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Environmental Microbiology

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培养和枚举从土壤样品的细菌

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确定环境细菌准确计数是土壤生态系统健康评价的关键。这可以通过培养细菌菌落与适当稀释。

土壤细菌是分解、 固氮,和养分循环中扮演着角色的一个健康的土壤生态系统的重要组成部分。表层土壤的承印物上的有机和无机颗粒成型周边毛孔复矩阵,充满空气或水。这些条件与表层土壤通常含有超过 100 万细菌每克创建为细菌,理想的生态系统。

因为这个含有高浓度的细菌,稀释是必要镀上增长媒体前。系列稀释可以降低到足够低,可以为单一的殖民地,在媒体板弯曲,从而使计算的初始计数的土壤样品中的细菌生长的水平原土样浓度。

这个视频将说明如何编写串行稀释度的土壤样品,如何板这些细菌的样品,以及如何计算土壤细菌从稀释平板计数。

细菌是简单的原核生物,但高度多样化的物种和生态系统。放线菌的细菌经常被认为是一个独特的群体,由于他们的丝状结构,在那儿他们种植在一起,形成菌丝紧张的一个子集。

通常情况下,放线菌占土壤细菌人口总数的 10%。细菌和放线菌在地球上,几乎每个环境中丰富但在无可比拟的多样和丰富土壤中的发现。

土壤细菌是枚举,和潜在地培养和鉴定,稀释镀。在这里,土壤样品是连续在水中,稀释,然后分散到琼脂生长板上。然后计算,由此产生的殖民地。此值,以及稀释因子,用来阐明土壤中的细菌的初始浓度。

稀释镀很常见,价格低廉,细菌枚举的简单方法,但它确实患有几个缺点。土壤不应允许在稀释,可能会导致有偏的增长过程中解决。一些土壤细菌不会文化在碟子里,或成长太慢被观察。此外,此方法假定殖民地的形成从一个单一的细菌,但它们可能源自丛生的多个单元格。

某些细菌的种类生长在不同的生长介质上得更好。共同的基板,文化种类繁多的细菌是一种琼脂蛋白胨酵母板。放线菌优先生长在甘油-酪蛋白的基础板,更好地适应这些丝状细菌的生长。

现在,您了解细菌枚举背后的概念,让我们看看这个过程如何进行在实验室里。

开始执行程序,称出 10 克的土壤样本,并将添加到 95 mL 的去离子水。摇匀,暂停和"A"的标签。土壤落定以前,删除 1 mL 无菌吸管与悬浮液并将其转移到 9 毫升的去离子水。涡彻底,和作为"B"的标签。

重复此稀释步骤 3 次,每次 1 毫升的前悬架和 9 毫升的去离子水。标签这些顺序作为管 C、 D 和 e。这个结果在 10-1 10-5克每毫升土壤通过系列稀释。

生长菌落,采取 3 预先准备好的蛋白胨酵母琼脂平板和贴上标签 E.涡、 C 和 D,以及相应的样品和吸管 0.1 毫升装每个盘子里。由于 CFUs 报告每毫升,进一步使用 0.1 毫升增加十倍稀释。

接下来,将玻璃吊具蘸乙醇。将摊铺机放在火焰的几秒钟,点燃并烧掉乙醇。这将消毒吊具。

按住上面第一板吊具,直到熄灭的火焰。打开板快,持有由合上的盖子。触摸到接种来冷却,从琼脂吊具,然后蔓延接种周围表面滴,直到游离液体的痕迹消失。更换板盖。

重新火焰吊具和重复此过程下, 一板,迅速工作,以免弄脏板与机载的有机体。逆变板,可防止水分滴落到琼脂,并在室温下板孵育一周。

成长放线菌,把事先准备好的甘油-酪蛋白三个盘子,并贴上标签为 B,C,和 D.采用前面所示的技术扩散板 0.1 毫升从悬浮物 B、 C 和 d。低稀释使用因为放线菌是通常存在作为 1/10 的细菌类群。

最后,反转这些板块和储存在室温为两周。

经过孵化,所有细菌板仔细检查,并注意在蚁群的规模和形状的差异。当在琼脂上生长,细菌能产生粘糊糊的殖民地,从无色到明亮的橙色、 黄色或粉红色。相比之下,放线菌菌落垩白、 坚定,革质,并将打破在压力下,在那里其他细菌菌落将涂片。这允许殖民地通过触摸与不育的循环变化加以区别。

点算并记录的细菌菌落,包括任何放线菌数量。只能算 30-200 殖民地每板板。

成长文化特定的细菌,从任何板块,选择很好地分开的殖民地从邻近的殖民地选择离散的殖民地。消毒的传播循环,然后打开板和触摸到一个空的点来冷却回路。接下来,选择少量的殖民地上的循环利息。

以新鲜的蛋白胨酵母板,使条纹几厘米长的一边。消毒和晾凉再一次,然后使仅在第一遍十字架的初始连胜的条纹。重复此过程以同样的方式两次更多。这个裸奔的"稀释"结果回路分开另一个单元格中。将盘子放在黑暗的地方,在室温下孵育两个星期。

从细菌和放线菌的菌落数,可以确定菌落形成单位每克土壤。每克土壤的殖民地的数量等于殖民地在盘子里,乘以稀释镀的倒数计数的数量。例如,如果 46 殖民地在 10-5与 0.1 毫升孕育剂稀释平板计数,然后每克土壤 CFU 等于 10-6 46,或每克土壤的 4600 万 CFUs。

演出细菌计数以及文化有很多科学调查或协议的关键第一步。

健康的土壤中含有之间 106和 108细菌每克。土壤的细菌枚举可以用于确定健康的兴趣,土壤和计数小于 106和 108细菌每克表明不健康或差的土壤。这可能会造成缺乏的营养物质或有机物质,由于极端土壤 ph 值或土壤污染的非生物胁迫。

从土壤细菌或真菌首先确定了许多类型的今天在医学上使用的抗生素。分离纯菌株从土文化可以有可能帮助科学家的帮助识别新抗生素化合物。在这里,测试细菌或感兴趣的孤立的化合物可以添加到板随着细菌的草坪,和他们对草坪生长的影响记录。由测试细菌或复合,抑制生长的细菌草坪清晰补丁可能表明抗菌活性。

豆科植物包括豌豆和豆类依靠共生关系与固氮细菌。这些细菌自由自在地生活在土壤中或在根系,结节内,产生被植物利用的氮化合物。在贫瘠的土壤,补充土壤中固氮细菌与豆科作物可能促进经济增长和健康的植物。这可以导致更大、 耐寒的植物,反过来给更多的作物产量。

你刚看了朱庇特的简介细菌的枚举。现在,您应该了解如何执行的土壤样品的稀释、 如何平板菌落计数和菌落分离,以及如何计算土壤样品中细菌的数量。谢谢观赏 !

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