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유전자 변형 식품 검사

Overview

출처: 마가렛 노동자와 킴벌리 프라이의 실험실 - 데폴 대학

식품의 유전자 변형은 건강과 환경 안전에 대한 논쟁적인 문제로 인해 논란의 여지가있는 문제였습니다. 이 실험은 식품 DNA가 유전적으로 식별되는 방법의 기술적 이해를 보여 주며, 식품 공급에서 유전자 변형 생물 (GMO)을 사용하는 안전성과 잠재적 위험에 대한 교육 된 의사 결정을 허용합니다.

폴리머라제 연쇄 반응(PCR)은 식품에서 유전자 변형 DNA의 존재를 테스트하기 위해 식품 DNA를 증폭시키는 데 사용됩니다. 특정 DNA 밴드의 존재는 젤 전기 포이를 사용하여 추출 된 식품 DNA를 3 % 아가로즈 젤을 통해 당겨서 검출되며, 유전자 변형 DNA를 포함하는 DNA의 밴드를 분리 할 만큼 밀도가 높다. 몇몇 통제는 DNA가 시험 식품 (식물 프라이머)에서 성공적으로 추출되는지 확인하고, 유전자 변형 DNA (구입한 유전자 변형 DNA) 및 비 유전자 변형 DNA (인증된 비 GMO 음식 통제)의 알려진 예를 제공하기 위하여 전기 전구 절차에서 이용됩니다.

Principles

폴리머라제 연쇄 반응(PCR)은 GM 공장에 삽입된 DNA의 서열을 식별합니다. 단백질과는 달리, DNA는 상대적으로 안정된 분자이기 때문에 DNA 단편은 고도로 가공된 제품으로부터 분리될 수 있고 PCR에 의해 증폭될 충분히 온전합니다. 유전 엔지니어는 소수의 규제 서열(프로모터 및 터미네이터 서열)만 사용하여 삽입된 유전자의 발현을 제어하므로 이러한 서열은 대부분의 GM 작물에 공통적입니다. 이 절차에서 확인된 2개의 순서는 가장 일반적인 규정 서열의 2개, 콜리플라워 모자이크 바이러스(CaMV)에서 35S 프로모터 유전자 및 아그로박테리움 tumefaciens에서노팔린 신체(NOS) 종점 유전자이다.

PCR은 Taq DNA 폴리머라제에 의한 템플릿 데니션, 프라이머 어닐링 및 아닐프라이머의 확장으로 구성된 반복적인 주기를 포함한다. DNA가 음식에서 추출되면 열 사이클러가 온도를 빠르게 조작하여 PCR 주기의 단계를 일으킵니다.

데마스팅 단계는 샘플이 빠르게 94°C로 가열되어 DNA 가닥이 분리될 때 발생합니다. 59°C로 의 빠른 냉각을 통해 프라이머는 분리된 DNA 가닥에 대한 음막이 끝난 다음 Taq DNA 폴리머라제에 대해 72°C로 재가열하여 프라이머를 확장하여 각 DNA 가닥의 완전한 복사본을 만들고 하나의 열 주기를 완료합니다.

증폭된 DNA는 35S 프로모터 유전자 및 NOS 종기의 식별을 위해 DNA를 가시밴드로 분리하기 위해 전기전구를 가진 아가로즈 젤을 통해 실행될 수 있다. 증폭된 DNA는 주변 완충제로 용해되는 것을 방지하기 위해 시료를 계량하는 데 도움이 되는 구입한 적재 염료를 사용하여 젤의 한쪽 끝에 우물에 적재됩니다. 로딩 염료는 또한 시각을 제공하므로 염료 "전면"에서 전기 포근 중에 DNA의 움직임을 볼 수 있습니다. 전기 전도 공정은 음극과 양극 끝으로 분리 된 전류를 사용하여 작동합니다. DNA는 챔버의 음극 측에 가장 가까운 끝에 겔내로 로드되고, DNA의 음전하는 챔버의 양극 끝에 끌리고 아가로즈를 통해 당겨집니다. DNA의 더 큰 서열 (기본 쌍의 증가 수)는 아가로즈를 통해 쉽게 움직일 수 없으며 더 작은 서열이 양극 끝으로 젤 아래로 더 멀리 이동할 수있는 동안 일찍 분리됩니다.

염색 과정은 결과의 더 나은 시각화를 위한 배경 젤과 DNA의 은행 사이 대조를 추가하기 위하여 DNA에 결합하는 것을 돕습니다. DNA 서열의 상이한 크기에 대해 공지된 위치를 사용하여 각 시험 젤은 35S 프로모터 및 NOS 터미네이터 유전자의 존재 또는 부재를 위해 분석될 수 있다.

대조는 DNA가 제대로 추출되고 시험 식품 샘플에 대한 비교를 제공하기 위해 사용됩니다. 구입한 식물 프라이머는 모든 식물에 공통되는 핵산을 제공하기 위해 각 샘플에 첨가됩니다. 이것은 DNA 추출 프로세스에 질 관리 검사를 허용합니다, 추출된 어떤 심소 DNA든지 PCR 도중 이 프라이머로 확장되어야 하고 전기포고가 완료된 후에 젤에서 또한 보아야 하기 때문에. 35S 및 NOS 유전자에 대 한 구입 된 프라이머 는 유전자 수정을 위한 젤에 DNA 밴드를 제공 하는 긍정적인 제어로 사용 됩니다. GMO 양성 템플릿 컨트롤이 증폭되지 않으면 PCR 반응에 문제가 있으며 테스트 식품의 GMO 음수 결과를 신뢰할 수 없습니다. 인증된 비-GMO 식품도 구입하여 유전자 변형 물질이 없을 때 DNA 분리가 어떻게 보이는지 보여주는 부정적인 대조군으로 사용됩니다.

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Procedure

1. 식품 샘플에서 DNA 추출

  1. 이전 파이프 또는 200-1,000L 조절 가능한 볼륨 마이크로파이프를 사용하여 구입한 PCR 믹스 매트릭스 500 μL을 2개의 스크류 캡 튜브에 추가합니다. 각 알리쿼트 사이의 파이펫을 위아래로 피펫하여 PCR 매트릭스를 고르게 혼합합니다.
  2. 나사 캡 튜브 "비 GMO"와 다른 "테스트"에 레이블을 지정합니다.
  3. 인증된 비GMO 식품의 0.5 g를 계량하여 박격포에 넣습니다.
  4. 증류수 2.5mL를 넣고 유봉으로 2분 동안 갈아서 슬러리를 만드시다.
  5. 증류수 2.5mL를 추가한 후 슬러리가 파이프에 충분히 부드러워질 때까지 유봉으로 계속 연마합니다.
  6. 50 μL의 PCR 프리믹스를 포함하는 나사 캡 튜브에 대한 파이펫 50 μL은 졸업된 파이프에 50 μL 마크를 사용하여 "비-GMO"라고 표시합니다. 요약 튜브.
  7. 테스트 식품 샘플을 준비하기 위해 1.3-1.6 단계를 반복합니다.
  8. "테스트"라고 표시된 나사 캡 튜브에 대한 지상 테스트 식품 슬러리의 파이프 50 μL. 요약 튜브.
  9. 비GMO 식품 및 테스트 식품 PCR 튜브를 1 분 동안 소용돌이시키고 95 °C 수조에 튜브를 5 분 동안 배치합니다. 소용돌이가 없는 경우 튜브를 여러 번 섞어 수조에 넣습니다.
  10. 원심분리기에 튜브를 5분 간 배치합니다. 단단한 펠릿은 튜브의 바닥에 형성되어야합니다. 펠릿이 5분 후에 형성되지 않으면, 펠릿이 형성될 때까지 2분 간격으로 원심분리기를 다시 한 번 분리합니다.
  11. 튜브는 PCR에 즉시 사용하거나 최대 1 주일 동안 냉장고에 저장할 수 있습니다.

2. PCR 반응 설정

  1. 번호 PCR 튜브 1-6 을 초기. 숫자는 표 1에나열된 다음 튜브 내용에 해당해야 합니다.
  2. 표지된 각 PCR 튜브를 마이크로튜브 홀더에 놓고 캡을 열어 놓습니다.
  3. 각 추가에 대한 신선한 팁을 사용하여 각 PCR 튜브에 표 1에 표시된 프라이머의 20 μL을 추가합니다. 캡 튜브.
  4. 각 튜브에 대한 신선한 팁을 사용하여 표 1에 표시된 DNA 샘플의 20 μL을 각 PCR 튜브에 추가하여 수퍼나탄에서만 파이펫을 피하고 튜브 바닥의 고체 펠릿을 피하십시오.
  5. 각 DNA 샘플이 해당 PCR 튜브로 파이펫화된 후 파이펫을 사용하여 DNA와 프라이머를 부드럽게 위아래로 피펫하여 혼합합니다. 요약 튜브.
  6. PCR 튜브를 열 사이클러에 배치하고 다음을 위한 사이클러를 프로그래밍합니다.
    초기 자연: 2 분 동안 94 °C에서 1 사이클.
    증폭: 94°C에서 1분(변성), 59°C1(아닐링), 2분 동안 72°C(확장).
    최종 연장: 10 분 동안 72 °C에서 1 사이클.
    보류: 4°C 무기한.

3. 아가로즈 젤 제제 3%

  1. 실험실 또는 마스킹 테이프를 사용하여 젤 트레이의 열린 끝을 단단히 테이프로 고정하십시오. 테이프가 트레이의 가장자리에 밀봉되어 용융 아가로즈가 누출되는 것을 방지합니다.
  2. 250mL 또는 더 큰 에를렌마이어 플라스크에 아가로즈 3 g의 무게를 내세요.
  3. 1x TAE 버퍼 100mL(농축액에서 구입 또는 준비)를 추가합니다.
  4. 교반바가 있는 마그네틱 핫 플레이트를 사용하여 아가로즈가 버퍼에 완전히 녹고 용액이 끓어오르고 선명해질 때까지 비커를 가열합니다. 또는 전자 레인지는 비커를 오븐에 넣고 30 년대 간격으로 가열하여 볶음 봉을 사용하여 10 s를 혼합하고 혼합물이 끓고 투명해질 때까지 반복하여 사용할 수 있습니다.
  5. 50mL Erlenmeyer 플라스크를 250mL 플라스크의 개구부로 되돌리면 역류역할을 하여 아가로즈 용액이 증발하는 것을 방지합니다.
  6. 아가로즈 용액을 60°C로 식히고 30-50mL를 각 테이프젤 트레이에 붓도록 하십시오.
  7. 젤 빗을 첫 번째 노치에 넣어 젤 웰을 만듭니다.
  8. 테이프와 빗을 제거하기 전에 젤을 완전히 식힙니다. 젤은 약 10-20 분 준비되면 고체화되고 맑고 흐린 것으로 바뀝니다.

4. PCR 제품의 전기 전광

  1. 미리 만들어진 3% 아가로즈 젤을 젤 트레이에 놓거나 3% 아가로즈 젤을 캐스팅하는 데 사용된 젤 트레이를 사용한다.
  2. 음극 (검은) 끝에 가장 가까운 우물과 전기 전광 챔버에 젤 트레이를 밀어 넣습니다.
  3. 1x TAE 버퍼를 챔버에 붓고 겔 트레이 의 상단 위에 2mm의 버퍼를 가질 수 있습니다.
  4. 열 사이클러에서 PCR 튜브를 얻고 마이크로튜브 홀더에 배치합니다.
  5. 매번 신선한 파이펫 팁을 사용하여 구입 한 오렌지 G 로딩 염료 (LD)의 10 μL을 각 샘플에 추가하고 잘 섞습니다.
  6. 분자량 눈금자의 20 μl및 각 시료의 20 μL을 겔내로 적재(표2).
  7. 젤 전기 전도를 100 V에서 30 분 동안 실행하십시오.
  8. 챔버에서 젤 트레이를 제거하고 젤을 밀어 트레이에서 제거합니다. 염색 트레이에 젤을 놓습니다.
  9. 구입 한 DNA 젤 얼룩에 젤을 5 분 동안 담그고 조심스럽게 트레이를 흔들어 젤 전체에 얼룩을 분배합니다.
  10. 젤을 세척 용기에 옮기고 약 10s의 수돗물(40-55°C)으로 헹구는 다.
  11. 따뜻한 수돗물로 3배 씩 씻아 6분 간 부드럽게 흔들어 최상의 결과를 만들어 보입니다. 필요한 경우 원하는 대비에 도달할 때까지 따뜻한 물에 계속 유색하십시오.
튜브 번호 입문서 DNA 샘플
1 20 μL 식물 프라이머 (녹색) 20 μL 비 GMO 식품 제어 DNA
2 20 μL GMO 프라이머(빨간색) 20 μL 비 GMO 식품 제어 DNA
3 20 μL 식물 프라이머 (녹색) 20 μL 테스트 식품 DNA
4 20 μL GMO 프라이머(빨간색) 20 μL 테스트 식품 DNA
5 20 μL 식물 프라이머 (녹색) 20 μL GMO 양성 대조군 DNA
6 20 μL GMO 프라이머(빨간색) 20 μL GMO 양성 대조군 DNA

표 1. 적절한 튜브 번호, 프라이머 및 DNA 샘플 목록입니다.

웰 1 식물 프라이머 20 μL을 가진 비 GMO 식품 제어 샘플 1.
웰 2 샘플 2 GMO 프라이머 20 μL을 가진 비 GMO 식품 제어.
음 3 식물 프라이머 20 μL로 음식을 시험하는 3 샘플 3.
음 4 샘플 4 GMO 프라이머 20 μL로 음식을 테스트합니다.
웰 5 식물 프라이머 20 μL을 가진 5 GMO 양성 DNA를 샘플링합니다.
음 6 GMO 프라이머 20 μL을 가진 6 GMO 양성 DNA.
음 7 PCR 분자량 눈금자 20 μL.
웰 8 비워 둡니다.

표 2. 분자량 눈금자의 20 μL 및 각 시료의 20 μL을 젤에 적재하는 적절한 순서입니다.

유전자 변형 식품은 DNA가 특별히 변경된 성분이나 성분을 함유한 제품입니다. 이러한 수정의 존재는 중합효소 연쇄 반응이라고 하는 기술을 사용하여 검출될 수 있다.

식품의 유전자 변형은 건강과 환경 안전에 대한 논쟁적인 문제로 인해 논란의 여지가있는 문제였습니다. 관심있는 음식 견본에서 유전으로 변경된 DNA를 검출하는 기능은 음식 공급에 있는 유전자 변형한 유기체, 또는 GMO의 를 사용하는 의 안전 그리고 잠재적인 위험에 관하여 교육된 결정을 허용합니다.

폴리머라제 연쇄 반응, 또는 PCR은, 유전자 변형 서열의 존재 또는 부재를 결정하기 위하여 음식 DNA를 증폭하기 위하여 이용됩니다. 젤 전기전광은 그런 다음 아가로즈 젤 매트릭스를 통해 증폭된 DNA를 당기고 변형 또는 비수정 마커에 해당하는 다양한 크기의 DNA 밴드를 분리합니다. 이들은 그 때 GMO를 포함하는 것으로 알려져 있는 음식에서 대조밴드에 비교됩니다, 또는 자유로운 수정으로 알려.

이 비디오는 식품 샘플에서 유전자 변형 된 DNA를 검출하는 뒤에 원리를 설명합니다, DNA를 추출하고 유전자 변형 과정에서 사용되는 마커를 증폭하는 방법, 어떻게 식품 샘플에서 GMO의 존재 또는 부재를 확립 할 수 있는지.

폴리머라제 연쇄 반응은 유전자 변형 식품에 삽입된 DNA의 서열을 식별합니다. DNA는 비교적 안정적인 분자이므로 증폭에 적합한 실행 가능한 DNA 단편은 옥수수 칩이나 채소 버거와 같은 고도로 가공된 제품에서도 격리될 수 있습니다.
소수의 규제 DNA 서열은 삽입된 유전자의 발현을 제어하는 데 사용되므로 이러한 서열은 대부분의 GM 작물에 존재합니다. 이 절차는 가장 일반적으로 사용되는 두 가지, 35S 프로모터 유전자 및 노팔린 신차스 터미네이터 유전자를 식별합니다. 35S 서열은 강력한 프로모터이며 삽입된 유전자에 부착하면 일정하고 높은 수준의 발현을 구동합니다. 노팔린 신타제 터미네이터는 원하는 종점에서 삽입된 유전자의 전사를 중지하도록 포함된다.

PCR에는 PCR 반응 튜브의 온도를 단단히 제어하는 장치인 열 사이클러에서 반복적인 가열 및 냉각 사이클이 포함됩니다. 샘플을 94°C로 가열하면 DNA 가닥이 변성을 일으키고 분리됩니다. 45~65°C 사이로 빠르게 냉각하면 프라이머가 분리된 DNA 가닥에 대한 음막이 가능해줍니다. 마지막으로, 72°C로 재가열하면 Taq 폴리머라제 효소가 프라이머를 확장하고 대상 영역의 완전한 복제를 할 수 있게 한다.

구입한 식물 프라이머는 각 샘플에 첨가되며 식물 DNA를 함유한 시료에서 증폭됩니다. 35S 및 NOS용 GMO 양성 템플릿은 GMO에 대한 긍정적인 제어를 제공하는 데 사용됩니다. 인증된 비GMO는 음수 제어로 사용됩니다. 이러한 제어 반응 중 에서 예기치 않은 대역이 표시되면 테스트 샘플의 결과를 신뢰할 수 없습니다.

증폭된 DNA는 전기전도에 의한 아가로즈 젤을 통해 실행됩니다. PCR 제품은 염료와 혼합되어 우물에 로드됩니다. DNA는 음전하되고, 챔버의 음극 끝에 젤에 적재될 때 전류가 적용될 때 양극 끝으로 이동한다. 더 큰 DNA 단편은 젤 매트릭스를 통해 쉽게 움직일 수 없으므로 음극에 더 가깝게 유지될 것이며, 작은 시퀀스는 양극 끝으로 이동하여 서로 다른 크기의 DNA를 서로 다른 밴드로 분리합니다.

전기 전구 후, 젤 염색은 분리 된 DNA 밴드를 시각화하는 데 도움이됩니다.

이제 우리는 GMO 검출의 원리와 GMO 식별을위한 PCR 및 전기 전도의 사용에 대해 잘 알고 있으므로 실험실에서 이 작업을 수행 할 수있는 방법을 살펴 보겠습니다.

관심 있는 식품이 확인되면 분석이 시작될 수 있습니다. DNA를 추출하려면 두 개의 깨끗한 스크류캡 튜브를 가져 가서 구입한 DNA 격리 시약의 500 μL을 각각 전달하여 시약을 고르게 혼합하기 위해 알리쿼트 사이에 혼합물을 위아래로 피펫해야합니다. 튜브 중 하나를 "비 GMO", 다른 "테스트"라고 표시합니다.

다음으로, 인증된 비GMO 식품의 0.5g을 계량하고 깨끗한 박격포에 넣습니다. 증류수 2.5mL를 넣고 유봉으로 2분 동안 갈아서 슬러리를 형성합니다. 또 다른 2.5mL 증류수를 추가하고 파이펫에 충분히 부드러워질 때까지 슬러리를 계속 연삭합니다.

알려진 비-GMO 슬러리의 파이펫 50 μL은 DNA 격리 시약을 포함하는 "비-GMO" 표지된 스크류캡 튜브에. 이제 "테스트"라고 표시된 스크류캡 튜브에 테스트 식품 샘플 슬러리의 50 μL을 추가합니다. 1 분 동안 식품 샘플 및 DNA 시약을 포함하는 두 개의 튜브를 소용돌이. 다음으로 튜브를 95°C의 수조에 5분 동안 놓습니다. 마지막으로, 5 분 동안 원심 분리기에 튜브를 배치합니다. 검사 시 튜브 바닥에 고체 펠릿을 형성해야 합니다. 펠릿이 5분 후에 형성되지 않으면 펠릿이 형성될 때까지 2분 간격으로 원심분리기를 다시 한 번 발생합니다. 샘플은 이제 PCR에 즉시 사용하거나 최대 1주일 동안 냉장고에 보관할 수 있습니다.

첫째, 번호 6 PCR 튜브. 이 숫자는 표에 나열된 튜브 내용과 일치합니다. 표지된 각 PCR 튜브를 마이크로튜브 홀더에 놓고 캡을 엽니다.

