Name: Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-10-20T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 45 s
Description: Öğrenin, tavuk embriyolarını yumurtanın dışında 24 saate kadar kültürleme yöntemini. Bu teknik, erken gelişim aşamalarını incelemek ve elektroporasyon ile immünohistokimya uygulamaları yapmak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Margaret M. RHF Alkek Vakfı tarafından desteklenmiştir.

Bölüm 1: Tezgah kurmak <ol><li> Nemli odasına plastik odasında Kimwipe / GKD 2 O koyarak hazırlanır. </li><li> Falcon tüp albümin, kültür, yüzük, Dürbün ve atık bertarafı için yemekleri toplamak için bir tezgah üzerine yerleştirilir. </li><li> Kabına 1.4 lt tuzlu su ile dolu (notlara bakınız [a]). </li></ol> Bölüm 2: Embriyo tuzlu eksplante <ol><li> Yumurta, 16 saat sonra (evre 4) inkübatör kaldırılır. Yumurta kabuk forseps ile dokunarak opene. Shell adet kaldırılır. </li><li> Ince albümin Falcon tüp toplanır. Kalın albümin forseps ile kaldırılır. </li><li> Embriyo tuzlu çanak içinde plastik bir tabak içinde yer alır. Kalan albumin forseps ile temizlenebilir. </li></ol> Bölüm 3: Embriyo halka merkezli <ol><li> Yolk kesesi, embriyo yukarı bakacak şekilde forseps ile hareket ettirildiğinde. </li><li> Yolk kesesi ekvator düzeyinde veya altında kesilir. </li><li> Vitellin membran ince forseps kullanarak, hızlı bir şekilde soyulur. Vitellin membran granüler tarafında (parlak ama) yukarı bakacak şekilde aydınlatmaktadır. </li><li> Vitellin membran ince forseps kullanarak, saat camı üzerine yerleştirilir. </li><li> Ince forseps kullanarak, bir cam yüzük vitellin membran üstüne uygulanır ve embriyo ortalanır. </li><li> Vitellin membran cam halka kenarlarında kaldırdı. Montaj tuzlu çanak kaldırılır. </li></ol> Bölüm 4: kültür mikroskop altında kurulur <ol><li> Vitellin membran cam, mikroskop altında ince forseps kullanarak halka üzerinden kaldırdı. </li><li> Pasteur pipeti kullanarak, tuzlu su, dış ring kenarından kaldırıldı. </li><li> Ince makas kullanmak, aşırı vitellin membran, iç cam ring kenarından kaldırılır. Bakım pipet veya forseps ile membran delmek için alınır. </li><li> Embriyo hafifçe gevşek membranlar ve yumurta sarısı hücreleri temizlemek için tuzlu su ile durulanır. </li><li> 200 ul tuzlu su halkası (bu daha sonra transferi kolaylaştıracak) dış kenarına eklenir. </li><li> Montaj, ters bir plastik tabak ile kaplıdır. </li></ol> Bölüm 5: kültür inkübatör aktarılır <ol><li> Falcon kültürü çanak etiketlenir. </li><li> Ince albümin 2.5ml Falcon çanak altına eklenir. </li><li> Ince albümin 200μl Falcon çanak kapağın iç kenarına eklenir. </li><li> Ters çanak montaj kaldırılır. </li><li> Ince forseps kullanarak, cam halka izlemek cam kenarı boyunca slided ve Falcon çanak aktarılır. </li><li> Geri kalan tüm tuzlu su halka iç yüzeyine çıkarılır. </li><li> Falcon çanak kapağı kapalı ve mühürlü. </li><li> Montaj nemli odasında ve daha sonra inkübatöre yerleştirilir. </li><li> Embriyoların 38 ° C&#39;de 24 saat için kültür. </li></ol> Bölüm 6: Aşağıdaki kültürü, embriyo sabittir; kültür inkübatör aktarılır <ol><li> (Embriyolar in situ hibridizasyon için işlenmek üzere iseniz veya depc-PBS) fiksasyon çanak buz gibi soğuk PBS ile doludur. </li><li> Kültür inkübatör çıkartılıp hemen buz üzerinde yerleştirilir. Kültür çanak hemen buz gibi soğuk PBS / depc-PBS ile doludur. </li><li> Embriyo vitellin membran kopuk. Embriyo Pasteur pipeti küt ucunu kullanarak, fiksasyon çanak aktarılır. </li><li> Embriyo künt uçlu ince forseps kullanarak aşağı tutturulmuş. Fiksasyon çanak kapsayan PBS kaldırılır. Sabitleme eklendi [b] (notlara bakınız). </li><li> Uygulamaya bağlı olarak, embriyo 4 6-8 saat süreyle sabit ° C (Kriyostat), O / N 4 ° C (situs), ya da tüm montaj immünohistokimya RT az 1 saat. </li><li> Fiksatif buz gibi soğuk PBS / depc PBS ile kaldırılır ve değiştirilir. </li><li> In situ hibridizasyon veya immantibody boyama gibi alt uygulamalar için: sinir sistemi ve kalp, künt bir ucunu microcapillary iğne veya mikrodiseksiyon bıçak kullanarak