İkili Yaralanma Yoluyla Rahim İçi Yapışıklıklar için Sıçan Modelinin Oluşturulması: Küretaj ve Enfeksiyon

Endometriyal hasarın en yaygın patolojik sonucu olan intrauterin yapışıklıklar (IUA'lar) üreme fonksiyonunu ciddi şekilde bozar. Travma ve enfeksiyon, IUA gelişimi için anahtar risk faktörleri olarak yaygın olarak kabul edilmektedir. İki kritik yaralanma yöntemini birleştirerek IUA'ların tekrarlanabilir bir sıçan modelini başarıyla oluşturduk: mekanik küretaj ve lipopolisakkarit ile enfeksiyöz indüksiyon.

Endometriyal hasarın en yaygın patolojik sonucu olan intrauterin yapışıklıklar, IUA'lar üreme fonksiyonunu ciddi şekilde bozar. Tümör ve enfeksiyon, IUA gelişimi için anahtar risk faktörü olarak kabul edilmektedir. İki kritik patojenik mekanizmayı, küretaj ve enfeksiyonu entegre ederek IUA'ların tekrarlanabilir bir sıçan modelini başarıyla oluşturduk.

8 ila 10 haftalık, cinsel olarak olgun ve SPF koşulları altında gruplar halinde eşleşmemiş dişi SD sıçanları barındırın. Kızgınlık döngüsü aşamalarını belirlemek için sıçanlardan günlük vajinal akıntı smear alın. Slaytlar hematoksilin ile boyanır.

Östrus döneminde ameliyat yapın. Ameliyattan önce, lipopolisakkarit, LPS, tozu litre başına altı miligram konsantrasyonda PBS içinde çözün. Steril 4/0 cerrahi kesme dikişlerini 24 saat boyunca LPS solüsyonuna daldırın.

Ardından, LPS emdirilmiş dikişler hazırlamak için bunları dört santigrat derecelik bir buzdolabında saklayın. Anestezi indüksiyonundan önce, ameliyat öncesi analjezi olarak buprenorfin deri altından uygulayın. Ardından, sıçanı izofluran inhalasyonu ile uyuşturun.

Ayak parmağı sıkıştırma refleksi ile anestezi derinliğini değerlendirin. Yalnızca herhangi bir para çekme yanıtı gözlemlenmezse devam edin. Sıçanın alt karın duvarında dört santimetre artı altı santimetrelik bir alanı saç kesme makinesiyle tıraş edin.

Bölgeyi %1 povidon-iyot ve %70etanolden oluşan üç dönüşümlü fırçalama ile dezenfekte edin ve steril tek kullanımlık bir cerrahi örtü ile örtün. Kasık simfizinin üzerindeki alt karın orta hattında bir cilt kesisi yapın. Karın kasını açığa çıkarın.

Periton boşluğuna dikkatlice küçük bir kesi yapın ve kesiği uzatın. Karın organlarına yanlışlıkla zarar vermemeye özen gösterin. Mesanenin arkasındaki kasık simfizinin üzerinde yer alan iki uterus boynuzunu döndürün ve ortaya çıkarın.

Kan damarlarından kaçınırken çatallanmanın beş milimetre yukarısındaki sağ uterus boynuzlarında üç milimetrelik bir kesi yapın. Rahim kesisinden sağ boynuza bir kazıma kaşığı sokun. Rahim boşluğunu düzensiz hissedene ve iç duvar pürüzlü hale gelene kadar kazıyın.

Ön, arka, sol ve sağ olmak üzere her yönde yaklaşık 30 kez çizin. Rahim boynuzunun yönünü çizerken, rahim duvarının yırtılmasını veya delinmesini önlemek için eşit şekilde kuvvet uygulayın. Sağ uterus boynuzunun kesisinden boşluğun sonuna kadar LPS emdirilmiş dikişli düzleştirilmiş bir cerrahi iğne sokun.

Ardından, LPS dikişini tüm sağ rahim boşluğunun içinde, çatallanmanın üzerinde üç ila dört santimetre dikiş uzunluğu açıkta kalacak şekilde bırakarak iğneyi geri çekin. LPS dikişini 48 saat rahim boşluğunda bırakın. Sağ boynuz kesisini aralıklı olarak 7/0 emilebilir dikişlerle kapatın.

Sağ rahim boynuzuna da aynı şekilde davranın. Kalan endometriyal kalıntıları gidermek için periton boşluğunu steril normal salinle iyice yıkayın. Periton boşluğunu sürekli 4/0 emilebilir dikişlerle kapatın.

Cerrahi alan enfeksiyonunu önlemek için karın duvarı kasına %0.5 sefazolin sodyum solüsyonu enjekte edin. Cildi sürekli 4/0 emilebilir dikişlerle kapatın. LPS sütürünün yaklaşık iki santimetresini derinin dışına taşacak şekilde bırakın.

Sıçanların kalan dikişleri ısırmasını önlemek için, karın kesisinden bir santimetre uzakta 4/0 emilebilir dikişle cilde sabitleyin. Fazla dikiş malzemesini kesin. Laparotomi sonrası uterus boynuzları açığa çıktığında uterus yaralanması prosedürleri uygulamayın.

Periton boşluğunu steril normal salin ile yıkayın. Periton boşluğunu ve cildi 4/0 emilebilir dikişlerle kapatın. Ameliyattan iki gün sonra, ikili yaralanma grubundaki sıçanların rahim boşluğundan LPS dikişlerini nazikçe çıkarmak için forseps kullanın.

Her iki grupta da ilk ameliyattan 7 ve 14 gün sonra, sırasıyla yaklaşık iki ve dört düzenli östrus döngüsüne karşılık gelen uterusu toplayın ve inceleyin. Sıçanı izofluran ile uyuşturduktan sonra karın boşluğunu tekrar açın. Her iki rahim boynuzunu da çıkarın ve makro özellikleri değerlendirin.

Şişme, tıkanıklık, lümen daralması, yüzey pürüzlülüğü veya elastikiyet kaybı olup olmadığını gözlemleyin. Boynuzların iki taraflı simetrisini kontrol edin ve rahim boşluklarını tıkanıklık, darlık veya efüzyon açısından inceleyin. Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanan aşırı dozda izofluran inhalasyonu yoluyla sıçanlara ötenazi yapın, bu hayatta kalmayan bir ameliyat olduğu için uterus boynuzu alındıktan sonra.

Rahim boynuzlarının brüt morfolojik gözlemi. Ameliyattan yedi gün sonra, sahte ameliyat grubundaki iki taraflı uterus boynuzları, lokalize sertlik veya sıvı birikimi kanıtı olmaksızın simetrik, keskin ve elastik kalır. Buna karşılık, ikili yaralanma grubundaki bilateral boynuzlar hafif sertlik, düzensiz uterus duvar kalınlığı, fokal sertlik ve ruminal stenoz sergiler.

Ameliyattan 14 gün sonra, iki taraflı uterus boynuzları, bozulmamış simetri ve doku ile sahte operasyon grubundaki ameliyat öncesi taban çizgisiyle karşılaştırılabilir morfolojiyi korudu. Ancak ikili yaralanma grubunda her iki boynuzda da kontraktür, soluk renklenme, elastikiyette azalma ve düzensiz duvar kalınlığı görülür. Lokalize sertlik ve lümen daralması şiddetlendi.

Ameliyattan yedi gün sonra histolojik değişiklik. Sahte operasyon grubunda, HE ve Masson trikrom boyama altında endometriyal epitel, glandüler mimari ve uterus lümen morfolojisi normal uterus yapılarına çok benziyordu. Endometriyal yüzey bir dalga konturu sergiler ve bezler yuvarlak ila elips şeklindedir.

Stroma, ödem, tıkanıklık veya kanama belirtisi göstermez ve kollajen lifleri gevşek organizasyonla seyrek olarak dağılmış halde kalır. İkili yaralanma grubunda, HE boyaması altında, uterus boşluğu daralma, kısmi oklüzyon veya nekrotik debris ve lökositlerle dolma sergiler. Tek katmanlı kolumnar epitel incedir veya yoktur, yerini düz veya sıra kolumlu epitel hücreleri alır.

Endometriyal bezlerin sayısı azalır veya yoktur. Masson trikrom boyama altında, epitel alanındaki nispi azalma ile endometriyal bez sayısı azalır. Tersine, stromadaki mavi lekeli lifin miktarı artar, düzensiz bir düzenleme sergiler ve boyama yoğunluğu daha koyu görünür.

Ameliyattan 14 gün sonra histolojik değişiklik. HE ve Masson trikrom boyama altındaki sahte operasyon grubunda, sıçanların endometriyumu, ameliyattan yedi gün sonra gözlemlenenle tutarlı morfolojide önemli bir değişiklik göstermez. İkili yaralanma grubunda, HE boyaması altında glandüler ve epitelyal rejenerasyon neredeyse yoktur.

Bunun yerine, yoğun kollajen birikimi ve interstisyel fibroz gelişti, bu da intrauterin yapışıklıklara ve neredeyse tam veya tam kavite tıkanmasına yol açtı. Masson trikrom boyama altında, normal kolumnar epitel ve bezlerin yerini fibröz doku alır ve çok sayıda atrofik bez ile kendini gösteren ve bir kollajen lifi kütlesi ile çevrili intrauterin yapışıklıklar gelişir. İnterstisyel fibröz doku önemli ölçüde artar ve kolajen ameliyattan sonraki yedi günlük aşamaya kıyasla daha yoğun ve koyu görünür.

Ameliyattan 14 gün sonra, ikili yaralanma grubunda endometriyal fibrozis alan oranı, sahte operasyon grubuna göre önemli ölçüde daha yüksektir. Bulgularımız, ikili yaralanma yaklaşımının, prosedürel fizibilite ve tutarlı patolojik özelliklere sahip sıçanlarda stabil, tekrarlanabilir bir IUA modeli oluşturduğunu göstermektedir. Bu model, IUA patogenezini araştırmak ve terapötik stratejileri test etmek için pratik bir yaklaşım sağlar.