Techniques d'identification des rongeurs II

L’utilisation du tatouage de queue est bénéfique dans de nombreux protocoles de recherche. Tatouages de queue sont idéales pour un animal qui consiste à être photographiée sur un appareil d’IRM, ou celui qui est génétiquement prédisposé à la dermatite ulcérative. Pour une identification rapide d’un animal dans une cage, sans avoir à retenir, le tatouage de queue est facilement visualisé. Cependant, cette technique exige des compétences, pratique et une main ferme ; Il faut également un équipement spécialisé. ¹

Protocoles expérimentaux peuvent nécessiter le génotypage des nouveaux-nés dès le premier jour. En conséquence, il est essentiel que ces chiots soient identifiés en permanence. À cet âge, les pennes d’oreille ne sont pas développées suffit d’insérer une étiquette d’oreille et une perforation d’oreille encore ne peut être utilisée que sur eux. Dans le passé, il était courant pour un chercheur d’un code de retrait TEP permet d’identifier les nouveau-nés. Cependant, c’était stressant à la fois pour le jeune animal et le barrage et donc a été considéré comme inhumain. ² l’utilisation du tatouage orteil permet aux animaux d’être identifié en permanence jusqu'à ce qu’ils sont assez grands pour oreille marquage ou perforation d’oreille. ³

Bien que le processus d’implantation d’une puce électronique est relativement facile, il y a plusieurs facteurs qui limitent son utilité pour l’identification chez les souris. Les puces stériles ont la taille d’un gros grain de riz et nécessitent un 10 à 12 jauge aiguille pour la livraison. Ainsi, ils sont très importants pour une souris. Le coût des puces et le dispositif de lecture peut également être prohibitif, comme la durée de vie de la souris est courte et le nombre d’animaux est généralement importante. Les animaux qui sont destinés à être photographiée sur un appareil d’IRM ne peut pas avoir des implants en eux. Toutefois, s’il y a un groupe d’animaux qui doivent être identifiés de façon permanente, puces peuvent être utilisés. ⁴

Études de toxicité aiguë nécessitant des animaux à être identifiée à des heures ou quelques jours, ne nécessitent pas l’utilisation de l’identification permanente. Marqueurs non toxiques sont fabriqués spécialement pour la coloration de la fourrure des animaux et sont disponibles en plusieurs couleurs. Ces colorants marqueur peuvent rester visibles pendant plusieurs semaines. Les marqueurs permet également de concert avec d’autres méthodes pour repérer les animaux spécifiques dans un groupe.

1. tatouage de queue

Tatouages de queue sont facile à lire sans la nécessité de traiter l’animal.

