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Techniques d'identification des rongeurs I

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Techniques d'identification des rongeurs I

Overview

Source : Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR ; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Université de Notre Dame, Indiana

Une exigence fondamentale de la recherche biomédicale est l’identification des animaux de recherche. Il est essentiel que l’animal de droite est utilisé pour la collecte de données et des procédures. Rats et des souris de laboratoire peuvent être identifiés avec les méthodes permanentes suivantes : marques auriculaires, codes de perforation d’oreille, implantation de la micropuce, tatouages de queue de souris adultes et orteil tatouages chez les nouveau-nés. Méthodes de colorants et de stylos de marquage temporaire peuvent également servir pour les études de toxicité aiguë. Cette vidéo couvre les aspects techniques de l’oreille de marquage et de poinçonnage pour souris et rats, ainsi que les avantages de chacun en ce qui concerne le type de recherches menées sur les animaux. Pour ces méthodes d’identification pour se faire correctement, il faut connaître les techniques de base retenue manuelle pour chaque animal (couverts dans une vidéo séparée).

Principles

Les marques auriculaires sont peu coûteux et facile à exécuter et par conséquent sont couramment utilisés pour l’identification des rats et des souris. Étiquettes peuvent être faits sur mesure avec une série de chiffres et/ou de lettres. Attribution des codes spécifiques à une souche de souris/rat, ou à un enquêteur principe (PI), aides en gestion tenue de dossiers et base de données, notamment dans les colonies reproductrices grandes où il y a plusieurs souches et PIs. En outre, il existe une variété d’étiquettes disponibles dans le commerce. Étiquettes métalliques ont des caractères gravés sur eux. Bien que cette gravure est claire, en travaillant avec une souris, il est souvent nécessaire de le ramasser pour lire le code sur les balises en raison de l’exiguïté des balises. Les autres options sont des étiquettes en plastique avec chiffres ou lettres sur des fonds colorés, ou plastique tags avec un code à barres sur la face avant. Ces deux options permettent les balises à lire sans avoir à manipuler les animaux. Un autre avantage d’étiquettes en plastique est leur compatibilité avec la formation image de MRI.

Le positionnement de l’étiquette à l’oreille est essentiel, comme le mauvais positionnement peut avoir plusieurs conséquences fâcheuses. Tags doivent être placées telles que ne pas provoquer une courbure dans le pavillon, gêner la mobilité de l’animal ou attraper sur n’importe quelle partie de la mise en cage. Si l’étiquette est placée trop près de la pointe de l’oreille, il peut facilement être arraché le tissu pinna. Si placé trop près de la tête, la peau de la région du cou peut attraper dans la balise, qui va créer une irritation, douleur et mouvement restreint. Cela peut mener à soi-traumatisme de l’animal à se gratter à la balise, il déchirant de l’oreille, ou d’obtenir un pied pris dans la balise. Formation pour un placement correct et sa technique est essentielle. ¹

Tandis que les balises fournissent des identificateurs individuels pour souris ou de rats, ils ne sont pas infaillibles. Tags peuvent être perdus en raison des combats, toilettage excessif, la dermatite chez les souches sensibles, auto-traumatisme ou une infection. ² rats adultes en particulier sont moins tolérants des marques auriculaires et souvent les supprimer, infligeant self-trauma. Le comportement plus agressif de la reproduction chez le rat peut aussi conduire à une étiquette d’oreille étant arrachée à la Penne. Si la souris ou rats sont appariés ou logés en groupe, la perte d’une marque auriculaire sur plus d’un animal peut être gênante. Pour contourner ce problème, une forme secondaire d’identification-comme un coup de poing le code utilisé sur l’oreille opposée de la balise ou un tatouage de queue ou de l’orteil-devraient être utilisées. Une installation doit normaliser tant le choix de l’oreille à baliser et le code à utiliser sur l’autre oreille ou sur les orteils. Tous les codes doivent être indiquées sur la carte de la cage.

L’utilisation de codes de perforation d’oreille permet une méthode rapide et simple d’identification, mais la technique a des limites. Les codes couramment utilisés ont une limite supérieure pour les numéros utilisables, habituellement un maximum de 100 à 399. Pour lire les codes de perforation d’oreille, la plupart des animaux doivent être saisies à la peau du cou. Les coups de poing peuvent doubler comme des échantillons de tissus pour le génotypage de la PCR, qui permet l’identification des animaux et échantillonnage de génotype pour se faire simultanément. Il en résulte moins de stress aux animaux de manutention répétée. ³

Il existe trois styles d’oreille poinçons : le poinçon de ciseaux et le poinçon de pouce le punch de levier. Bien que tous soient aussi efficaces, il y a avantages et inconvénients de chacun. Par exemple, comme l’âge des rats, la peau de leurs oreilles s’épaissit. Il est préférable d’effectuer les poinçons de l’oreille chez le jeune rat comme ils sont sevrés. Pour rats adultes nécessitant une identification, l’utilisation de l’inhalant anesthésie doit être envisagée. Ergonomique, le niveau punch est plus facile à utiliser qu’un coup de poing de pouce, surtout pour les oreilles plus épais des rats plus âgés. Toutefois, les deux de ces poinçons exigent un mouvement de pincement des doigts. Le poinçon de ciseaux a l’avantage ergonomique de ne pas nécessiter un mouvement de pincement, évitant ainsi les blessures et la fatigue du canal carpien. En revanche, le punch de pouce est avantageux pour la collecte de génotypage des échantillons, comme les pointes avec le matériel tissulaire seront adaptera dans un tube Eppendorf. Le style de coup de poing à utiliser doit être déterminé par les individus effectuant la tâche et l’âge des rats.

Pour les rats, bien que les étiquettes métalliques sont souvent utilisés, ont démontré qu’il y a des conséquences de leur utilisation. Inflammation et douleur chronique même modifications néoplasiques ont été observés chez les animaux qui portent des marques auriculaires métal pendant plusieurs mois. ^3,4,5,6 les balises doivent être rapidement retirés de l’oreille s’il y a un effet indésirable, et le préjudice en résultant devrait être examiné et traité, si nécessaire, par le personnel vétérinaire.

Entretien et maintenance des poinçons prolongera leur utilisation. Tous les types de coups de poing seront alourdira si stérilisés à l’autoclave, il est donc recommandé de les nettoyer avec un produit désinfectant et les rincer avec de l’alcool. Ensuite, ils doivent être séchés soigneusement pour éviter l’oxydation. Si les punchs sont utilisés pour l’ACP, ils devraient être trempées pendant 3 minutes dans une solution qui élimine les résidus ADN ou ARN. Avant utilisation, ils sont rincés dans de l’alcool et essuyés.

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Procedure

1. identification de poinçon oreille

Codes de perforation d’oreille ont été développés comme une méthode rapide et peu coûteuse d’étiqueter des animaux individuels. Il existe trois styles d’oreille poinçons : le poinçon de ciseaux et le poinçon de pouce le punch de levier. Oreille droite de l’animal est utilisé pour les chiffres uniques, l’oreille gauche pour les dizaines et au milieu des oreilles pour des centaines.

Retenir l’animal afin que les oreilles sont facilement accessibles. Plupart des souris sont oreille avec étiquette d’identification individuelle au moment du sevrage. Cela nécessite un traitement doux en raison de leur taille plus petite et plus fragile. Certaines souris sont moins susceptibles de se battre si les membres postérieurs peuvent reposer sur une surface comme le sommet d’une cage ou un comptoir.
Déterminer les coups d’oreille nécessaires pour correspondre au nombre expérimental de l’animal ou pour l’identifier dans une cage.
1. Poinçons seront des entailles ou des trous selon le code utilisé.
2. Le dernier numéro sur la marque auriculaire est souvent utilisé comme l’identificateur de perforation d’oreille quand c’est la méthode secondaire d’identification.
3. Si les animaux sont sur une étude à court terme dans des groupes stables de cage, ils peuvent être données des numéros séquentiels. Cela se fait souvent quand il n’y a aucun présent de marques auriculaires.
Faire l’oreille coup de poing.
1. Pour faire l’entaille, le poinçon est placé sur le bord du pavillon de l’oreille.
2. Pour faire un trou, placez l’oreille dans le punch pour que le trou du poinçon est placé loin de la marge de pinna dans la position désirée.
3. Appliquer une pression du pouce ou poinçon de levier ou de fermer le ciseaux punch rapidement et fermement pour couper à travers la peau de l’oreille.
4. Soulevez doucement le poinçon de l’oreille lorsque vous utilisez les coups de pouce ou d’un levier. Ouvrez le punch de ciseaux pour enlever de l’oreille.
5. Évitez de traction ou de torsion le punch pour éviter le déchirement de l’oreille.
6. Coups de poing terne après un temps. Si un coup de poing ne pas couper à travers l’oreille, le poinçon de sortie et sélectionnez un nouveau poinçon d’oreille. Repositionner le nouveau poinçon au même endroit.
Nettoyez le poing après chaque utilisation.
1. Tous les types de coup de poing seront alourdira si stérilisés à l’autoclave. Il est recommandé qu’ils être nettoyées avec un désinfectant et rincés avec de l’alcool. Séchez-les soigneusement pour éviter l’oxydation.
2. Poinçons d’oreille à utiliser pour l’ACP sont systématiquement trempées pendant 3 minutes dans une solution pour enlever les résidus ADN ou ARN. Avant utilisation, ils sont rincés dans de l’alcool et essuyés.

La figure 1. Oreille perforation chez la souris à l’aide ciseaux poinçon.

2. identification de balise oreille

Marques auriculaires personnalisés peuvent être commandés de fabricants avec codes alphabétique ou numériques, qui permet la différenciation des souches de souris ou des enquêteurs. Les marques auriculaires sont possibles de métal ou de plastique.

Sélectionnez les marques auriculaires appropriées pour les animaux d’être identifié. Il y a plusieurs styles d’applicateurs disponibles auprès de fabricants de balise oreille. N’oubliez pas de commander l’applicateur qui est pour la taille spécifique et le style des marques auriculaires utilisées.
Doucement le support en carton lui enlever une étiquette et l’orienter dans l’applicateur afin que l’extrémité avec le trou est placée au-dessus de la zone crantée de l’applicateur. L’extrémité pointue de la balise doit être en face de l’encoche.
Retenir l’animal afin que les oreilles sont facilement accessibles. Animaux peuvent être moins susceptibles de se battre si les membres postérieurs peuvent reposer sur une surface, comme un haut de cage ou un comptoir.
Positionner correctement la marque auriculaire pour le placement.
1. Positionner le point de la marque auriculaire lorsque profondément dans la concha de l’oreille que possible, si les numéros des marques face au dos de l’animal.
2. Pour avoir des numéros d’étiquettes oreille vers le nez de l’animal, placez le point de la balise à la base de la Penne sur l’arrière de l’oreille.
Appliquer la balise.
1. Bien ferme la squeeze l’applicateur. La marque auriculaire perceront le verrouillage et les oreilles ensemble.
2. Relâchez l’applicateur et l’oreille tagged va tomber hors de l’applicateur.

La figure 2. Une souris avec une étiquette d’oreille qui est correctement positionnée sur le pavillon.

Enlever les marques auriculaires métalliques.
NOTE : À l’occasion, étiquettes d’oreille métal peuvent causer une irritation et un gonflement de l’oreille. L’enflure et l’irritation souvent conduit à des infections de la Penne. Le traitement devrait inclure le retrait de l’étiquette ; Toutefois, en cas d’infection ou irritation sévère, l’animal peut doivent être anesthésiés.
1. Enlever les débris d’autour de la balise avec un coton-tige imbibé d’une solution antiseptique.
2. Couper dans la partie supérieure de la boucle de la balise de bord à bord avec coupe-fil. Ne pas couper à travers la surface plane, car cela va compresser la balise, pincer l’oreille et causer d’autres dommages.
3. Évitez d’appliquer le couple pendant la coupe pour éviter la déchirure de l’oreille.
Utilisez une pince hémostatique pour écarter les extrémités coupées de la marque auriculaire part.
1. Guidez la marque auriculaire à travers- et à l’extérieur de l’oreille à l’aide d’une pince hémostatique. Réduire les traumatismes en évitant l’élargissement du trou perçant et glisser la balise dehors afin que l’extrémité sertie ne passe pas par l’oreille.
2. Une fois que la balise est partie, nettoyer l’oreille avec un bâtonnet de coton imbibé d’antiseptique.
3. S’il y a un écoulement purulent de l’oreille, suivi médical peut être nécessaire et consultation avec le personnel vétérinaire pour évaluation est recommandée.

Une pièce d’identité des animaux de laboratoire est une exigence fondamentale de la recherche biomédicale. Il est essentiel pour les enquêteurs d’être capable de distinguer entre les individus, afin que l’animal correct est utilisé pour la collecte de données et les procédures expérimentales. Les scientifiques ont mis au point plusieurs méthodes permanentes et temporaires, afin d’identifier les animaux de laboratoire individuels. Ici, nous allons discuter les plus couramment utilisés deux méthodes : oreille de marquage et de perforation d’oreille.

Avant de plonger dans la procédure pour la perforation d’oreille, nous allons introduire le code de poinçon d’oreille, les types de coups de poing disponibles et discuter des avantages et des inconvénients de cette méthode. Comme vous l’avez peut-être deviné, perforation d’oreille consiste à perforer un trou ou une entaille dans l’oreille externe de l’animal ou de pinna. Afin de normaliser cette méthode, oreille universelle punch codes ont été élaborés.

Selon la position, encoches sur l’oreille droite représentent des chiffres uniques, comme le 1, 3 et 5, et une encoche double représente 2. En utilisant différentes combinaisons de ces encoches, puis en additionnant la valeur pour chaque encoche, vous pouvez étiqueter l’animal entre 1 et 9. De même, sur l’oreille gauche, les encoches mêmes représentent les dizaines. Et encore une fois, les différentes combinaisons couvrira l’ordre de 10 à 90. Trous dans le centre de la droite et gauche pinna représentent respectivement de 100 et 200. Et les deux trous indiquent 300. Donc, par exemple, si vous souhaitez numéroter l’animal 173, il faut percer un trou dans le centre de l’oreille droite pour 100, trois encoches en l’an gauche en additionnant le total à 70 et une seule encoche dans l’oreille droite haut représentant le lieu de l’unité « trois ».

Maintenant, nous allons discuter les trois styles d’oreille disponible dans le commerce poinçons : le poinçon de ciseaux et le poinçon de pouce le punch de levier. Chacun d'entre eux a leurs avantages et leurs inconvénients.

Le poinçon de pouce nécessite un mouvement de pincement, mais est assez petit pour tenir dans un tube Eppendorf afin que les tissus de l’oreille peuvent percevoir plus facilement. D’un point de vue ergonomique, le punch de levier est facile à utiliser que le poinçon de pouce, surtout pour les oreilles plus épais des rats âgés. Le poinçon de ciseaux n’exige pas un mouvement de pincement, évitant ainsi les blessures et la fatigue du canal carpien.

En dépit d’être une méthode rapide et simple de l’identification, la perforation d’oreille a quelques limitations. Tout d’abord, le code de poinçon oreille susmentionné a une limite supérieure de 399, qui peuvent limiter l’utilisation de cette méthode dans certaines études à grande échelle. Une autre limitation est que la plupart des animaux doivent être saisies à la peau du cou afin de pouvoir pour lire le code, ce qui augmente les temps qu’ils sont manipulés. Comme rats âge, la peau de leurs oreilles s’épaissit, et il est difficile d’effectuer la perforation d’oreille sans causer une détresse importante à l’animal. Par conséquent, il est préférable d’effectuer les poinçons de l’oreille chez le jeune rat comme ils sont sevrés. Pour les rats adultes nécessitant une identification, l’utilisation de l’anesthésie inhalant considérer lors de l’exécution des poinçons de l’oreille.

Maintenant que vous avez quelques informations générales sur l’oreille coup de code et les types d’outils disponibles, nous allons apprendre comment effectuer cette technique chez les souris.

Avant de commencer la procédure, il est recommandé que le poinçonnage outils être nettoyés avec une solution désinfectante, rincés avec de l’alcool et bien séchées. Évitez autoclavage les poinçons de l’oreille, car il s’émoussera finit par eux.

Pour commencer, décider le code expérimental de l’animal et le punch à servir. Nous allons utiliser le code 173 et ciseaux punch comme exemples ici. La même procédure est applicable à tout autre code ou punch. Lorsque vous êtes prêt, retenir l’animal en le saisissant à la peau du cou pour que les oreilles sont facilement accessibles. Commencez avec le trou pour 100. Placer l’oreille droite dans le punch de sorte que l’orifice du poinçon est placé loin de la marge de pinna. Ensuite, appliquer une pression pour fermer le ciseaux rapidement et fermement pour couper à travers la peau. Ensuite, relâchez le punch et retirez-le de l’oreille. Évitez de traction ou de torsion le punch pour éviter le déchirement de l’oreille. Pour faire une entaille, placer le poinçon sur le bord du pavillon de l’oreille à l’endroit correct, dans ce cas en haut de l’oreille droite pour les « trois » à la place d’unité du code et faire la même chose - appliquer une pression ferme et rapide et puis ouvrez le ciseaux pour l’enlever. Répétez la même procédure sur l’autre oreille pour percer trois crans - deux pour « 20 » près de l’angle externe et l’autre pour « 50 » près de l’angle interne, totalisant le code pour « 70 ».

Confirmer que le bon code a été frappé avant d’ajouter l’arrière animal dans la cage. Encore une fois, nettoyez le punch avec un désinfectant, rincer avec de l’alcool et séchez-le soigneusement pour éviter l’oxydation.

Maintenant, passons à étiqueter les oreille, qui est une autre méthode bon marchée et facile à réaliser pour l’identification individuelle des souris et des rats. Il existe une variété de marques auriculaires disponibles dans le commerce. Ceux-ci incluent : balises qui ont une série de chiffres et/ou de lettres gravées dessus et des étiquettes en plastique avec des caractères ou des codes à barres sur des arrière-plans colorés en métal.

Un inconvénient des étiquettes métalliques, c’est qu’il est souvent nécessaire ramasser de l’animal afin de pouvoir pour lire le code. En revanche, les étiquettes en plastique sont faciles à lire sans avoir à manipuler les animaux. Un autre avantage d’étiquettes en plastique est leur compatibilité avec la formation image de MRI. Tandis que les balises de fournissent un identificateur individuel pour une souris ou un rat, ils ne sont pas infaillibles. Tags peuvent être perdus à cause de trop de toilettage, de dermatite ou d’infection, self-traumatisme infligé d’essayer de supprimer les balises en raison de l’intolérance, combats et comportement agressif. Si plusieurs animaux sont logés dans la même cage, la perte d’une marque auriculaire peut être gênante. Pour contourner ce problème, une forme secondaire d’identification comme un code de poinçon sur l’oreille opposée de la balise doit être utilisée. Une installation doit normaliser tant le choix de l’oreille à baliser et le code à utiliser sur l’autre oreille, et tous les codes doivent être indiquées sur la carte de la cage.

Maintenant nous allons apprendre comment appliquer correctement une marque auriculaire, comme positionnement incorrect peut avoir plusieurs conséquences fâcheuses. Après l’application, nous discuterons aussi retrait de l’étiquette d’oreille, qui est généralement pratiquée dans le cas d’une infection due à l’application de la balise.

La première étape consiste à sélectionner une balise appropriée pour les animaux d’être identifié. Ici, nous allons utiliser une étiquette en métal pour démontrer la procédure sur des souris. N’oubliez pas de commander l’applicateur adapté à la taille spécifique et le style des marques auriculaires utilisées. Délicatement enlever l’étiquette du support en carton et l’orienter dans l’applicateur afin que l’extrémité avec le trou est placée au-dessus de la zone crantée de l’applicateur. L’extrémité pointue de la balise doit être en face de l’encoche.

Lorsque vous êtes prêt à appliquer la marque auriculaire, retenir l’animal afin que les oreilles sont facilement accessibles. Animaux peuvent être moins susceptibles de se battre si les membres postérieurs peuvent reposer sur une surface comme le haut de la cage ou un comptoir. Une fois que l’animal est immobilisé, positionner le point de la marque auriculaire profondément dans la concha de l’oreille donc les numéros des marques face au dos de l’animal. Presser fermement l’applicateur fermé ; la marque auriculaire perceront le verrouillage et les oreilles ensemble. Lorsque vous relâchez, l’oreille tagged va tomber hors de l’applicateur. Confirmer que la balise a été correctement positionnée et appliquée. Si vous voulez attribuer des numéros d’étiquettes oreille vers le nez de l’animal, placez le point de la balise à la base de la Penne sur l’arrière de l’oreille et presser pour verrouiller la balise en place.

Tags doivent être placées telles que ne pas provoquer un virage dans l’oreille, gêner la mobilité de l’animal ou attraper sur n’importe quelle partie de la mise en cage. Si l’étiquette est placée trop près du bord de l’oreille, il peut facilement être déchiré. Si placé trop près de la tête, la peau de la région du cou peut attraper dans la balise, créant une irritation, douleur et mouvement restreint, qui peut mener à l’auto-trauma. Occasionnellement, étiquettes métalliques peuvent causer une irritation et un gonflement de l’oreille. Ceci mène souvent à des infections de la Penne, et le traitement immédiat devrait inclure l’élimination de la balise.

Afin de supprimer la balise, humidifier un coton-tige avec une solution antiseptique et utilisez-le pour enlever les débris d’autour de la balise. Dans les cas graves d’infection, l’animal peut doivent être anesthésiés. Puis, à l’aide de pinces coupantes, coupé dans la partie supérieure de la boucle de la balise de bord à bord. Ce qui est important, ne pas couper à travers la surface plane qui va compresser la balise, pincer l’oreille et causer des dommages à l’oreille. À l’aide d’une pince hémostatique, guidez la marque auriculaire dans et hors de l’oreille. Glisser la balise dehors pour que l’extrémité sertie ne passe pas par causant des traumatismes et l’élargissement du trou perçant. Une fois que la balise est partie, nettoyer l’oreille avec un bâtonnet applicateur coton imbibé antiseptique et regagner sa cage de l’animal. S’il y a un écoulement purulent de l’oreille, suivi médical peut être nécessaire et consultation avec le personnel vétérinaire pour évaluation est recommandée.

Maintenant que vous savez comment marquer les animaux de laboratoire à l’aide de poinçons et marques auriculaires, passons en revue quelques expériences dans lesquelles ces méthodes peuvent être utiles. Un des principaux avantages de l’utilisation de code de perforation d’oreille sont que les coups de poing peuvent doubler comme des échantillons de tissus pour le génotypage, réduisant ainsi le stress aux animaux dus à la manutention de répéter. Toutefois, si vous envisagez d’utiliser les coups de poing pour le prélèvement d’échantillons PCR, n’oubliez pas tout d’abord tremper l’appareil dans une solution décontaminant surface pendant au moins 3 minutes supprimer résiduelle de l’ADN ou d’ARN, puis rincez avec de l’alcool avant utilisation.

Importance de la technique d’identification augmente encore si l’expérience est durable sur plusieurs jours. Par exemple, dans cette expérience les scientifiques ont marqué tout d’abord les animaux à l’aide d’une étiquette en métal, et puis ils ont injecté le nerf sciatique avec une suspension de cellules tumorales transgéniques exprimant des protéines de la luciférase. Ensuite, afin de quantifier la progression du cancer, ils ont photographié les animaux à l’aide de bioluminescence à un, dix et dix-huit jours post injection.

Vous avez regardé juste présentation de JoVE démontrant les deux couramment utilisé des méthodes d’identification chez les rongeurs : étiquettes aux oreilles et les oreilles des coups de poing. Vous devez maintenant comprendre l’oreille punch code, connaître les différents types de marques auriculaires rongeurs disponibles dans le commerce et devrait être en mesure d’effectuer avec précision ces procédures sans causer de gêne animal importante.

Rappelez-vous, chaque technique a leurs avantages et leurs inconvénients, qui doivent être examinés en relation avec vos besoins expérimentaux. En plus d’examiner le coût, la facilité de la technique et le niveau de douleur aux animaux doivent être certaines considérations primaires lors du choix de la méthode d’identification appropriées. Comme toujours, Merci pour regarder !

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Applications and Summary

Lors du choix de la méthode d’identification appropriées, de nombreux facteurs doivent être délibérés. Chaque technique a des avantages et des inconvénients qui doivent être examinées en fonction des besoins expérimentaux. Alors que les coûts doivent être soupesés avec d’autres facteurs, la simplicité de la technique et le niveau d’inconfort pour les animaux devraient être les principales considérations. ^{3, 4}

Oreille de poinçonnage/découpe est couramment utilisé dans les souris et les rats parce qu’il y a peu de frais, et la procédure est facile à faire. Il y a un nombre limité de codes qui peuvent être utilisés, avec la plupart des codes ayant un plafond de 100 à 399. Pour lire les codes de perforation d’oreille, la plupart des animaux doivent être saisies à la peau du cou. Toutefois, les coups de poing peuvent doubler comme des échantillons de tissus pour le génotypage de la PCR, qui permet pour l’identification et l’échantillonnage du génotype doit s’accomplir en même temps, provoquant ainsi, moins de stress aux animaux des manipulation répétée. ⁵

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References

Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
Cover, C.E., Keenan, C.M., and Bettinger, G.E. 1989. Ear tag-induced Staphylococcus infection in mice. Laboratory Animals. 23:229-233.
Kitagaki, M., Suwa, T., Yanagi, K., and Shiratori, K. 2003. Auricle chondritis in young ear-tagged Crj:CD(SD)IGS rats. Laboratory Animals. 37:249-253.
Kasanen, H.E., Voipio, H.M., Leskinen, H., Luodonpää, M., and Nevalainen, T.O. 2011. Comparison of ear tattoo, ear notch and microtattoo in rats undergoing cardiovascular telemetry. Laboratory Animals. 45:154-159.
Dalhborn, K., Bugnon, P., Nevalainen, T., Raspa, M., Verbost, P., and Spangenberg, E. 2013. Report of the Federation of European Laboratory Animal Science Associations Working Group on animal identification. Laboratory Animals. 47:2-11.
Waalkes, M.P., Rehm, S., Kasprzak, K.S., et al. 1987. Inflammatory, proliferative, and neoplastic lesions at the site of metallic identification ear tags in Wistar [Crl:(WI)BR] rats. Cancer Research. 47:2445-2450.

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Une pièce d’identité des animaux de laboratoire est une exigence fondamentale de la recherche biomédicale. Il est essentiel pour les enquêteurs d’être capable de distinguer entre les individus, afin que l’animal correct est utilisé pour la collecte de données et les procédures expérimentales. Les scientifiques ont mis au point plusieurs méthodes permanentes et temporaires, afin d’identifier les animaux de laboratoire individuels. Ici, nous allons discuter les plus couramment utilisés deux méthodes : oreille de marquage et de perforation d’oreille.

Avant de plonger dans la procédure pour la perforation d’oreille, nous allons introduire le code de poinçon d’oreille, les types de coups de poing disponibles et discuter des avantages et des inconvénients de cette méthode. Comme vous l’avez peut-être deviné, perforation d’oreille consiste à perforer un trou ou une entaille dans l’oreille externe de l’animal ou de pinna. Afin de normaliser cette méthode, oreille universelle punch codes ont été élaborés.

Selon la position, encoches sur l’oreille droite représentent des chiffres uniques, comme le 1, 3 et 5, et une encoche double représente 2. En utilisant différentes combinaisons de ces encoches, puis en additionnant la valeur pour chaque encoche, vous pouvez étiqueter l’animal entre 1 et 9. De même, sur l’oreille gauche, les encoches mêmes représentent les dizaines. Et encore une fois, les différentes combinaisons couvrira l’ordre de 10 à 90. Trous dans le centre de la droite et gauche pinna représentent respectivement de 100 et 200. Et les deux trous indiquent 300. Donc, par exemple, si vous souhaitez numéroter l’animal 173, il faut percer un trou dans le centre de l’oreille droite pour 100, trois encoches en l’an gauche en additionnant le total à 70 et une seule encoche dans l’oreille droite haut représentant le lieu de l’unité « trois ».

Maintenant, nous allons discuter les trois styles d’oreille disponible dans le commerce poinçons : le poinçon de ciseaux et le poinçon de pouce le punch de levier. Chacun d'entre eux a leurs avantages et leurs inconvénients.

Le poinçon de pouce nécessite un mouvement de pincement, mais est assez petit pour tenir dans un tube Eppendorf afin que les tissus de l’oreille peuvent percevoir plus facilement. D’un point de vue ergonomique, le punch de levier est facile à utiliser que le poinçon de pouce, surtout pour les oreilles plus épais des rats âgés. Le poinçon de ciseaux n’exige pas un mouvement de pincement, évitant ainsi les blessures et la fatigue du canal carpien.

En dépit d’être une méthode rapide et simple de l’identification, la perforation d’oreille a quelques limitations. Tout d’abord, le code de poinçon oreille susmentionné a une limite supérieure de 399, qui peuvent limiter l’utilisation de cette méthode dans certaines études à grande échelle. Une autre limitation est que la plupart des animaux doivent être saisies à la peau du cou afin de pouvoir pour lire le code, ce qui augmente les temps qu’ils sont manipulés. Comme rats âge, la peau de leurs oreilles s’épaissit, et il est difficile d’effectuer la perforation d’oreille sans causer une détresse importante à l’animal. Par conséquent, il est préférable d’effectuer les poinçons de l’oreille chez le jeune rat comme ils sont sevrés. Pour les rats adultes nécessitant une identification, l’utilisation de l’anesthésie inhalant considérer lors de l’exécution des poinçons de l’oreille.

Maintenant que vous avez quelques informations générales sur l’oreille coup de code et les types d’outils disponibles, nous allons apprendre comment effectuer cette technique chez les souris.

Avant de commencer la procédure, il est recommandé que le poinçonnage outils être nettoyés avec une solution désinfectante, rincés avec de l’alcool et bien séchées. Évitez autoclavage les poinçons de l’oreille, car il s’émoussera finit par eux.

Pour commencer, décider le code expérimental de l’animal et le punch à servir. Nous allons utiliser le code 173 et ciseaux punch comme exemples ici. La même procédure est applicable à tout autre code ou punch. Lorsque vous êtes prêt, retenir l’animal en le saisissant à la peau du cou pour que les oreilles sont facilement accessibles. Commencez avec le trou pour 100. Placer l’oreille droite dans le punch de sorte que l’orifice du poinçon est placé loin de la marge de pinna. Ensuite, appliquer une pression pour fermer le ciseaux rapidement et fermement pour couper à travers la peau. Ensuite, relâchez le punch et retirez-le de l’oreille. Évitez de traction ou de torsion le punch pour éviter le déchirement de l’oreille. Pour faire une entaille, placer le poinçon sur le bord du pavillon de l’oreille à l’endroit correct, dans ce cas en haut de l’oreille droite pour les « trois » à la place d’unité du code et faire la même chose - appliquer une pression ferme et rapide et puis ouvrez le ciseaux pour l’enlever. Répétez la même procédure sur l’autre oreille pour percer trois crans - deux pour « 20 » près de l’angle externe et l’autre pour « 50 » près de l’angle interne, totalisant le code pour « 70 ».

Confirmer que le bon code a été frappé avant d’ajouter l’arrière animal dans la cage. Encore une fois, nettoyez le punch avec un désinfectant, rincer avec de l’alcool et séchez-le soigneusement pour éviter l’oxydation.

Maintenant, passons à étiqueter les oreille, qui est une autre méthode bon marchée et facile à réaliser pour l’identification individuelle des souris et des rats. Il existe une variété de marques auriculaires disponibles dans le commerce. Ceux-ci incluent : balises qui ont une série de chiffres et/ou de lettres gravées dessus et des étiquettes en plastique avec des caractères ou des codes à barres sur des arrière-plans colorés en métal.

Un inconvénient des étiquettes métalliques, c’est qu’il est souvent nécessaire ramasser de l’animal afin de pouvoir pour lire le code. En revanche, les étiquettes en plastique sont faciles à lire sans avoir à manipuler les animaux. Un autre avantage d’étiquettes en plastique est leur compatibilité avec la formation image de MRI. Tandis que les balises de fournissent un identificateur individuel pour une souris ou un rat, ils ne sont pas infaillibles. Tags peuvent être perdus à cause de trop de toilettage, de dermatite ou d’infection, self-traumatisme infligé d’essayer de supprimer les balises en raison de l’intolérance, combats et comportement agressif. Si plusieurs animaux sont logés dans la même cage, la perte d’une marque auriculaire peut être gênante. Pour contourner ce problème, une forme secondaire d’identification comme un code de poinçon sur l’oreille opposée de la balise doit être utilisée. Une installation doit normaliser tant le choix de l’oreille à baliser et le code à utiliser sur l’autre oreille, et tous les codes doivent être indiquées sur la carte de la cage.

Maintenant nous allons apprendre comment appliquer correctement une marque auriculaire, comme positionnement incorrect peut avoir plusieurs conséquences fâcheuses. Après l’application, nous discuterons aussi retrait de l’étiquette d’oreille, qui est généralement pratiquée dans le cas d’une infection due à l’application de la balise.

La première étape consiste à sélectionner une balise appropriée pour les animaux d’être identifié. Ici, nous allons utiliser une étiquette en métal pour démontrer la procédure sur des souris. N’oubliez pas de commander l’applicateur adapté à la taille spécifique et le style des marques auriculaires utilisées. Délicatement enlever l’étiquette du support en carton et l’orienter dans l’applicateur afin que l’extrémité avec le trou est placée au-dessus de la zone crantée de l’applicateur. L’extrémité pointue de la balise doit être en face de l’encoche.

Lorsque vous êtes prêt à appliquer la marque auriculaire, retenir l’animal afin que les oreilles sont facilement accessibles. Animaux peuvent être moins susceptibles de se battre si les membres postérieurs peuvent reposer sur une surface comme le haut de la cage ou un comptoir. Une fois que l’animal est immobilisé, positionner le point de la marque auriculaire profondément dans la concha de l’oreille donc les numéros des marques face au dos de l’animal. Presser fermement l’applicateur fermé ; la marque auriculaire perceront le verrouillage et les oreilles ensemble. Lorsque vous relâchez, l’oreille tagged va tomber hors de l’applicateur. Confirmer que la balise a été correctement positionnée et appliquée. Si vous voulez attribuer des numéros d’étiquettes oreille vers le nez de l’animal, placez le point de la balise à la base de la Penne sur l’arrière de l’oreille et presser pour verrouiller la balise en place.

Tags doivent être placées telles que ne pas provoquer un virage dans l’oreille, gêner la mobilité de l’animal ou attraper sur n’importe quelle partie de la mise en cage. Si l’étiquette est placée trop près du bord de l’oreille, il peut facilement être déchiré. Si placé trop près de la tête, la peau de la région du cou peut attraper dans la balise, créant une irritation, douleur et mouvement restreint, qui peut mener à l’auto-trauma. Occasionnellement, étiquettes métalliques peuvent causer une irritation et un gonflement de l’oreille. Ceci mène souvent à des infections de la Penne, et le traitement immédiat devrait inclure l’élimination de la balise.

Afin de supprimer la balise, humidifier un coton-tige avec une solution antiseptique et utilisez-le pour enlever les débris d’autour de la balise. Dans les cas graves d’infection, l’animal peut doivent être anesthésiés. Puis, à l’aide de pinces coupantes, coupé dans la partie supérieure de la boucle de la balise de bord à bord. Ce qui est important, ne pas couper à travers la surface plane qui va compresser la balise, pincer l’oreille et causer des dommages à l’oreille. À l’aide d’une pince hémostatique, guidez la marque auriculaire dans et hors de l’oreille. Glisser la balise dehors pour que l’extrémité sertie ne passe pas par causant des traumatismes et l’élargissement du trou perçant. Une fois que la balise est partie, nettoyer l’oreille avec un bâtonnet applicateur coton imbibé antiseptique et regagner sa cage de l’animal. S’il y a un écoulement purulent de l’oreille, suivi médical peut être nécessaire et consultation avec le personnel vétérinaire pour évaluation est recommandée.

Maintenant que vous savez comment marquer les animaux de laboratoire à l’aide de poinçons et marques auriculaires, passons en revue quelques expériences dans lesquelles ces méthodes peuvent être utiles. Un des principaux avantages de l’utilisation de code de perforation d’oreille sont que les coups de poing peuvent doubler comme des échantillons de tissus pour le génotypage, réduisant ainsi le stress aux animaux dus à la manutention de répéter. Toutefois, si vous envisagez d’utiliser les coups de poing pour le prélèvement d’échantillons PCR, n’oubliez pas tout d’abord tremper l’appareil dans une solution décontaminant surface pendant au moins 3 minutes supprimer résiduelle de l’ADN ou d’ARN, puis rincez avec de l’alcool avant utilisation.

Importance de la technique d’identification augmente encore si l’expérience est durable sur plusieurs jours. Par exemple, dans cette expérience les scientifiques ont marqué tout d’abord les animaux à l’aide d’une étiquette en métal, et puis ils ont injecté le nerf sciatique avec une suspension de cellules tumorales transgéniques exprimant des protéines de la luciférase. Ensuite, afin de quantifier la progression du cancer, ils ont photographié les animaux à l’aide de bioluminescence à un, dix et dix-huit jours post injection.

Vous avez regardé juste présentation de JoVE démontrant les deux couramment utilisé des méthodes d’identification chez les rongeurs : étiquettes aux oreilles et les oreilles des coups de poing. Vous devez maintenant comprendre l’oreille punch code, connaître les différents types de marques auriculaires rongeurs disponibles dans le commerce et devrait être en mesure d’effectuer avec précision ces procédures sans causer de gêne animal importante.

Rappelez-vous, chaque technique a leurs avantages et leurs inconvénients, qui doivent être examinés en relation avec vos besoins expérimentaux. En plus d’examiner le coût, la facilité de la technique et le niveau de douleur aux animaux doivent être certaines considérations primaires lors du choix de la méthode d’identification appropriées. Comme toujours, Merci pour regarder !

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