Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Environmental Science

This content is Free Access.

Chinese
 

测试基因改造食物

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

转基因的食品都含有一种成分或具体说来改变了其 DNA 的成分的产品。可以使用一种叫做聚合酶链反应技术检测到这些修改的存在。

基因改造食品一直有争议的问题,由于辩论关注健康和环境安全。能够检测基因改变的 DNA 的感兴趣的食物样本中允许为教育决策有关安全和潜在危险的使用基因改良生物体或转基因生物的在食物供应。

聚合酶链反应或 PCR,用于放大 DNA 以确定存在转基因序列的食物。凝胶电泳然后拉扩增的 DNA,通过琼脂糖凝胶基质和分离对应修改过的或非修改标记的不同大小的 DNA 条带。这些然后相比控制乐队从已知含有转基因的食品或已知是免费修改。

样品、 如何提取 DNA 和放大标记用于在基因改造过程中,以及如何建立食品样品中存在与否转基因生物的这个视频将说明检测转基因的 DNA 从食物背后的原则。

聚合酶链反应用于标识已经被插入到转基因食品的 DNA 序列。DNA 是一种相对稳定的分子,所以可行适用于扩增的 DNA 片段可以孤立甚至从高度加工处理的货物,像玉米片或蔬菜汉堡。少量的调控 DNA 序列用于控制插入基因的表达,所以这些序列是目前在大部分的转基因作物。此过程标识的最常用的两个,35S 启动子基因和其中合成酶终结者基因。35S 序列是一个强启动子和附加到插入的基因时将驱动器恒、 高层次的表达。其中合酶终止符是基因的包括停止所需的终结点上插入的转录。

聚合酶链反应涉及重复加热和冷却循环中的热循环,严格控制温度的 PCR 反应管机。加热样品到 94 ° C 会导致 dna 变性和分离。快速冷却到 45 至 65 °C允许引物退火到分离的 DNA 链。最后,再加热到 72 °C允许Taq聚合酶延长的引物和完整重复的目标区域。

购买的植物底漆添加到每个样品,和将放大中含有植物 DNA 样品。转基因 35S 和 NOS 阳性模板用于转基因生物为提供积极的控制。经认证的非转基因作为阴性对照。如果任何这些控制反应显示意外的乐队,测试样本的结果不能被信任。

扩增的 DNA 是运行通过琼脂糖凝胶电泳。PCR 产物是掺染料和加载到井。DNA 带负电荷的离子,和电流后,当加载到末尾阴极室凝胶将移向阳极结束。更大的 DNA 片段不能移动很容易通过凝胶矩阵所以都会留接近阴极,虽然规模较小的序列将移向阳极结束,导致在不同大小的 DNA 分离成不同的乐队。

后电泳,凝胶染色有助于直观显示分离的 DNA 条带。

现在,我们熟悉了转基因生物检测和 PCR 和电泳用于转基因标识背后的原理,让我们看看如何这可以进行在实验室里。

一旦已经确定食品类产品感兴趣,就可以开始分析。要提取 DNA,两个干净的瓶盖管,一并进入每个这些转让 500 μ L 的购买 DNA 分离试剂,并确保上下之间整除数均匀混合试剂混匀。标签一管"非转基因",和其他的"测试"。

下一步,称出 0.5 g 认证的非转基因食品,并将放入干净的砂浆。添加 2.5 毫升的蒸馏水,并与 2 分钟,形成浆杵研磨。添加另一个 2.5 毫升蒸馏的水,继续磨浆,直到它变得顺利,足以移液器。

移液器已知非转基因泥浆对"非转基因"标记包含 DNA 分离试剂瓶盖管 50 μ 的 L。现在添加测试食品样品浆 50 μ L 标记为"测试"瓶盖管。涡两管含有的食物样本和 DNA 试剂 1 分钟。下一步,在 5 分钟,95 ℃ 的水浴中放置管。最后,将管放在离心机为 5 分钟。经检验后,应在管底部形成固体颗粒。如果 5 分钟后,再一次为 2 分钟的时间间隔,直到颗粒形成离心机不形成了一个球。样品现在可以立即用于 PCR,或存于冰箱 1 周。