delikli, bu daha sonraki adımda prob / antikor yakalama önleyecektir . Notlar: [a] Tuzlu oluşur: çözümü (1 lt): 121,0 g NaCl, 15.5 g KCl, 10.4 g CaCl 2 .2 H 2 O, 12,7 g MgCl 2 .6 H 2 O; B çözeltisi (1 litre) : 2.4 g Na 2 HPO 4 .2 H 2 O, 0.2 g NaH 2 PO 4 .2 H 2 O; Otoklav; Kullanmadan önce, 120 ml karıştırmak, 2700 ml H 2 O ile 180 ml ​​B. Mix [1] ; [b] Sabitleme (% 4 situs için PBS veya depc-PBS PFA) kullanımdan hemen önce hazırlanır. </li></ol> Bölüm 7: Temsilci Sonuçlar Embriyo kültür öncesinde, ilkel bir çizgi evre (HH4). Kültür dönemi sonunda, embriyo HH10 (2-3 mm uzunluğunda) geliştirilen ve kültür çanak merkezi görünür. Hücrelerden oluşan bir grup floresan DII carbocyanine etiket mümkündürSadece kültür önce (0h) ve kültür dönemi boyunca hareketini takip. Bu durumda, Hensen düğüm (HN) altındaki hücreler DII ile etiketlenir. Bu hücreler kademeli olarak gelişmekte olan Somitlerin (som) ve notokord (n) katkıda bulunmak için gösterilmiştir. <img src="/files/ftp_upload/old/903_2008_10_20_2/903_Figure-01.png" alt="" width="780" height="228" /> Bölüm 8: Sorun Giderme <table style="width: 698px; height: 241px;" border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" width="698"><tbody><tr><th> Sorun </th><th> Neden </th><th> Çare </th></tr><tr><td> Embriyo membran (adım 2) çıkıyorsa yerine sarısı ile kalır </td><td> Yumurta kalitesi zayıf </td><td> Mağaza yumurta aldıktan sonra 13 ° C; İstek taze yumurta üretilmektedir. Yumurta geliş tarihi aynı gün inkübe edin. </td></tr><tr><td> Vitellin membran slayt halka saatçilik cam aşağıdaki yerleştirme (3. adım) </td><td> Albumin kalıntıları </td><td> 2. adımda, tüm albümin eğimli forseps membran çekerek kaldırıldığını emin olun </td></tr><tr><td> Embriyo erişilemez: membran altında yatıyor (adım 4) </td><td> Membran yanlış tarafında yukarı doğru </td><td> 3. adımda, sarısı granülleri içeren membran tarafı yukarı bakacak şekilde emin olun. Parlak, cilalı yan aşağı bakmalıdır. </td></tr><tr><td> Embriyo (adım 6), tuzlu albümin / kültür sular altında </td><td> Tuzlu önce kültür halkasının içinde sol albümin /; zarı delik </td><td> 5. adımda, tuzlu / tüm albümin halkasının içinde kaldırılır olduğunu emin olun; 4. adımda, (künt sona erdi forseps kullanımı) forseps ile delmek membran yok emin olun </td></tr><tr><td> Embriyo aşağıdaki kültür parçalandı </td><td> Bakteriyel enfeksiyon </td><td> Antimikotik / antibiyotik tüm alet ve cam sterilize; kullanın. </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Pannett, P. A., Compton, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cultivation+of+tissues+in+saline%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">The cultivation of tissues in saline.</a> Lancet. 206, 381-384 (1924).</li>
<li>New, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+the+cultivation+of+the+chick+embryo+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morph%22%5BJournal%5D)">A new technique for the cultivation of the chick embryo in vitro.</a> J. Embryol. Exp. Morph. 3, 326-331 (1955).</li>
<li>Alvarez, I. S., Araujo, M., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+induction+in+whole+chick+embryo+cultures+by+FGF%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neural induction in whole chick embryo cultures by FGF.</a> Dev. Biol. 199, 42-54 (1998).</li>
<li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen%27s+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li>
<li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fates+and+migratory+routes+of+primitive+streak+cells+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Fates and migratory routes of primitive streak cells in the chick embryo.</a> Development. 122, 1523-1534 (1996).</li>
<li>Voiculescu, O., Papanayotou, C., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+and+temporally+controlled+electroporation+of+early+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">Spatially and temporally controlled electroporation of early chick embryos.</a> Nature Protoc. 3, 419-426 (2008).</li>
</ol>

Yeni kültür yöntemi 2 büyüme faktörü tüm montaj boncuk 3, in situ hibridizasyon ve tüm montaj immünohistokimya 4 içeren greftleri arasında değişen çok çeşitli uygulamalar için de kullanılabilir. 24 saatlik süre içinde Kültür embriyonik gelişim zaman atlamalı hücre hareket analizi 5 veya GFP 6 electroporated yapıları içeren izleme gibi uygulamalar sürekli olarak izlenmesini sağlar.

<table><tbody><tr><td>Yumurtalar</td><td>Hayvan</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Üstün Doğurganlık</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Mikroskop</td><td>Leica Microsystems</td><td>MZ9.5 veya benzeri</td><td></td></tr><tr><td>Marsh Otomatik İnkübatör</td><td>Araç</td><td>Lyon</td><td>RX</td><td></td></tr><tr><td>Hibritleme İnkübatörü</td><td>Araç</td><td>Robbins Scientific, SciGene</td><td>M1000</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex kap (2)</td><td>Araç</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Saat ustası&amp;rsquo;50 mm cam</td><td>Araç</td><td>VWR international</td><td>66112-060</td><td></td></tr><tr><td>Cam halkalar</td><td>Araç</td><td>Fiziksel Tesis Yönetimi</td><td></td><td>(27 mm dış çap, 25 mm iç çap) cam tüpten 4 mm kalınlığında kesitler kesin. Hassas polisaj yapmayın.</td></tr><tr><td>Kavisli Pens (1)</td><td>Cerrahi</td><td>Elektron Mikroskopisi Bilimleri</td><td>72991-4C</td><td></td></tr><tr><td>Penset (2)</td><td>Cerrahi</td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-13</td><td>Bileme taşı ve 100 µl mineral yağ kullanılarak köreltilmiştir</td></tr><tr><td>Bileme Taşı Dan&amp;rsquo;s Siyah Arkansas</td><td>Cerrahi</td><td>Elektron Mikroskobi Bilimleri</td><td>62082-00</td><td></td></tr><tr><td>Hassas makaslar</td><td>Cerrahi</td><td>Fine Science Tools</td><td>14161-10</td><td></td></tr><tr><td>Plastik kaplar</td><td>Araç</td><td>Falcon BD</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>Kauçuk Pompa</td><td>Araç</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>70980</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur Kılcal Pipeti</td><td>Araç</td><td>Elektron Mikroskopisi Bilimleri</td><td>70950-12</td><td>alev altında kenarı yuvarlatma</td></tr><tr><td>Mikrokapiler tüp</td><td>Cerrahi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1049-1PAK</td><td>Dikey mikropipet çekicisi kullanılarak çekin; ince pens ile küt uç oluşturun</td></tr><tr><td>Mikrodissection bıçağı</td><td>Cerrahi</td><td>Fine Science Tools</td><td>10056-12</td><td>In situ hibridizasyon öncesinde boşlukları delmek için kullanın</td></tr><tr><td>0,2 mm çapında minuten pinleri</td><td>Cerrahi</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikon Elastomer Kürleyici Ajan ve Baz</td><td>Reaktif</td><td>Dow Corning</td><td>0001986475</td><td>1 ölçü Kürleme Ajanı ile 9 ölçü Bazı karıştırın; 37°C'de gece boyunca (O/N) bekletin</td></tr><tr><td>Dietilpirokarbonat (depc)</td><td>Reaktif</td><td>Acros Organics</td><td>10025025</td><td>1 L PBS'ye 1 ml DEPC ekleyin; çalkalayın; otoklavlayın</td></tr></tbody></table>

erken civciv embriyolar ex vivo (kültür) kültür yöntemi

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Civciv embriyo erken embriyonik gelişim çalışmaya değerli bir araçtır. Şeffaflığı, erişilebilirliği ve kolay manipülasyon, bu oluşumu ve beyin, nöral tüp, hücre gruplarının ve kalp primordia desenlendirme eğitimi için ideal bir araçtır. Uygulamaları civciv embriyo kültürü, in situ hibridizasyon ve immünohistokimya, gen fonksiyonu, FGFs ve BMP gibi büyüme faktörü kaplı boncuklar greft yanı sıra tüm montaj analiz etmek için DNA veya RNA yapıları elektroporasyon içerir. Bu video civciv embriyo kültürü farklı adımları gösteriyor; İlk olarak, embriyo tuzlu su eksplante. Sonra, embriyo bir cam yüzük ortalanır. Embriyo çevreleyen zarların halka duvarları boyunca kaldırılır. Bu halka daha sonra, albümin bir havuzun bulunduğu bir kültür tabak içinde yer alır. 24 saat kadar embriyo kültür olduğu kültür çanak, kapalı ve nemli odasında yerleştirilir. Son olarak, embriyo, ring kaldırılır, sabit ve başka uygulamalar için işlenmiş. Bir sorun giderme kılavuzu da sunulmaktadır.

Bu video Yeni kültür, civciv embriyolarının 24 saat kadar yumurta dışında kültür olan bir yöntem gösteriyor. Bu yöntem, erken gelişme (14 som ilkel bir çizgi.) Fare E7-9 karşılık gelen bir süre çalışma sağlar. In situ hibridizasyon ve immünohistokimya, bu tekniğin Uygulamaları elektroporasyon içerir.

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

Tavuk embriyosu, erken embriyonik gelişim çalışmalarında değerli bir araçtır. Şeffaflığı, erişilebilirliği ve manipülasyon kolaylığı, onu ...

Bu prosedür, yumurtanın kabuğundan ayrılmasıyla başlar. Vitellüs kesesi yumurta çevresinden kesilir ve membran soyulup bir saat camı üzerine yerleştirilir. Embriyonun üzerine bir halka yerleştirilir.Vilin membranı halkanın üzerine kaldırılır. Embriyo bir kültür kabına aktarılır. Kültür kabı, bir inkübatöre yerleştirilen kültür kutusuna aktarılır ve embriyo kültüre edilir.Merhaba, ben Houston'daki Texas A&amp;M Üniversitesi Çevresel ve Genomik Tıp Merkezi'nden Delphine. Bugün size, civciv embriyolarının yumurta dışında kültüre edilmesi prosedürünü göstereceğiz. Laboratuvarda bu prosedürü, antiepileptik ilaçların civciv embriyosundaki nöral gelişim üzerindeki etkilerini incelemek için kullanıyoruz.Öyleyse başlayalım. Bu embriyo kültürü protokolü, nemlendirilmiş bir inkübatörde yan tarafları üzerine 16 saat boyunca inkübe edilmiş ve Hamburger ve Hamilton evre dört aşamasına ulaşmış yumurtalarla başlar.Başlamak için, pensle kabuğa hafifçe vurarak ve kabuğun çevresindeki parçaları temizleyerek yumurtayı açın. HH 4 evresinde kabuğun üst kısmını çıkarın ve atın. Embriyo, belirgin bir primitif çizgiye sahiptir ve yaklaşık iki milimetre uzunluğundadır; armut şeklinde bir zona lucida ile çevrilidir.Alt kabuğu yan yatırarak ince albümini toplayın. Ardından kalın albümini pens yardımıyla uzaklaştırın. Embriyoyu, panic compton saline içeren Pyrex kabın içindeki plastik bir kaba yerleştirin.Son olarak, kalan albümini pensetle temizleyin. Artık embriyo, bir halka üzerine merkezlenmeye hazırdır. Bir sonraki adım, embriyoyu bir halka üzerine yerleştirmektir.Bunu yapmak için önce ince uçlu makas kullanarak embriyo yukarı bakacak şekilde vitellus kesesini eğin. Vitellus kesesini ekvator seviyesinden veya daha aşağıdan kesin. Vitellin membranı pens yardımıyla hızla soyun.Membranı, granüllü veya parlak olmayan tarafı yukarı bakacak şekilde yönlendirin. Membranı saat camının üzerine yerleştirin. Ardından, vilin membranının üzerine bir cam halka yerleştirin ve embriyoyu merkezleyin.Son olarak, membranı cam halkanın kenarlarından yukarı kaldırın. Bu düzeneği salin kabından çıkarın. Ardından, kültürü hazırlama işlemini tamamlamak için düzeneği bir mikroskoba transfer edin.Embriyo kültürü, bir diseksiyon mikroskobu altında izlenerek kurulur. İnce pensler kullanarak villin membranının cam halka üzerine sıkıca kaldırıldığından emin olun. Cam halkanın iç kenarındaki fazla villin membranını kesin.Pipet veya pensle membranı delmemeye dikkat edin. Ardından, halkanın dış kenarındaki salini steril bir pastör pipetiyle uzaklaştırın. Embriyoyu salin çözeltisiyle nazikçe yıkayın.Yumurta hücrelerini ve gevşek membran materyalini uzaklaştırmak için halkanın dış kenarına 200 µL salin ekleyin. Bu işlem, kültür kabına aktarımı kolaylaştıracaktır. Son olarak, düzeneğin üzerini ters çevrilmiş bir Falcon 35 mm kültür kabı ile kapatın.Artık embriyo kültüre edilmeye hazırdır. Embriyonun kültürüne başlamak için, 35 milimetrelik bir Falcon kültür kabına 2,5 litre ince albümin ekleyin. Ardından, kültür kabının kapağının iç kenarına 200 mikrolitre ince albümin ekleyin.Hassas pensler kullanarak kültür odası sızdırmaz hale getirilecek ve embriyonun susuz kalması önlenecektir. Cam halkayı saat camının kenarı boyunca kaydırarak embriyonun üzerini açın ve düzeneği kültür kabına aktarın. Halkanın iç yüzeyindeki tüm kalıntı salini bir Pasteur pipeti ile temizleyin.Kabı bir kapakla kapatın ve embriyoyu nemlendirilmiş bir hazneye yerleştirin. Embriyo, 38 °C'de 24 saate kadar kültüre edilebilir. Embriyo 24 saat boyunca kültüre edildikten sonra, paraformaldehit ile fikse edilebilir.Eşlik eden videoda açıklanan in situ hibridizasyon gibi diğer prosedürler için, kültürü inkübatörden çıkarın ve hemen buz üzerine yerleştirin. Embriyolar in-situ hibridizasyon için işlenecekse, kültür kabını buz gibi soğuk PBS veya desy PBS ile doldurun. Bir penset yardımıyla embriyoyu vilin membranından ayırın.Bir pastör pipetinin küt ucunu kullanarak, embriyoyu buz üzerinde bekletilen soğuk PBS veya desy PBS içeren temiz bir kültür kabına aktarın. Embriyoyu küt uçlu pensle sabitleyin ve kaptaki PBS'yi aspire edin.Taze hazırlanmış buz gibi soğuk fiksatif paraformaldehit ekleyin. Paraformaldehit oldukça toksiktir; bu nedenle bu adımlar koruyucu gözlük ve eldivenle bir kimyasal çeker ocak içerisinde gerçekleştirilmelidir.Fiksasyon süresi ve sıcaklığı, in situ hibridizasyon için kullanılacak uygulamaya bağlı olarak değişecektir. Kriyoseksiyon için dört derece Celsius'ta gece boyunca fiksasyon yapın. Tüm tutum immünohistokimya (whole mount immunohistochemistry) için dört derece Celsius'ta altı ila sekiz saat boyunca fiksasyon yapın.Uygun süre boyunca tespit işleminden sonra, oda sıcaklığında bir saat boyunca bekletin, ardından tespit çözeltisini uzaklaştırın ve kimyasal atık olarak uygun şekilde imha edin. Daha sonra kabı buz gibi soğuk PBS veya dey PBS ile doldurun. Eğer embriyo, whole mount in situ hibridizasyon veya immün boyama için kullanılacaksa, baş ve kalp bölgesinin bir iğne veya mikrodissection bıçağı ile delinmesi uygundur.Bu işlem, sonraki adımlarda bu yapıların prob veya antikor tutmasını önleyecektir. Embriyoların fiksasyonu prosedürünü tamamladığımıza göre, bu kültür sisteminin kültür öncesinde in vitro hücre göçlerini izlemek için nasıl kullanılabileceğine bir bakalım; embriyo, primitif çizgi aşamasındadır. Kültür süresinin sonunda, embriyo HH 10 evresine gelmiş, iki ila üç milimetre uzunluğa ulaşmış ve kültür kabının merkezinde görünür hale gelmiştir.Kültürden hemen önce bir grup hücreyi floresan boya olan carbo zanine ile işaretlemek ve kültür boyunca hareketlerini takip etmek mümkündür. Bu durumda, henson düğümünün altındaki hücreler Dai ile işaretlenmiştir. Bu hücrelerin, aşamalı olarak gelişen somitlere katkıda bulunduğu gösterilmiştir.Tavuk embriyosu köklerinin yumurta dışında nasıl kültüre edileceğini az önce göstermiş olduk. Bu prosedürü uygularken, embriyonun oda sıcaklığıyla temasını en aza indirmek için mümkün olduğunca hızlı çalışmayı hatırlamak önemlidir. İşte bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

method-for-culture-of-early-chick-embryos-ex-vivo-new-culture

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Civciv chorioallantoic membran (CAM), anjiyogenez ve tümörogenez çalışmak için eşsiz bir doğal bağışık yetmezliği olan, destekleyici bir kültür ortamı. Bu video makale piliç farklı adımları gösteriyor.

Civciv Ex ovo Kültür ve Ex ovo CAM Testi: Gerçekten Nasıl Çalışır?

Bu makalede, biz uzun vadeli sağlamak için basit bir yöntem...

Bir Eski-ovo</emGörüntüleme ve Mikrocerrahi Uygulamaları için uygundur> Tavuk Embriyo Kültürü Sistemi

Erken Civciv Embriyo morfogenetik Doku deformasyonlar Takibi

Gelişim sırasında tavuk embriyosunu görüntülemek ve ona erişmek zor olabilir. Basit, uygun maliyetli ve bir sınıfta veya araştırma ortamında kolayca kullanılabilecek bir ex ovo yöntemi geliştirdik. Bu yöntem, embriyonik gelişimin geç aşamalarına kadar embriyoya erişim sağlar (HH 40).

Optimize Ex-ovo Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi

Burada, iletilen ışık ve floresan mikroskobu kullanarak hızlandırılmış görüntüleme için civciv embriyolarını ex ovo kültürlemek için yeni bir teknik sunuyoruz. Batık filtre kağıdı sandviçi, sıvı bir kültür ortamına tamamen batırılmış civciv embriyolarının kültürlenmesine izin veren, iyi bilinen filtre kağıdı taşıyıcı tekniğinin1 bir çeşididir.

Uzun vadede bir Batık Filtre Kağıdı Sandviç Ex Ovo Time-lapse Görüntüleme

Burada, embriyonik tavuk organları büyümeye Protokolü kültür bir organotypic mevcut tüp bebek. Bu yöntemi kullanarak, embriyonik tavuk doku gelişimi, kültür ortamı üzerinde kontrol yüksek derecede korunarak okudu.

Embriyonik tavuk doku gelişimi çalışmaya Organotypic kültür yöntemi

Bu, kanser metastazının baskılayıcılarını veya sürücülerini taramak için etkili bir yöntemdir. Bir ifade kütüphanesi ile transdüklenen hücreler, metastatik koloniler oluşturmak için tavuk chorioallantoic membran vaskülatürüne enjekte edilir. İnvazivliği azalmış veya artmış koloniler, fenotiplerini doğrulamak için ekscised, genişletilmiş, reenjected ve son olarak, yüksek verim sıralaması kullanılarak analiz edilir.

Hızlı ve Nicel Intravital Chick Chorioallantoic Membran Modeli Kullanılarak Metastatik Regülatörlerin Keşfi

Tam embriyo kültürü için geliştirilmiş bir platform, pregastrülasyon aşamalarından ileri organogenezine kadar altı güne kadar postimplantasyon fare embriyolarının sürekli ve sağlam ekstre gelişimini sağlar. Bu protokolde statik plakalar ve dönen şişe sistemleri kullanılarak başarılı embriyo kültürü için standart prosedürü detaylandırıyoruz.

Ex Utero Pregastrülasyondan İleri Organogenez'e Fare Embriyolarının Kültürü

Bu protokol, civciv embriyo nörülasyonu sırasında nöral plak dokusunun mekanik özelliklerini uzunlamasına izlemek için geliştirilmiştir. Bir Brillouin mikroskobu ve bir sahne inkübasyon sisteminin entegrasyonuna dayanır ve ex ovo kültürlenmiş civciv embriyolarında nöral plaka dokusunun canlı mekanik görüntülemesini sağlar.

Civciv Embriyosunun Nöral Tüp Kapanması Sırasında Dokunun Mekanik Gelişiminin İzlenmesi

Bu yöntem, tavuk embriyosunu, bakteriyel patojen L. monocytogenes'i yaşayabilir ancak kültürlenemeyen (VBNC) bir durumdan canlandırmak ve bakteri uyku hali mekanizmalarının anlaşılmasında potansiyel olarak daha fazla kullanım sağlamak için basit ve uygun maliyetli bir in vivo model olarak göstermektedir.

Canlı Ancak Kültürlenemeyen Patojenleri Canlandırmak için İn Vivo Model Olarak Tavuk Embriyosu

Öğrenin, tavuk embriyolarını yumurtanın dışında 24 saate kadar kültürleme yöntemini. Bu teknik, erken gelişim aşamalarını incelemek ve elektroporasyon ile immünohistokimya uygulamaları yapmak için kullanılır.

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

Daha fazla video keşfet