각 추가에 대한 새 팁을 사용하여 테이블에 표시된 20 μL 프라이머를 각 PCR 튜브에 추가합니다. 다음으로, 각 PCR 튜브에 표에 표시된 DNA 샘플의 20 μL을 추가합니다. 파이펫을 위아래로 섞어 드시고 있습니다. 펠릿 샘플의 경우, 상체에서만 파이펫을 피해야하며 튜브 의 바닥에있는 고체 펠릿을 피하십시오. 마지막으로 PCR 튜브를 열 사이클러에 넣고 테이블에 표시된 가열 및 냉각 단계를 순환하도록 프로그래밍합니다.

음극 끝에 가장 가까운 우물이있는 전기 전광실에 3 % 아가로즈 젤을 놓습니다. 챔버에 TAE 버퍼를 추가하여 젤 트레이 위의 2mm를 덮습니다. 열순환기에서 PCR 튜브를 수집하고 마이크로튜브 홀더에 넣습니다. 매번 신선한 파이펫 팁을 사용하여 각 샘플에 구입한 DNA 적재 염료 10 μL을 추가하고 잘 섞습니다.

매번 신선한 팁을 사용하여, 이 표에 표시된 대로 분자량 눈금자의 20 μL을 하나의 우물에 넣고, 각 샘플의 20 μL을 후속 우물에 적재합니다. 전기 전도 챔버를 설정하여 30 분 동안 100 V에서 실행합니다.

젤이 실행이 끝나면 젤 챔버를 조심스럽게 분리하고 트레이를 제거하고 젤을 염색 트레이에 밀어 넣습니다. 100x 젤 얼룩을 구입하여 5분간 트레이를 부드럽게 흔들어 얼룩을 분배합니다. 염색되면 젤을 세척 용기에 넣고 수돗물로 헹구고 약 10s. 따뜻한 수돗물로 3회 세척하여 각각 3분 씩 씻아 최상의 결과를 위해 부드러운 흔들림으로 데스테인을 드시면 됩니다. 필요한 경우 원하는 대비에 도달할 때까지 따뜻한 물에 계속 유색하십시오.

레인 4에서 200 bp 대역의 존재 또는 부재는 테스트 식품에 GMO가 포함되어 있는지 여부를 나타냅니다. 식물 프라이머는 식물 DNA가 샘플에서 성공적으로 추출되었는지 여부를 결정합니다. 비 GMO 식품 제어는 거짓 긍정 결과의 지표, 그들은 발생 하는 경우. 비 GMO 식품 제어가 긍정적으로 나오면 PCR이 어느 시점에서 오염되었다는 것을 의미합니다. GMO 양성 템플릿 컨트롤은 거짓 네거티브의 지표입니다. GMO 양성 템플릿 컨트롤이 증폭되지 않으면 PCR 반응에 문제가 있으며 테스트 식품의 GMO 음성 결과를 신뢰할 수 없습니다.

젤은 DNA 밴드를 강조하기 위해 대조적인 배경을 제공하기 위해 흰색 또는 노란색 용지에 배치될 수 있으며, 또는 UV 라이트 박스를 사용하여 대비를 증가시킬 수 있다.

유전자 변형 성분에 대한 식품 이나 제품을 테스트 하는 능력은 과학 또는 규제 응용 프로그램의 숫자에 관련.

유전자 변형 작물에서 형질 전환 DNA 야생 작물 인구의 게놈으로 내성 될 수 있다는 몇 가지 증거가있다. 예를 들어, 수분 공급원은 유전자 변형 소스에서 꽃가루를 가진 야생 형 식물을 비옥하게 함으로써 이러한 전송을 용이하게 할 수 있습니다. 이것은 전체적으로 생태계에 이 삽입한 유전자의 퍼짐의 충격이 잘 이해되지 않기 때문에 관심사입니다. 야생 인구의 PCR 테스트는 유전 삽입물의 잠재적 확산 또는 성공적인 봉쇄에 대한 데이터를 제공할 수 있습니다.

라벨링부족, 또는 유전자 변형 성분의 잘못된 라벨링은 소비자의 관심사일 수 있습니다. 이것은 소비의 소비자의 선호 때문일 수 있습니다., 또는 GM 프로세스 동안 알레르겐의 잠재적인 도입, 후자는 논란이 있지만. 일부 국가에서는 유전자 변형 성분을 식품 포장에 나열해야 합니다. 이러한 국가의 규제 위원회는 PCR 테스트를 사용하여 식품 라벨링의 정확성을 확인할 수 있습니다.

작물에 도입 된 유전자 변형은 농약 저항을 부여, 일부 연구는 "슈퍼 잡초"의 생산에 대한 우려를 제기했다. 본질적으로, 이들은 어떤 식물든지 처음에 내성 또는 혼성화와 같은 기계장치를 통해 살충제에 저항을 얻는 수정을 위한 표적이 되지 않을 수 있습니다. 이러한 식물은 더 성공적으로 확산 할 수 있습니다, 삽입없이보다 제어하기 어려울 수 있습니다. 유전자 수정을 위한 PCR 시험은 이 퍼짐이 문제가 증명할 수 있었다는 것을 결정하기 위하여 그 같은 잠재적인 인구를 강조하고 추적하는 것을 도울 수 있습니다.

GMO 식품 에 대한 테스트에 JoVE의 소개를 본 적이 있습니다. 이제 PCR을 사용하여 유전자 변형 식품을 식별하는 원리, 음식에서 DNA를 추출하고 증폭하는 방법 및 식품 샘플이 유전자 변형되었는지 확인하는 방법을 이해해야합니다. 시청해 주셔서 감사합니다!

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Results

탈색 후, 젤은 35S 프로모터 및 NOS 종기 유전자에 대한 DNA 밴드가 겔상에 공지된 위치에 존재하는지 확인하기 위해 시험 식품레인(표 3)을보고 분석될 수 있다. 젤을 UV 라이트 박스에 놓아 대비를 증가시키는 데 도움이 될 수있습니다(도 1). 대안적으로, 젤은 DNA 밴드를 강조하기 위해 대조되는 배경을 제공하기 위해 흰색 또는 노란색 용지에 배치될 수있다(도 2).

Figure 1
그림 1. DNA의 분리 된 밴드를 보여주는 스테디닝 젤. 자외선 상자에 아가로즈 젤 전기 포에 이어 아가로즈 젤.

Figure 2
그림 2. 35S 프로모터 및 NOS 터미네이터 DNA에 대한 알려진 위치의 다이어그램. 레인 5에서 200 bp 대역의 존재 또는 부재는 테스트 식품에 GMO가 포함되어 있는지 여부를 나타냅니다.

레인 1: 식물 프라이머가 있는 비 GMO 식품 455 bp
레인 2: GMO 프라이머를 곁들인 비 GMO 식품 밴드 없음
레인 3: 식물 프라이머로 음식을 테스트 455 bp
레인 4: GMO 프라이머로 음식을 테스트 200 bp 또는 밴드 없음
차선 5: 식물 프라이머가 있는 GMO 양성 템플릿 455 bp
차선 6: GMO 프라이머가 있는 GMO 포지티브 템플릿 200 bp
차선 7: PCR 분자량 눈금자 1,000, 700, 500, 200, 100 bp

표 3. PCR 샘플 밴드 크기(기본 쌍(bp))

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Applications and Summary

폴리머라제 연쇄 반응(PCR)은 DNA를 증폭시키는 데 사용되어 광범위한 DNA 실험실 테스트를 허용합니다. PCR로 지금 가능한 시험의 한 지역은 음식 작물의 유전 수정에 사용된 DNA 순서의 존재 또는 부재를 위해 시험해서 GMO를 확인하는 것입니다. 전형적으로, 작물은해충(그림 3),질병, 가뭄조건(도 4)등과 같은 이상적인 수율에 대한 자연적인 억제에 대한 이점을 부여하기 위해 유전자 변형됩니다. 이점은 작물 식물의 자신의 DNA에 다른 종의 유전 물질을 삽입하여 얻을 수 있기 때문에, 잠재적 인 인간의 건강과 환경 위험은 GMO의 사용으로 확인되었습니다. 한 가지 환경 적 관심사는 유전자 변형 된 DNA가 수분 과정을 통해 의도치 않게 교환되는 능력이며, 이는 비 GMO로 판매될 작물의 게놈에 들어가는 유전자 변형 DNA로 이어질 수 있습니다.

Figure 3
그림 3. 콜로라도 딱정벌레의 애벌레, 감자의 잎을 삼키는.

Figure 4
그림 4. 옥수수는 가뭄에 의해 파괴.

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Transcript

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빈 값 문제

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