第一,第六个 PCR 管。这些数字将对应于表中列出的管内容。将每个标记的 PCR 管放在带盖打开的微细管持有人。

为每个添加使用新鲜的提示,添加到每个 PCR 管表中所列 20 μ L 底漆。接下来,添加到每个 PCR 管表所示的 DNA 样品 20 μ L。吸管向上和向下混合。丸粒化样品,一定要只从上清液,吸管,避免管底部的固体颗粒。最后,将 PCR 管放入热循环和程序它以循环加热和冷却的表中所列的步骤。

置于 3%琼脂糖凝胶电泳室井接近阴极末端。将泰缓冲区添加到会议厅,以覆盖胶盘上方 2 毫米。PCR 管收集热循环仪,并将它们放在一个微管持有人。每次使用新鲜针提示,加入 10 μ L 的购买加载染料对每个样本的 DNA,拌匀。

每次使用新鲜的提示,装入 20 μ L 的分子量标尺的琼脂糖凝胶井一口井和每个样品到随后的井,20 μ L 此表所示。设置电泳室运行在 100 V 为 30 分钟。

一旦这种凝胶已完成运行,仔细地拔下凝胶分庭、 卸下纸盒,并滑入染色的托盘的凝胶。沉浸在购买 100 x 5 分钟震动盘轻轻地分发染色凝胶染色凝胶。一旦沾上,将凝胶转移到清洗容器和冲洗用自来水约 10 s.Destain 通过洗三次 3 分钟温暖自来水中每个,每个轻轻摇动为获得最佳效果。如有必要,继续脱色在温暖的水中,直到达到所需的对比度。

在车道 4 200 bp 乐队的存在与否指示是否检测食品中含有转基因生物。植物引物确定是否植物 DNA 成功提取样品。非转基因食品控制是一项指标的假阳性的结果,他们应该发生。如果非转基因食品控制出来是积极的它意味着 PCR 被污染在一些点。转基因阳性模板控件是假阴性率指标。如果转基因阳性模板控制并不健全,还有一个问题与 PCR 反应和从测试食品转基因阴性结果不能被信任。

凝胶可以放在白色或黄色的纸,以提供背景形成对比,以突出显示 DNA 条带,或可利用紫外线灯箱实现增加的对比度。

测试食品或转基因成分的产品的能力是相关的科学或规管的申请数目。

还有一些证据表明,转基因作物转基因 DNA 可以成为渗入到的野生作物群体的基因组。例如,传粉者可能以这种转移施肥野生型植物的花粉从一个转基因的来源。这是传播的一个问题,因为这些插入的基因,对生态系统作为一个整体的影响还不太清楚。聚合酶链反应检测野生种群可以提供关于潜在传播或成功遏制,基因插入数据。

缺乏的标签,或不正确标记的转基因成分可以是消费者关注的。虽然后者是有争议的这可能是由于消费,消费者的偏好或过敏原在通用汽车的过程中,可能会引入。在一些国家,转基因的成分均须在食品包装上列出。管理委员会在这些国家可能使用 PCR 检测,检查食品贴标精度。

凡介绍给作物的遗传修饰授予抗药性,一些研究已经提出对生产的"超级杂草"的担忧。基本上,这些可以是任何一种植物不最初的目标是通过导入或杂交等机制获得农药抗性的修改。这些植物可能能够传播更成功,然后,要比那些没有插入到控件。聚合酶链反应检测基因改造可以帮助突出显示并跟踪这种潜在的种群,以确定是否这一利差可能会引起问题。

你刚看了朱庇特的简介测试对转基因食品。你现在应该明白确定转基因的食品使用 PCR、 如何提取和放大 DNA 从食物中,以及如何确定您的食品样品有转基因背后的原则。谢谢观赏 !

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter