Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Lab Animal Research

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 
Click here for the English version

זיהוי מכרסמים I

Overview

מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג'י, אר-אל-ג'י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN

דרישה בסיסית של מחקר ביו-רפואי היא זיהוי נכון של חיות מחקר. זה חיוני כי החיה הנכונה מנוצלת עבור נהלים ואיסוף נתונים. עכברי מעבדה וחולדות ניתן לזהות עם השיטות הקבועות הבאות: תגי אוזניים, קודי ניקוב האוזן, השתלת שבבים, קעקועי זנב לעכברים בוגרים, וקעקועי בוהן עבור יילודים. שיטות זמניות של צבעים ועטים סימון יכול לשמש גם עבור מחקרים חריפים. וידאו זה מכסה את ההיבטים הטכניים של תיוג אוזניים וחבטות לעכברים וחולדות, כמו גם את היתרונות של כל אחד ביחס לסוג המחקר שנערך על בעלי החיים. ידע בטכניקות הריסון הידניות הבסיסיות עבור כל בעל חיים (מכוסה בסרטון נפרד) נדרש כדי ששיטות זיהוי אלה יושגו כראוי.

Principles

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

תגי אוזניים הם זולים וקלים לביצוע, וכתוצאה מכך משמשים בדרך כלל לזיהוי של עכברים וחולדות בודדים. ניתן להתאים אישית תגים עם סידרה של מספרים ו/או אותיות. הקצאת קודים ספציפיים לזן עכבר / חולדה, או לחוקר עיקרון (PI), מסייעים בניהול רשומות ומסדי נתונים, במיוחד במושבות רבייה גדולות שבהן ישנם זנים מרובים ו- PIs. בנוסף, ישנם מגוון של תגים זמינים מסחרית. תגי מתכת יש תווים חקוקים עליהם. למרות תחריט זה ברור, בעת עבודה עם עכבר יש צורך לעתים קרובות להרים אותו כדי לקרוא את הקוד על התגים בשל הגודל הקטן של התגים. אפשרויות אחרות הן תגי פלסטיק עם מספרים ו/או אותיות על רקעים בצבעים בהירים, או תגי פלסטיק עם ברקוד על המשטח הקדמי. שתי האפשרויות הללו מאפשרות לקרוא את התגים מבלי לטפל בבעלי החיים. יתרון נוסף לתגי פלסטיק הוא התאימות שלהם להדמיית MRI.

המיקום של התג על האוזן הוא קריטי, כמו מיקום לא תקין יכול להיות כמה השלכות מצערות. תגיות חייבות להיות ממוקמות כך שהם לא גורמים עיקול בפינה, להפריע לניידות של החיה, או לתפוס על כל חלק של caging. אם התג ממוקם קרוב מדי לקצה האוזן זה יכול בקלות להיקרע מרקמת pinna. אם ממוקם קרוב מדי לראש, העור של אזור הצוואר יכול לתפוס את התג, אשר ייצור גירוי, כאב, ותנועה מוגבלת. זה יכול להוביל לטראומה עצמית מן החיה מגרדת את התג, קורע אותו מהאוזן, או מקבל רגל נתפסה בתג. הכשרה למיקום וטכניקה נכונה היא חיונית. 1

בעוד תגיות לספק מזהים בודדים עבור עכברים או חולדות, הם אינם טועים. תגיות יכול ללכת לאיבוד עקב לחימה, טיפוח יתר, דרמטיטיס בזנים רגישים, זיהום, או טראומה עצמית. 2 חולדות מבוגרות בפרט סובלניות פחות לתגי אוזניים ולעתים קרובות מסירות אותן, וגורמות לטראומה עצמית. התנהגות הרבייה האגרסיבית יותר בחולדות יכולה גם להוביל לתג אוזן שנקרע מהפינה. אם עכברים או חולדות משויכים או שוכנים בקבוצה, אובדן תג אוזן על יותר מחיה אחת יכול להיות בעייתי. כדי לעקוף בעיה זו, יש להשתמש בצורה משנית של זיהוי - כגון קוד ניקוב המשמש על האוזן שממול לתג, או קעקוע זנב או בוהן- יש להשתמש. מתקן צריך לתקנן הן את בחירת האוזן להיות מתויג ואת הקוד שישמש על האוזן השנייה או על בהונות. כל הקודים צריכים להיות מסומנים על כרטיס הכלוב.

השימוש בקודי ניקוב האוזן מאפשר שיטת זיהוי מהירה ופשוטה, אך לטכניקה יש מגבלות. קודים נפוצים יש גבול עליון עבור מספרים זמינים לשימוש, בדרך כלל לכל היותר של 100 עד 399. כדי לקרוא את קודי אגרוף האוזן, רוב החיות חייבות להיאחז בקשקוש. האגרופים יכולים להכפיל כמו דגימות רקמה עבור genotyping PCR, המאפשר זיהוי בעלי חיים ודגימת גנוטיפ להתבצע בו זמנית. התוצאה היא פחות מתח לבעלי החיים מטיפול חוזר. 3

ישנם שלושה סגנונות של אגרופים באוזן: אגרוף מספריים, אגרוף האגודל, ואת אגרוף הידית. למרות שכולם יעילים באותה מידה, יש יתרונות וחסרונות לכל אחד מהם. לדוגמה, ככל שחולדות מזדקנות, עור אוזניהן מתעבה. עדיף לבצע את אגרופי האוזן על חולדות צעירות כפי שהם נמות. עבור חולדות מבוגרות הדורשות זיהוי, יש לשקול את השימוש בהרדמה במשאף. מבחינה ארגונומית, האגרוף ברמה קל יותר לשימוש מאשר אגרוף אגודל, במיוחד עבור האוזניים העבות של חולדות מבוגרות. עם זאת, שני האגרופים האלה דורשים תנועת צביטה של האצבעות. לאגרוף המספריים יש את היתרון הארגונומי של לא דורש תנועת צביטה, ובכך למנוע עייפות מנהרה שורש כף היד ופציעה. לעומת זאת, אגרוף האגודל הוא יתרון לאיסוף דגימות genotyping, כמו טיפים עם חומר הרקמה יתאימו צינור אפנדורף. סגנון האגרוף לשימוש צריך להיקבע על ידי האנשים המבצעים את המשימה ואת גיל החולדות.

עבור חולדות, למרות תגי מתכת משמשים לרוב, מחקרים הראו כי יש השלכות לשימוש בהם. דלקת, שינויים ניאופפלסטיים, ואפילו כאב כרוני נצפו בבעלי חיים שלבשו תגי אוזני מתכת במשך מספר חודשים. 3,4,5,6 יש להסיר מיד את התגים מהאוזן אם יש תגובה שלילית, ויש לבדוק ולטפל בפציעה הבאה, במידת הצורך, על ידי הצוות הווטרינרי.

טיפול נאות ותחזוקה של אגרופים יאריכו את השימוש בהם. כל סוגי האגרופים ישעממו אם autoclaved, ולכן מומלץ לנקות אותם עם חומר חיטוי ולשטוף אותם עם אלכוהול. לאחר מכן, הם חייבים להיות מיובשים ביסודיות כדי למנוע חלודה. אם האגרופים משמשים PCR, הם צריכים להיות ספוגים במשך 3 דקות בפתרון שמסיר DNA שיורית או RNA. לפני השימוש הם שטופים באלכוהול וניגבים יבשים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. זיהוי אגרוף באוזן

קודי ניקוב האוזן פותחו כשיטה מהירה וזולה לתיוג בעלי חיים בודדים. ישנם שלושה סגנונות של אגרופים באוזן: אגרוף מספריים, אגרוף האגודל, ואת אגרוף הידית. האוזן הימנית של החיה משמשת למספרים חד-ספרתיים, האוזן השמאלית לעשרות, ואמצע האוזניים למאות.

  1. רסן את החיה כך שהאוזניים נגשות בקלות. רוב העכברים מתויגים באוזן לזיהוי אישי בגיגה. זה דורש טיפול עדין בשל גודלם הקטן והשברירי יותר. עכברים מסוימים נוטים פחות להיאבק אם הגפיים האחוריות יכולות לנוח על משטח כגון ראש כלוב או ראש דלפק.
  2. קבעו את אגרופי האוזן הדרושים כדי להתאים למספר הניסיוני של החיה או לזהות אותו בתוך כלוב.
    1. ניקובים יהיו חריצים או חורים בהתאם לקוד שבו נעשה שימוש.
    2. המספר האחרון בתג האוזן משמש לעתים קרובות כמזהה ניקוב האוזן כאשר זוהי שיטת הזיהוי המשנית.
    3. אם בעלי חיים נמצאים במחקר לטווח קצר בקבוצות כלוב יציבות, הם יכולים להינתן מספרים רציפים. זה נעשה לעתים קרובות כאשר אין תגי אוזניים נוכחים.
  3. הפוך את אגרוף האוזן.
    1. כדי לעשות חריץ, האגרוף ממוקם על קצה הפינה האוזן.
    2. כדי ליצור חור, מניחים את האוזן באגרוף כך שחור האגרוף ממוקם הרחק משולי הפינה במצב הרצוי.
    3. יש להפעיל לחץ על האגרוף של האגודל או הידית, או לסגור את אגרוף המספריים במהירות ובתקיפות כדי לחתוך את עור האוזן.
    4. הרם בעדינות את האגרוף מהאוזן בעת שימוש באגודל או במנוף הידית. פתח את אגרוף המספריים כדי להסיר אותו מהאוזן.
    5. הימנע משיכה או סיבוב האגרוף כדי למנוע קריעת האוזן.
    6. אגרופים עושים משעמם אחרי פעם. אם אגרוף לא מצליח לחתוך דרך האוזן, לשחרר את האגרוף ולבחור אגרוף אוזן חדשה. מקם מחדש את האגרוף החדש באותה נקודה.
  4. נקו את האגרופים לאחר כל שימוש.
    1. כל סוגי האגרוף יהיו משעממים אם יעבדו אוטומטית. מומלץ לנקות אותם בחומר חיטוי ולשטוף אותם באלכוהול. ייבשו אותם ביסודיות כדי למנוע חלודה.
    2. אגרופים באוזן שישמשו ל- PCR ספוגים באופן שגרתי במשך 3 דקות בתמיסה להסרת שאריות DNA או RNA. לפני השימוש הם שטופים באלכוהול וניגבים יבשים.

Figure 1
איור 1. חבטות אוזניים בעכברים באמצעות אגרוף מספריים.

2. זיהוי תג האוזן

תגי אוזניים מותאמים אישית ניתן להזמין מיצרני עם קודים אלפביתיים ו / או מספריים, המאפשר הבחנה של זני עכבר או חוקרים. תגי אוזניים יכולים להיות עשויים מתכת או פלסטיק.

  1. בחר את תגי האוזן המתאימים לזיהוי בעלי החיים. ישנם מספר סגנונות של מיישמים זמינים מיצרני תגי אוזניים. הקפד להזמין את ההחלה המיועדת לגודל ולסגנון הספציפיים של תגי האוזן הנמצאים בשימוש.
  2. מוציאים בעדינות תג ממחזיק הקרטון, ומכוונים אותו לתוך המימר כך שהקצה עם החור ממוקם מעל האזור החרוך של המימר. הקצה המחודר של התג צריך להיות מול החרץ.
  3. רסן את החיה כך שהאוזניים נגשות בקלות. בעלי חיים עשויים להיות פחות סביר להיאבק אם הגפיים האחוריות יכולות לנוח על משטח, כגון ראש כלוב או דלפק העליון.
  4. מקם כראוי את תג האוזן למיקום.
    1. מקם את נקודת תג האוזן עמוק ככל האפשר בקונצ'ה של האוזן, כך שמספרי התגים פונים לחלק האחורי של החיה.
    2. כדי שהמספרים של תג האוזן יפונים לאפו של החיה, מקמו את נקודת התג בבסיס הפינה בחלק האחורי של האוזן.
  5. החל את התג.
    1. תלחצו בחוזקה את המימר סגור. תג האוזן ינקב את האוזן וינעל יחד.
    2. שחררו את ההגשה והאוזן המתויגת תיפול מהמתיש.

Figure 2
איור 2. עכבר עם תג אוזן הממוקם כראוי על הפינה.

  1. הסר את תגי האוזן המתכתית.
    הערה: לעתים, תגי אוזניים ממתכת עלולים לגרום לגירוי ונפיחות באוזן. הנפיחות והגירוי מובילים לעתים קרובות לזיהומים של הפינה. הטיפול צריך לכלול את הסרת התג; עם זאת, במקרים של גירוי חמור או זיהום, ייתכן שיהיה צורך להיות מרדים.
    1. הסר פסולת מסביב לתג עם אפליקטור עם קצה כותנה לח עם פתרון חיטוי.
    2. חתוך לרוחב החלק העליון של לולאת התג מקצה לקצה עם חותכי תיל. אין לחתוך על פני השטח השטוח, שכן זה יהיה לדחוס את התג, לצבוט את האוזן, ולגרום נזק נוסף.
    3. הימנע החלת המומנט בעת חיתוך כדי למנוע קריעת האוזן.
  2. השתמש hemostats כדי להפיץ את קצות לחתוך של תג האוזן בנפרד.
    1. הנחו בעדינות את תג האוזן דרך ומחוץ לאוזן באמצעות hemostats. להפחית את הטראומה על ידי הימנעות מהגדלת החור החודר והחלקת התג החוצה, כך הקצה מקומק לא עובר דרך האוזן.
    2. לאחר שהתג נעלם, לנגב את האוזן עם מקל אפליקטור כותנה ספוג חיטוי.
    3. אם יש פריקה מוגלתית מהאוזן, ייתכן שיהיה צורך בטיפול מעקב ומומלץ להתייעץ עם הצוות הווטרינרי להערכה.

זיהוי נכון של חיות מעבדה הוא דרישה בסיסית של מחקר ביו-רפואי. זה חיוני לחוקרים כדי להיות מסוגל להבחין בין בעלי חיים בודדים, כך החיה הנכונה משמשת הליכים ניסיוניים ואיסוף נתונים. מדענים פיתחו מספר שיטות קבועות וזמניות לזיהוי חיות מעבדה בודדות. כאן, אנחנו הולכים לדון בשתי השיטות הנפוצות ביותר: תיוג אוזניים וחבטות אוזניים.

לפני להתעמק בהליך של ניקוב האוזן, בואו להציג את קוד ניקוב האוזן, את סוגי האגרופים הזמינים, ולדון את היתרונות והחסרונות של שיטה זו. כפי שניתן היה לנחש, ניקוב אוזניים כרוך ניקוב חור או חריץ באוזן החיצונית של החיה או פינה. על מנת לתקנן שיטה זו, פותחו קודי ניקוב אוזניים אוניברסליים.

בהתאם למיקום, חריצים באוזן ימין מייצגים ספרות בודדות, כגון 1, 3 ו- 5, וחרץ כפול מייצג 2. באמצעות שילובים שונים של חריצים אלה, וסיכום הערך עבור כל חריץ, אתה יכול לתייג את החיה מ 1 עד 9. באופן דומה, באוזן שמאל, אותם חריצים מייצגים את העשרות. ושוב, שילובים שונים יכסו את הטווח של 10 עד 90. חורים במרכז הפינה הימנית והשמאלית מייצגים 100 ו -200, בהתאמה. וחורים בשניהם מצביעים על 300. לכן, למשל, אם אתה רוצה לתייג את החיה 173, אתה צריך ניקוב חור במרכז האוזן הימנית עבור 100, שלושה חריצים בשנה שמאל מסכם את הסכום הכולל ל 70, וחריץ אחד באוזן הימנית העליונה המייצג את המקום של היחידה "שלוש".

עכשיו, בואו נדבר על שלושת הסגנונות של אגרופי אוזניים זמינים מסחרית: אגרוף מספריים, אגרוף האגודל, ואת אגרוף הידית. לכל אחד מהם יש את היתרונות והחסרונות שלו.

אגרוף האגודל דורש תנועת צביטה, אך הוא קטן מספיק כדי להתאים לצינור אפנדורף, כך שניתן יהיה לאסוף בקלות רבה יותר את רקמת האוזן. מבחינה ארגונומית, אגרוף הידית קל יותר לשימוש מאשר אגרוף אגודל, במיוחד עבור האוזניים העבות של החולדות הישנות. אגרוף המספריים אינו דורש תנועת צביטה, ובכך למנוע עייפות מנהרה שורש כף היד ופציעה.

למרות היותו שיטה מהירה ופשוטה של זיהוי, אגרוף האוזן יש כמה מגבלות. ראשית, קוד ניקוב האוזן שנדון לעיל יש גבול עליון של 399, אשר עשוי להגביל את השימוש בשיטה זו בכמה מחקרים בקנה מידה גדול. מגבלה נוספת היא כי רוב בעלי החיים חייבים להיאחז ב scruff על מנת לקרוא את הקוד, ובכך להגדיל את הזמנים שהם מטופלים. ככל שחולדות מזדקנות, עור אוזניהן מתעבה וקשה לבצע אגרוף באוזן מבלי לגרום למצוקה משמעותית לחיה. לכן, עדיף לבצע את אגרופי האוזן על חולדות צעירות כפי שהם נמות. עבור חולדות מבוגרות הדורשות זיהוי, יש לשקול את השימוש בהרדמה במשאפה בעת ביצוע אגרופים באוזן.

עכשיו שיש לך קצת מידע רקע על קוד ניקוב האוזן וסוגי הכלים הזמינים, בואו ללמוד כיצד לבצע טכניקה זו בעכברים.

לפני תחילת ההליך, מומלץ לנקות כלי חבטה עם תמיסת חיטוי, לשטוף באלכוהול, מיובש ביסודיות. הימנע autoclaving אגרופי האוזן, כפי שהוא בסופו של דבר יהיה משעמם אותם.

כדי להתחיל, להחליט על הקוד הניסיוני של החיה ואת האגרוף לשמש. בואו נשתמש בקוד 173 ובחבטת מספריים כדוגמאות כאן. אותו הליך חל על כל קוד או אגרוף אחרים. כאשר אתה מוכן, לרסן את החיה על ידי אחיזה אותו על הקשקוש, כך האוזניים נגישות בקלות. תתחיל עם החור ב-100. מניחים את האוזן הימנית באגרוף כך חור האגרוף ממוקם הרחק שולי pinna. לאחר מכן, להפעיל לחץ כדי לסגור את המספריים במהירות ובתקיפות כדי לחתוך את העור. לאחר מכן, שחרר את האגרוף והסר אותו מהאוזן. הימנע משיכה או סיבוב האגרוף כדי למנוע קריעת האוזן. כדי לעשות חריץ, מניחים את האגרוף על קצה הפינה האוזן בנקודה הנכונה, במקרה זה בחלק העליון של האוזן הימנית עבור "שלוש" במקום היחידה של הקוד, ולעשות את אותו הדבר - להפעיל לחץ מהיר ומוצק ולאחר מכן לפתוח את המספריים כדי להסיר אותו. חזור על אותו הליך באוזן השנייה כדי לחבוט בשלושה חריצים - שניים עבור "20" ליד הפינה החיצונית ואחד עבור "50" ליד הפינה הפנימית, בסך הכל את הקוד ל "70".

אשר כי הקוד הנכון היה אגרוף לפני הוספת החיה בחזרה לכלוב. שוב, לנקות את האגרוף עם חומר חיטוי, לשטוף עם אלכוהול ולייבש אותו ביסודיות כדי למנוע חלודה.

עכשיו, בואו נעבור לתיוג אוזניים, שהיא עוד שיטה זולה וקלה לביצוע לזיהוי אישי של עכברים וחולדות. ישנם מגוון של תגי אוזניים זמינים מסחרית. אלה כוללים: תגי מתכת עם סדרה של מספרים ו / או אותיות חקוקים עליהם, ותגי פלסטיק עם תווים או ברקודים על רקעים בצבעים בהירים.

חיסרון אחד של תגי מתכת הוא כי לעתים קרובות יש צורך להרים את החיה כדי לקרוא את הקוד. לעומת זאת, תגי פלסטיק קלים לקריאה מבלי לטפל בבעלי החיים. יתרון נוסף לתגי פלסטיק הוא התאימות שלהם להדמיית MRI. בעוד התגים מספקים מזהה בודד עבור עכבר או חולדה, הם אינם טועים. תגיות יכול ללכת לאיבוד עקב טיפוח יתר, דרמטיטיס או זיהום, טראומה עצמית שנגרמה מנסה להסיר תגים עקב חוסר סובלנות, לחימה, והתנהגות רבייה אגרסיבית. אם מספר בעלי חיים שוכנים באותו כלוב, אובדן תג האוזן יכול להיות בעייתי. כדי לעקוף בעיה זו, יש להשתמש בצורה משנית של זיהוי כגון קוד ניקוב באוזן שממול לתג. מתקן צריך לתקנן הן את בחירת האוזן להיות מתויג ואת הקוד שיש להשתמש באוזן השנייה, ואת כל הקודים צריך להיות מצוין על כרטיס הכלוב.

עכשיו בואו ללמוד כיצד ליישם כראוי תג האוזן, כמו מיקום שגוי יכול להיות כמה השלכות מצערות. לאחר היישום, נדון גם בהסרת תג האוזן, אשר מבוצע בדרך כלל במקרה של זיהום עקב יישום תג.

השלב הראשון הוא לבחור תג מתאים עבור בעלי החיים להיות מזוהה. כאן, נשתמש בתג מתכת כדי להדגים את ההליך על עכברים. הקפד להזמין את ההחלמה המתאימה לגודל ולסגנון הספציפיים של תגי האוזן הנמצאים בשימוש. מוציאים בעדינות את התג ממחזיק הקרטון ומכוונים אותו לתוך המימר כך שהקצה עם החור ממוקם מעל האזור החרוך של המייש. הקצה המחודר של התג צריך להיות מול החרץ.

כאשר אתה מוכן להחיל את תג האוזן, לרסן את החיה, כך האוזניים נגישות בקלות. בעלי חיים עשויים להיות פחות סביר להיאבק אם הגפיים האחוריות יכול לנוח על משטח כגון ראש הכלוב או דלפק העליון. לאחר שבעל החיים מרוסן, מקם את נקודת תג האוזן עמוק בקונצ'ה של האוזן כך שמספרי התגים פונים לחלק האחורי של החיה. לאחר מכן, לסחוט בחוזקה את היישום סגור; תג האוזן ינקב את האוזן וינעל יחד. בעת השחרור, האוזן המתויגת תיפול מהמתיחה. ודא שהתג הוצב והוחל כראוי. אם אתה מעדיף את מספרי תג האוזן מול האף של החיה, למקם את נקודת התג בבסיס של פינה על הגב של האוזן ולאחר מכן לסחוט כדי לנעול את התג במקום.

תגיות חייבות להיות ממוקמות כך שהם לא גורמים עיקול באוזן, להפריע לניידות של החיה, או לתפוס על כל חלק של העיקול. אם התג ממוקם קרוב מדי לקצה האוזן, ניתן לקרוע אותו בקלות. אם ממוקם קרוב מדי לראש, העור של אזור הצוואר יכול לתפוס בתג, יצירת גירוי, כאב, ותנועה מוגבלת, אשר לאחר מכן יכול להוביל לטראומה עצמית. מדי פעם, תגי מתכת יכולים לגרום לגירוי ונפיחות של האוזן. זה מוביל לעתים קרובות לזיהומים של פינה, ואת הטיפול המיידי צריך לכלול את הסרת התג.

על מנת להסיר את התג, להלח אפליקטור כותנה עם פתרון חיטוי ולהשתמש בו כדי להסיר כל פסולת מסביב לתג. במקרים חמורים של זיהום, ייתכן שיהיה צורך להיות מרדים את החיה. לאחר מכן, באמצעות חותכי תיל, לחתוך על פני החלק העליון של לולאת התג מקצה לקצה. חשוב לציין, לא לחתוך על פני השטח השטוח כמו זה יהיה לדחוס את התג, לצבוט את האוזן, ולגרום נזק לאוזן. באמצעות hemostats, בעדינות להנחות את תג האוזן דרך ומחוץ לאוזן. להחליק את התג החוצה, כך הקצה מקומק לא עובר דרך גרימת טראומה והגדלה של החור פירסינג. לאחר שהתג נעלם, לנגב את האוזן עם מקל כותנה ספוג חיטוי, ולהחזיר את החיה לכלוב שלה. אם יש פריקה מוגלתית מהאוזן, ייתכן שיהיה צורך בטיפול מעקב ומומלץ להתייעץ עם הצוות הווטרינרי להערכה.

עכשיו שאתם יודעים לסמן את חיות המעבדה באמצעות תגי אוזניים וחבטות, בואו נסקור כמה ניסויים שבהם שיטות אלה יכולות להיות שימושיות. אחד היתרונות העיקריים של שימוש בקוד ניקוב האוזן הוא כי האגרופים יכולים להכפיל כמו דגימות רקמה עבור genotyping, ובכך להפחית את הלחץ לבעלי החיים הנגרמים עקב טיפול חוזר. עם זאת, אם אתם מתכננים להשתמש אגרופים לאיסוף דגימות PCR, זכור תחילה להשרות את המנגנון בתמיסה חיטוי משטח לפחות 3 דקות כדי להסיר DNA שיורית או RNA, ולאחר מכן לשטוף עם אלכוהול לפני השימוש.

חשיבותה של טכניקת הזיהוי עולה עוד יותר אם הניסוי נמשך מספר ימים. לדוגמה, בניסוי זה המדענים תייגו תחילה את בעלי החיים באמצעות תג מתכת ואז הם הזריקו את העצב הסיאטי עם השעיה של תאים סרטניים מהונדסים המבטאים חלבון לוציפראז. לאחר מכן, על מנת לכמת את התקדמות הסרטן, הם דימו את בעלי החיים באמצעות ביולומינציה בזריקה אחת, עשרה ושמונה עשרה ימים לאחר ההזרקה.

הרגע צפיתם במצגת של JoVE המדגימה את שתי שיטות הזיהוי הנפוצות במכרסמים: תגי אוזניים וחבטות אוזניים. עכשיו אתה צריך להבין את קוד ניקוב האוזן, לדעת את הסוגים השונים של תגי אוזניים מכרסם זמין מסחרית, צריך להיות מסוגל לבצע במדויק הליכים אלה מבלי לגרום אי נוחות משמעותית בעלי חיים.

זכור, לכל טכניקה יש את היתרונות והחסרונות שלה, אשר חייב להיחשב ביחס לצרכים הניסיוניים שלך. בנוסף לשקול את העלות, הקלות של הטכניקה ואת רמת הכאב לבעלי החיים צריך להיות חלק מהשיקולים העיקריים בעת בחירת שיטת הזיהוי המתאימה. כמו תמיד, תודה שצפית!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Applications and Summary

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

בעת בחירת שיטת הזיהוי המתאימה, יש לדון בגורמים רבים. לכל טכניקה יש יתרונות וחסרונות שיש לקחת בחשבון ביחס לצרכים הניסיוניים. בעוד העלויות חייבות להישקל יחד עם גורמים אחרים, הקלות של הטכניקה ואת רמת אי הנוחות לבעלי החיים צריך להיות השיקולים העיקריים. 3,4

חבטות אוזניים / חריץ משמש בדרך כלל בעכברים וחולדות כי יש עלות קטנה, ואת ההליך נעשה בקלות. ישנם מספר מוגבל של קודים שניתן להשתמש בהם, כאשר לרוב הקודים יש גבול עליון של 100 עד 399. כדי לקרוא את קודי אגרוף האוזן, רוב החיות חייבות להיאחז בקשקוש. עם זאת, האגרופים יכולים להכפיל כמו דגימות רקמה עבור genotyping PCR, אשר מאפשר זיהוי דגימת genotype להתבצע בו זמנית, ובכך לגרום פחות מתח לבעלי החיים מטיפול חוזר. 5

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

References

  1. Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
  2. Cover, C.E., Keenan, C.M., and Bettinger, G.E. 1989. Ear tag-induced Staphylococcus infection in mice. Laboratory Animals. 23:229-233.
  3. Kitagaki, M., Suwa, T., Yanagi, K., and Shiratori, K. 2003. Auricle chondritis in young ear-tagged Crj:CD(SD)IGS rats. Laboratory Animals. 37:249-253.
  4. Kasanen, H.E., Voipio, H.M., Leskinen, H., Luodonpää, M., and Nevalainen, T.O. 2011. Comparison of ear tattoo, ear notch and microtattoo in rats undergoing cardiovascular telemetry. Laboratory Animals. 45:154-159.
  5. Dalhborn, K., Bugnon, P., Nevalainen, T., Raspa, M., Verbost, P., and Spangenberg, E. 2013. Report of the Federation of European Laboratory Animal Science Associations Working Group on animal identification. Laboratory Animals. 47:2-11.
  6. Waalkes, M.P., Rehm, S., Kasprzak, K.S., et al. 1987. Inflammatory, proliferative, and neoplastic lesions at the site of metallic identification ear tags in Wistar [Crl:(WI)BR] rats. Cancer Research. 47:2445-2450.

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter