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平衡常数的分光光度法测定

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确定一种化学反应的平衡常数可以提供多大程度上会形成有关的重要信息产品随着时间的推移。

每一个化学反应是与平衡常数,K,反映了产品和反应物的浓度比时的反应已停止进展。测量 K,必须确定这些浓度。

如果反应包含彩色的单个组件,可以测量及其与光相互作用来辨别它的浓度。然后可以使用间接平衡的化学方程式计算无色组分浓度。此视频将说明用分光光度计进行了实证确定铁 thiocyanante 反应的平衡常数。

最化学反应进行正向和反向方向。随着反应的进行,它到达的正向和反向的反应发生速度相同点。这就是所谓的化学平衡。在这种稳定状态,产物浓度对反应物的浓度,每一次幂的他们的化学计量系数,比对应的平衡常数,k。到措施 K 系统感兴趣的应该知道系数,和必须测定浓度,直接或间接地。啤酒-兰伯特依法有色物质的浓度成正比其吸光度,这是它吸收特定波长的光的能量。这可以表示数学上, A在哪里吸光度,ε 是摩尔的衰减系数,即复合专用, l是通过样品,路径长度, c浓度。校准曲线是通过测试的已知浓度的多个解决方案并策划结果的吸光度值创建的。与此校准曲线,可以研究未知浓度的解决方案。吸光度测量用来确定有色物质的浓度。然后,可以计算剩余的反应物和产物的浓度。下面的过程将研究铁三与硫氰酸盐,形成复杂的铁硫氰酸反应。

一旦确定了浓度,值为 K 可以用初始变化平衡或冰,计算表,将在结果中进一步说明。

既然您已了解如何分光光度法可以用于确定平衡常数,你准备好开始的过程。

测量样品之前, 必须生成的校准曲线。

若要开始,零紫外-可见分光光度计使用蒸馏水作为一片空白,代表没有吸光度。当插入时试管分光光度计,确保它是面向,所以光线穿过透明的边,和液体的水平是高于束的路径。

然后,准备 5 试管包含文本的协议,这将产生不同浓度的产品所示每个反应液的指示的卷。涵盖每个管子用戴着手套的手指,并轻轻摇动混合。允许管休息 10 分钟使用巴斯德吸管将少量的解决方案 1 转、 试管、 并将其放置在分光光度计。获得谱并记录 λ 最大和其吸光度。解决方案 2-5,使用新的试管每次运行重复此过程。

绘制测量吸光度与浓度的铁硫氰酸盐为每个解决方案。确定最适合的数据线。这条线的斜率是摩尔的衰减系数。

现在取得的数据为标准的解决方案,准备四中等试管包含解决方案的指示的卷文本协议中所示。

涵盖每个管的一根手指,轻轻摇动混合。让他们可以至少 10 分钟。此休息期间允许要达到化学平衡的解决方案。

使用巴斯德吸管将传输解决方案 6 小数量到试管,并将其放置在分光光度计。获得谱并记录 λ 最大值和吸光度测量 λ 最大。为解决方案 7 – 9 重复此过程。

一旦所有的样品进行了测量,可以分析解决方案 1-5 的摩尔浓度和吸光度数据。过量的硫氰酸盐用来确保所有的铁反应,从而简化了分析。

绘制数据创建校准曲线。光的路径长度 l,通常是 1 厘米,和可以不计入。因此,线,计算了要 7600,坡是衰减系数。测试解决方案 6-9,此值和吸光度用于计算铁硫氰酸盐浓度处于平衡状态。与这一数据,然后可以利用冰桌。

反应物初始浓度基于已知的 molarities 的铁和硫氰酸盐添加到解决方案,以及反应的总量。由于该产品由铁和硫氰酸盐的 1:1 反应,平衡浓度的每个产品的数量减少形成。现在已知每个物种的平衡浓度。使用这些值来计算每个解决方案的平衡常数。和值基本恒定,浓度进行了研究的范围内。

平衡常数的概念是重要的科学领域种类繁多。平衡常数可以用于提供有用的信息的反应将形成的程度随着时间的推移产品。在此示例中,观察到两种含结晶紫的反应。

第一个解决方案被由结晶紫和氢氧化钠。观察到的颜色迅速从紫色变成无色。这种反应有很大的 K 值,该值指示产品形成几乎完全地随着时间的推移。

然后与醋酸钠反应结晶紫。此解决方案无限期地保持紫色。这种反应有一个非常低的 K 值,所以它并不进行很大程度上向前。

最后,解离常数 — — 特定类型的平衡常数 — — 可以用来描述蛋白质行为。在此示例中,RNA 的结构变化进行监测镁反应缓冲区中。

纯化的 RNA 是用已知浓度的镁,混合成溶液和允许达到平衡。然后,生成的 RNA 结构,绘制。

在这种情况下,高浓度的镁引起反应活性部位对 RNA 得到的保护,生产了一半价值 Kd。

你刚看了朱庇特的简介分光光度法测定的平衡常数。现在,您应该了解定义由啤酒 — 朗伯定律、 如何确定从吸光度用分光光度计,浓度和如何计算使用平衡浓度平衡常数的关系。

谢谢观赏 !

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