La figure 1. Le tatouage sur des souris adultes de queue

1. Préparer le matériel de tatouage selon les instructions du fabricant. Il faut une petite quantité d’encre. Teinture noire devrait servir de colorant vert pour les rats ou les souris pigmentées ou rats et des souris albinos.
2. Préparer les animaux pour l’identification.
   Remarque : Afin de minimiser la crainte ou détresse, queue tatouage doit être effectué dans une pièce de procédure plutôt que dans une zone de logement des animaux.
   1. Bien retenir l’animal pour le tatouage de sorte que le mouvement est minime.
   2. Rats sevrés sont retenus à l’aide d’une tasse portant une encoche en plastique, avec la lèvre de la coupe fixée sous les boulons sur la plate-forme de tatouage et la queue qui s’étend dans l’encoche.
   3. Chez la souris adulte peuvent être immobilisée au moyen d’une drisse de coupe, avec la queue tendue de l’ouverture et la bride de la coupe qui s’est tenue en place via une plate-forme ou un autre périphérique.
   4. Nettoyer la queue avec une petite quantité de nettoyant dilué tissu appliquée avec un coton-tige. Rats adultes ont généralement une accumulation de débris sur la queue qui doit être nettoyée avant d’appliquer le tatouage et échelle. Un gommage savon et l’eau de la queue va supprimer la majorité de la saleté et les débris. Sécher la queue bien avant de continuer.
   5. Appliquer huile de tissu sur la peau avec un coton-tige juste avant le tatouage. L’huile de tissu est nécessaire pour minimiser les lésions tissulaires par ramollissement de la peau et l’aiguille de tatouage de graissage. En outre, l’huile dissout toute saleté ne pas supprimée par le processus de nettoyage et empêche l’encre de coloration de la peau nontattooed.
3. Appliquer le tatouage.
   1. Trempez la pointe de l’aiguille dans le pigment avec la machine.
   2. Mettre la pointe de l’aiguille sur le site de tatouage avec le pistolet actionné par la pédale.
   3. Faire court, caresse même dans une seule direction. Chiffres et lettres doivent être tatoués de manière afin qu’ils sont construits dans les segments avec des angles minimes et des courbes (lorsque cela est possible).
   4. Pénétrer assez profondément dans le derme avec une aiguille pour dépôt pigmentaire permanente. Un changement dans le son de l’aiguille activé peut aider à discerner la profondeur.
   5. Approcher la peau avec l’aiguille à un angle de 90^o pour les dépôts de pigment adéquat.
4. Entretien et nettoyage après tatouage
   1. Blot (ne pas essuyer) le tatouage terminé pigment excédentaire avec du papier absorbant.
   2. La présence de sang sur le tatouage ou la serviette de papier indique que le tatouage a été fait trop profond et donc peu susceptible d’être permanente.
   3. Renforcer les zones fines de caractères tatouage avec pigment supplémentaire. Caractères sont renforcés avec le parallèle de pigments déposés à, mais pas au sommet, pigment déjà déposés.
   4. Pour ajouter le pigment supplémentaire, tremper la pointe de l’aiguille dans le réservoir de colorant pour tous les deux caractères pour les souris et tous un caractère pour les rats.
   5. Les raisons pour la décoloration des tatouages incluent des quantités insuffisantes de pigment, tatouages faits trop peu profondes, tatouages faits trop profondément, un angle inapproprié de l’aiguille sur la peau, aiguilles émoussées ou crochet utilisés ou le tatouage réalisés trop rapidement.
   6. Nettoyer soigneusement le matériel de tatouage après chaque utilisation selon les instructions du fabricant.

2. pointe le tatouage des nouveau-nés

Protocoles expérimentaux peuvent nécessiter le génotypage des nouveau-nés, dès le premier jour, ce qui le rend indispensable que ces chiots soient identifiés en permanence. L’utilisation du tatouage orteil permet aux animaux d’être identifiées jusqu'à ce qu’ils sont assez grands pour oreille marquage ou perforation d’oreille.

La figure 2. La technique retenue appropriée pour le tatouage une souris nouveau-né. Le lancet a le colorant vert sur la pointe.

1. Retenir les petits preweaned.
   1. Coupe le nouveau-né dans la main sur une compresse de gaze. Placer le pied entre le pouce et l’escroc de l’index pour exposer l’orteil choisie, ou des orteils, pour le tatouage.
   2. Maintenez le pied près des orteils afin que l’orteil a une surface solide derrière lui, empêchant ainsi loin de flexion.
   3. Overtwist pas la jambe lors du positionnement du pied. Les chiots qui sont retenus peuvent bouger, mais aucune vocalisation n’est nécessairement entendue.
2. Préparer le matériel.
   1. Sélectionnez une lancette animale de verge d’or de 4,5 mm.
   2. Place une petite tache de tatouage vert coller sur une surface non poreuse ; papier d’aluminium fonctionne bien.
   3. Faire tremper que la pointe de la lancette dans la pâte de tatouage.
   4. Utilisez seulement une petite quantité de pâte.
3. Appliquer le tatouage.
   1. Piquez la pointe désirée avec la lancette verge d’or selon un code d’identification.
   2. Piquer la peau pour introduire la pâte dans la peau, laissant une marque.
   3. Le même endroit poke trois fois pour assurer une pénétration appropriée.
   4. Éviter de piquer si profondément que les saignements de l’orteil ; Cela peut entraîner un tatouage plus pâle.
4. Entretien et nettoyage après tatouage
   1. Éponger doucement la tache avec un chiffon absorbant pour enlever la pâte excédentaire.
   2. N’essayez pas de nettoyer la pâte excédentaire du pied ou corps.
   3. Retourner l’animal de sa cage.
   4. Lorsque l’infirmière chiots sont tatoués, il est conseillé de tatouage aussi le barrage. Cela peut empêcher de trop d’importance à la pâte sur les chiots, qui pourrait conduire à un toilettage excessif du tatouage.
   5. Utilisez une nouvelle lancette pour chaque portée.
   6. Les tatouages doivent être vérifiées sur le jour qui suit la procédure. Refaire le tatouage si les points sont faibles ou non visible. Si les points sont visibles le jour après le tatouage, elles devraient rester visibles pendant la durée de vie de l’animal.

3. pointe le tatouage des souris et des rats adultes

Lorsqu’une litière des nouveau-nés est tatouée, il est préférable que la mère aussi être tatoués afin que la pâte sur ses petits n’est pas étrangère à elle.

1. Retenue de l’animal.
   1. Retenir l’animal à l’aide d’un cône en plastique ou une drisse de Plexiglass qui permet d’accéder à des pattes postérieures.
   2. S’étendent au pied du dispositif de retenue.
   3. Placer le pied entre le pouce et l’escroc de l’index pour exposer l’orteil choisie, ou des orteils, pour le tatouage
   4. Maintenez le pied près des orteils afin que l’orteil a une surface solide derrière lui, empêchant l’orteil de plier loin.
   5. Overtwist pas la jambe lors du positionnement du pied.

4. micropuce

L’implantation d’une puce RFID est une méthode couramment utilisée pour l’identification des animaux.

1. Charger la puce dans l’applicateur, ou sélectionnez une seringue préchargée.
2. Retenir l’animal à l’aide d’un tube de retenue de Plexiglass qui permet de saisir de la peau sur les épaules.
3. Tent la peau, créant une poche.
4. Placer l’aiguille à travers la peau, biseau haut et parallèle à la colonne vertébrale et l’a dirigée vers la queue.
5. Éjectez la micro-puce sous-cutanée.
6. Retirer l’aiguille et pincer la peau fermée au point d’injection. Ceci empêche la puce après l’aiguille hors de la peau. Continuer à appliquer une pression d’hémostase pour tout saignement de la peau.
7. Retirez le dispositif de retenue de l’animal et Scannez la puce pour confirmer le code d’identification.

La figure 3. Placement puce chez le rat adulte.

5. temporaire identification pour souris

Colorants non toxiques et marqueurs animales peuvent être utilisés pour une identification temporaire de souris.

1. Immobiliser la souris tels que la zone située entre les omoplates est accessible pour les marquages sur la fourrure.
2. Placer un marqueur, spot ou trainée de colorant sur la fourrure dans ce domaine. Cette région est utilisée pour empêcher l’animal de supprimer le marquage lors de toilettage.
3. Vérifier le marquage périodiquement si l’utiliser comme identificateur unique pendant plus de quelques jours.
4. La queue peut également être utilisée pour de courtes durées. Cependant, l’animal peut enlever une marque il en toilettage.

6. temporaire identification chez le rat

1. Empêcher le rat pour que la zone pour l’application de teinture ou de marqueur est facilement accessible. Dans certains cas, lorsque seulement une rayure ou dot est nécessaire, l’animal ne devra pas être maîtrisé, mais peut se déplacer librement dans la cage.
2. Manuel retenue en saisissant la queue et en le tenant tendu tout en appliquant l’identification se fait couramment.
3. Immobilisation temporaire à l’aide d’anesthésiques inhalants peut être faite pour les animaux hargneux.
4. Vérifier le marquage périodiquement si vous utilisez cette méthode comme identificateur unique pendant plus de quelques jours.

