriyel bir patojenin aşılanması

Bu video, Arabidopsis thaliana bitkisindeki fide büyüme inhibisyonu testini göstermektedir. Artan immün peptit elisitör konsantrasyonunun fide büyümesi üzerindeki etkisi belirlenir.

Fide büyümesinin bağışıklık kaynaklı inhibisyonunun ölçülmesi

Bu protokol mantar entomopatojenin tanıtmak için iki aşılama yöntemleri...

Endophytes olarak Mantar Entomopatojenlerin Kurulması: Endofitik Biyolojik Kontrol Doğru

Biyotrofik patojen Ustilago maydis ile mısır ve teozinte bitkileri aşılamak için iğne enjeksiyon yönteminin kullanımı açıklanmıştır.  İğne enjeksiyonu aşılama yöntemi, mantar patojeninin, patojenin eksrezi oluşumu yoluyla bitkiye girdiği bitki yaprakları arasında kontrollü bir şekilde teslimini kolaylaştırır. Bu yöntem son derece verimlidir, U. maydisile tekrarlanabilir aşılar sağlar.

Ustilago maydis'in Mısır ve Teosinte Hatlarında Patojenitesini Değerlendirmek İçin Hızlı ve Verimli Bir Yöntem

Agroinfiltrasyon ve PVX agroinfection, bitkilerdeki genlerin geçici ektopik ekspresyonu için rutin fonksiyonel tahlillerdir. Bu yöntemler, efektoromik stratejilerde (hızlı direnç ve avirulence gen keşfi) etkili tahlillerdir ve moleküler bitki patolojisinde modern araştırmalar için çok önemlidir. Tesislerde sağlam yüksek verimli fonksiyonel analiz talebini karşılarlar.

Patates ve Nicotiana benthamiana'da Agroinfiltrasyon ve PVX Agroinfection

Patojen büyümesinin niceliksel olarak belirlenmesi, çeşitli Arabidopsis thaliana (bundan böyle Arabidopsis olarak anılacaktır) bağışıklık tepkilerini karakterize etmek için güçlü bir araçtır. Burada açıklanan yöntem, Pseudomonas syringae pv'yi ölçmek için optimize edilmiş bir şırınga infiltrasyon testi sunar. maculicola ES4326 yetişkin Arabidopsis yapraklarında büyüme.

Kullanarak Bitki Savunma Yanıtları ince Karakterizasyonu için Bakteriyel Yaprak Sızma Deneyi<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystem

Burada, bitki virülans bitki patojeni ile test etmek için bir iletişim kuralı mevcut Magnaporthe grisea. Bu rapor mantarlar yalıtır pathotypes büyük ölçekli tarama için katkıda bulunmak ve moleküler ıslahı sırasında bitkilerin dirençli mekanizmaları anlamak için mükemmel bir başlangıç noktası olarak hizmet.

Bitki enfeksiyon Test: Sprey ve bitki patojeni Magnaporthe Grisea ile aşı yara-aracılı

~ 50 μm ağ ve şeffaf bir plastik odaya sahip bir aşılama kutusundan oluşan basit bir spor dağıtım sistemi oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Bu, bitkileri külleme sporlarıyla eşit şekilde aşılamak için kullanılabilir, böylece incelenen bitkilerin hastalık fenotiplerinin doğru ve tekrarlanabilir bir şekilde değerlendirilmesini sağlar.

Arabidopsis ve diğer bitkilerin külleme enfeksiyonu fenotiplerini doğru bir şekilde değerlendirmek için kolay ve esnek bir aşılama yöntemi

Bu protokol, bitki köklerini toprak kaynaklı mikroplarla aşılamak için stratejilerin ayrıntılı bir özetini sunar. Verticillium longisporum ve Verticillium dahliae mantarları için örneklendirilen üç farklı kök enfeksiyon sistemi tanımlanmıştır. Potansiyel uygulamalar ve olası aşağı akış analizleri vurgulanır ve her sistem için avantajlar veya dezavantajlar tartışılır.

Bitki Köklerini Toprak Kaynaklı Mikroorganizmalarla Enfekte Etmek için Aşılama Stratejileri

Bu protokol, partenogenetik bir böcek olan hardal yaprak bitine (Lipaphis erysimi (Kalt.)) karşı entomopatojenik mantarların (EPF) etkinliğini değerlendirmek için optimize edilmiş bir müstakil yaprak biyo-tahlil sistemi sunar. Yöntem, Petri kabı deneyleri sırasında veri toplama sürecini özetleyerek, araştırmacıların EPF'nin hardal yaprak bitlerine ve diğer partenogenetik böceklere karşı virülansını tutarlı bir şekilde ölçmelerini sağlar.

Entomopatojenik Fungusların Partenogenetik Böcek, Hardal Yaprak Biti, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Agar içeren cam kaplarda modifiye edilmiş bir müstakil yaprak yöntemi kullanılarak biber tripslerinin toplu olarak yetiştirilmesi için müstakil yapraklı bir biyotahlil protokolü oluşturulmuştur, bu da yüksek sağkalım ve senkronize gelişme sağlar. Bu sistem, entomopatojenik mantar virülansının 2. instar larvalarına karşı verimli bir şekilde taranmasını sağlar ve laboratuvar, sera ve tarla değerlendirmeleri için güvenilir bir trips kaynağı sağlar.

Entomopatojenik Mantarların Virülans Taraması için Biber Thrips (Scirtothrips dorsalis Hood) Yetiştirme Sisteminin Kurulması

Keşfedin, Phytophthora capsici ile karabiber bitkilerinde etkili bir aşılama yöntemini. Bu teknik, bitki-patojen etkileşimlerini çalışmak için geleneksel yöntemlere göre daha güvenilir ve kararlı sonuçlar sunar.

Karabiber Bitkilerinde Phytophthora capsici için Etkili Bir Aşılama Yöntemi

Daha fazla video keşfet