Pour minimiser toute crainte ou la détresse chez les animaux, la queue le tatouage doit être effectué dans la pièce de procédure plutôt que dans la zone de logement des animaux. Avant d’appliquer le tatouage, restreindre la souris à l’aide d’une drisse de coupe, avec la queue tendue de l’ouverture. Le rebord de la tasse est maintenu en place via une plateforme de verre spécialisé. Ensuite, nettoyer la queue avec une petite quantité de tissus dilué nettoyant sur un coton-tige. Cette étape est importante pour éliminer toute accumulation d’échelle et de débris qui pourraient interférer avec le tatouage. Ensuite, appliquez huile de tissu à la peau de la queue avec un autre tampon. Cela minimise les lésions tissulaires par ramollissement de la peau et le mode de lubrification pour l’aiguille de tatouage. En outre, l’huile dissout la saleté ne pas supprimée par le processus de nettoyage et empêche l’encre de coloration sur la peau non-tatoué. Maintenant vous êtes prêt à appliquer le tatouage.

Lorsque la machine est éteinte, tremper la pointe de l’aiguille de tatouage, qui est une lancette ou une aiguille hypodermique, dans le pigment. Ensuite, activer l’arme à l’aide de la pédale, placez l’outil de tatouage sur la queue et mettre la pointe de l’aiguille sur le site de tatouage. Approcher la peau avec l’aiguille à un angle de 90° et pénétrer assez profondément dans le derme, tel que le pigment se dépose en permanence. Un changement dans le son de l’aiguille activé peut aider à discerner la profondeur. Faire les courses courtes même dans une seule direction, formant des chiffres et des lettres. Essayez d’utiliser des angles et des courbes minimum lorsque vous appliquez le tatouage.

Pour ajouter le pigment supplémentaire, tremper la pointe de l’aiguille dans le réservoir de colorant pour chaque caractères doublé pour la souris et tout un caractère pour les rats. Épongez le tatouage terminé avec du papier absorbant pour enlever l’excès pigment. La présence de sang sur le tatouage ou la serviette de papier indique que le tatouage a été fait trop profond et donc peu susceptible d’être permanente. Renforcer caractères minces avec pigment supplémentaire en plaçant l’aiguille parallèle, pas sur le dessus, le pigment déjà déposé. Nettoyer soigneusement le matériel de tatouage après chaque utilisation, et une aiguille Neuve ou stérilisée et un approvisionnement frais d’encre doivent être utilisés entre les cages pour prévenir la transmission de la maladie.

Dans une autre expérience de comportement, les enquêteurs ont effectué orteil le tatouage chez les nouveau-nés et placent dans une boîte d’enregistrement avec des micros spéciaux aux cris ultrasoniques Records. Le but de cette expérience était d’examiner les différences dans l’appel taux, c'est-à-dire nombre de vocalisations par minute, dans le type sauvage et chez des souris déficientes Shank2 --un modèle de l’autisme-over 12 jours néonatal période et adulte hotte.

Enfin, comme mentionné précédemment, l’utilisation de colorant non toxiques est un moyen efficace pour marquer les animaux pour des expériences de courte durée. Ici, les scientifiques ont été intéressés par une expression transitoire d’une protéine de plasma. Alors ils marqué les animaux avec des marqueurs temporaires, une injection intraveineuse de l’ADN de plasmide et recueilli l’échantillon de sang deux jours plus tard afin de déterminer l’expression de la protéine en utilisant la technique du western blot.

Lors du choix de la méthode d’identification appropriées, de nombreux facteurs doivent être délibérés. Chaque technique a des avantages et des inconvénients qui doivent être considérés par rapport aux besoins expérimentaux. Alors que les coûts doivent être soupesés avec d’autres facteurs, la simplicité de la technique et le niveau d’inconfort pour les animaux devraient être les principales considérations. ^{4, 5}