Overview
ソース: ケイ ・ スチュワート、RLATG、RVT CMAR;ヴァレリー A. シュレーダー、RVT、RLATG。ノートルダムのノートルダム大学
生物医学研究の基本的な要件は、研究動物の適切な id です。右の動物がプロシージャとデータ収集のために使用されているが不可欠です。実験用マウスやラットは次の永久的な方法で識別できる: 耳タグ、耳パンチ コード、マイクロ チップの注入、成体マウスのテール入れ墨および新生児のためのつま先の入れ墨。染料・ マーキングペンの一時的な方法は、急性の研究も使用できます。このビデオでは、タグ付けと動物の調査の種類について、それぞれのメリットと同様に、マウスおよびラットの耳の技術的な側面をカバーしています。(別のビデオで説明) 各動物の基本的なマニュアル抑制技術の知識は、これらの識別方法を正しく完了するために必要です。
Principles
耳のタグは、安価で簡単に行うには、結果として、個々 のマウスおよびラットの同定に一般的に使用されます。タグは、一連の数字と文字の組み合わせでオーダーメイドすることができます。マウス/ラット系統またはに原則捜査官 (PI)、記録管理やデータベース管理、特に大規模な繁殖コロニーでの側近に特定のコードを割り当てることがある複数の系統や小僧。また、市販のタグのさまざまながあります。金属タグそれらに刻まれた文字であります。このエッチングは明らかに、それをマウスを使って作業がしばしばタグのサイズが小さいためタグのコードを読むためにそれを拾う必要があります。他のオプションは、数字や鮮やかな色の背景の文字とプラスチックのタグまたはプラスチック表面にバーコードのタグします。これらのオプションの両方は、動物を扱うことがなく読めるようにタグを許可します。プラスチック製のタグに別の利点は、mri との互換性です。
耳にタグの位置は、いくつかの不幸な結果を持つことができます不適切な位置決めに重要です。彼らはか耳介で曲がりが発生、動物の移動を妨害または、ケージングの任意の部分をキャッチするよう、タグを配置する必要があります。タグがあまりにも近くに配置されている場合引き裂かれた耳介の組織から簡単に耳の端。頭に余りに近く位置し、頸部の皮膚は炎症、痛み、運動制限が作成されますタグでキャッチできます。これは、タグ、耳からリッピングまたはタグに巻き込まれる左足負傷動物から自己トラウマに可能性があります。適切な配置とテクニックのトレーニングは不可欠です。1
タグは、マウスやラットの個人識別子を提供する間、彼らは絶対ではありません。タグは戦い、過剰グルーミング、自己外傷や感染症、感受性系統の皮膚炎のため失われます。2ラット特に耳タグさほど寛大は、しばしば自己トラウマを与えた、それらを削除します。ラットのより積極的な繁殖行動は、耳介から引き裂かれて耳タグにつながることができます。マウスやラットは、ペアやグループは建物、1 つ以上の動物の耳タグの損失があれば面倒です。識別 - タグ、あるいは尻尾や足指のタトゥーの反対側の耳で使用されるパンチ コードなどの二次形態は、この問題を回避するために-使用する必要があります。施設はタグ耳の選択と他の耳やつま先に使用されるコードの両方を標準化する必要があります。ケージのカード上にすべてのコードを明記してください。
耳パンチ コードの使用により、迅速かつ簡単な識別法の技術制限があります。一般的に使用されるコード使用、通常 100 に 399 の最大可能な数の上限があります。耳パンチ コードを読み取る、ほとんどの動物は、首筋に把握する必要があります。パンチが同時に達成されるべき動物の同定と遺伝子型サンプリングを可能にする PCR 遺伝子型の組織サンプルとして倍増できます。繰り返し処理から、動物にストレスの少ないでこの結果します。3
耳パンチの 3 つの様式がある: はさみパンチ、親指パンチとレバー パンチ。すべてが均等に有効であるが、それぞれに長所と短所があります。たとえば、ラットの年齢として彼らの耳の皮膚が厚くなります。彼らが引き離される幼若ラットの耳パンチを実行することをお勧めします。、身分証明書を必要とする大人のラットの吸入麻酔の使用を考えるべきです。人間工学に基づいて、レベルのパンチは特に、古いラットの厚い耳の親指パンチよりも使いやすいです。ただし、これらのパンチの両方はつまむ指の動きが必要です。はさみパンチ手根管の疲労や怪我を避けるため、つまむ動きを必要としない人間工学的利点があります。対照的に、親指パンチは、エッペン チューブにサンプル、組織材料のヒントとして収まるジェノタイピングを収集するため便利です。使用するパンチのスタイルは、タスクおよびラットの年齢を実行する個人によって決められるべきです。
、ラットの金属タグはよく使われますが、研究を示しているそれらを使用する影響があります。炎症、腫瘍性病変とも慢性的な痛みは、数ヶ月の金属の耳タグを着用している動物で観察されています。3,4,5,6タグ除去されるべき速やかに耳から調べ、治療、その後の負傷、副作用がある場合、必要に応じて獣医のスタッフによって。
適切なケアとメンテナンスのパンチは、その使用方法を拡張します。パンチのすべてのタイプは、消毒剤でそれらをきれいにしアルコールで洗浄し勧め場合オートクレーブ、鈍くなります。その後、彼らは徹底的に錆を防ぐために乾燥が必要があります。PCR のパンチを使用している場合彼らべき浸し 3 分残留の DNA または RNA を削除するソリューション。使用前にアルコールで洗浄、乾燥拭いています。
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Procedure
1. 耳パンチ同定
耳パンチ コードは、個々 の動物のラベルに迅速かつ安価な方法として開発されています。耳パンチの 3 つの様式がある: はさみパンチ、親指パンチとレバー パンチ。動物の右耳は数十または何百ものために耳の中央の左耳一桁に使用されます。
- 耳が簡単にアクセスできるように、動物を抑制します。ほとんどのマウスは、耳離乳時の個体識別のためのタグです。彼らのより小さくより壊れやすいサイズのための穏やかな処理が必要です。いくつかのマウスは、後肢がケージの上やカウンター トップなど表面に休むことができる場合は苦労する可能性が低く。
- 動物の実験の番号に対応するケージ内でそれを識別するために必要な耳パンチを決定します。
- パンチは、ノッチまたは使用されるコードによって穴になります。
- 耳タグの最後の番号は、身分証明書の第 2 の方法だと多くの場合耳パンチ識別子として使用されます。
- 動物が安定しておりグループでの短期留学の場合、彼らは連続番号を指定できます。耳タグの存在がない場合多くの場合これです。
- パンチの耳を作る。
- ノッチをするためには、パンチは、耳介の端に配置されます。
- 穴をするためには、目的の位置に耳介余白からパンチの穴が表示されるよう、パンチで耳を配置します。
- 耳の皮膚を切って、しっかりと親指レバー パンチまたはシザー パンチすばやく閉じる圧力を適用されます。
- 親指またはレバーのパンチを使用するときに、耳からパンチをそっと持ち上げます。耳から削除するはさみパンチを開きます。
- 引っ張るか、または耳をテアリングを防ぐためパンチのねじれを避けます。
- パンチは、時間後鈍いか。パンチは耳を切って、パンチをリリース、新しい耳パンチを選択すべき。同じ場所に新しいパンチの位置を変更します。
- 各使用後きれいにパンチ。
- オートクレーブ処理した場合、すべてのパンチの種類が鈍くなります。彼らは消毒剤で洗浄してアルコールで洗浄をお勧めします。錆を防ぐために徹底的に乾かします。
- PCR に使用する耳パンチは、残留の DNA または RNA を削除するソリューションで 3 分間定期的にぬれています。使用前にアルコールで洗浄、乾燥拭いています。
図 1。耳はさみパンチを用いたマウスでのパンチします。
2. 耳タグ識別
カスタマイズされた耳タグをマウス系統や探偵の分化が可能アルファベットや数値のコードを持つメーカーから注文できます。金属やプラスチックの耳タグが可能です。
- 識別される動物の適切な耳タグを選択します。耳タグ製造業者から利用できる適用元の複数の様式があります。必ず、特定のサイズと使用されている耳タグのスタイル適用元を注文してください。
- 優しく段ボール ホルダーからタグを削除、applier の切欠きの範囲上の穴端が置かれたので、applier にそれを方向づけます。タグの先の尖った端は切り込みの反対する必要があります。
- 耳が簡単にアクセスできるように、動物を抑制します。動物は、後肢がケージの上やカウンター トップなど、表面に休むことができる場合は苦労するより可能性があります。
- 正しく配置の耳タグを配置します。
- 深く、できるだけ耳のコンチャにタグ番号顔動物の背中のように、耳タグのポイントを置きます。
- 動物の鼻に直面して耳タグ番号がある、耳の裏に耳介の基部にタグのポイントを配置します。
- タグを適用します。
- 閉鎖適用元をしっかりと絞る。耳のタグは、一緒に耳とロックを突き刺すでしょう。
- 、Applier を解放し、タグ付けの耳が applier の落ちる。
図 2。耳介に正しく配置されている耳タグを持つマウス。
- 金属の耳タグを削除します。
注: 場合によっては、金属耳タグを引き起こす可能性が炎症や耳の腫れの。腫れや炎症をしばしば耳介の感染症に します。治療は、タグの除去を含める必要があります。ただし、重度の炎症や感染症の場合、動物は麻酔する必要があります。- 消毒液で湿らせた綿棒でタグの周りからの残骸を削除します。
- ワイヤー カッターのエッジからタグ ループの上部をカットします。タグを圧縮、耳をつまむし、さらにダメージが、平らな面にわたって切断しないでください。
- 耳を引き裂くことを防ぐために削減しながらトルクを適用しないでください。
- 耳タグを離れての切り口を広げるためには、止血剤を使用します。
- を通じて耳タグをゆっくりとガイド- と止血剤を使用しての耳を。ピアスの穴の拡大を回避し、圧着端が耳を通過しませんので、うちのタグを入れることによって外傷を減らします。
- タグがなくなって、アプリケータ、防腐剤に浸した綿の棒で耳を拭きます。
- 耳からの膿性分泌物がある場合必要がありますフォロー アップ治療と評価のための獣医のスタッフとの協議をお勧めします。
実験動物の適切な同一証明は、生物医学研究の基本的な要件です。捜査官正しい動物が実験手順やデータの収集のため使用されるように個々 の動物を区別できるようにするために不可欠です。科学者は、個々 の実験動物を識別するためにいくつかの恒久的かつ一時的な方法を開発しました。ここでは、我々 は 2 つの最も一般的に使用される方法を議論する予定です: 耳のタグ付けと耳抜き。
耳抜きの手順を詳しく説明する前に、みましょう耳パンチ コード、利用可能なパンチの種類を紹介しの利点、この方法の欠点を説明します。想像のとおり、耳パンチ穴や動物の外的な耳の耳介ノッチを打つ必要があります。この方法を標準化するために普遍的な耳パンチ コードが開発されています。
位置によっては、右の耳の切り込みが 1、3、5 などの一桁を表すし、二重切欠き 2 を表します。これらのノッチのさまざまな組み合わせを使用して、各ノッチの値を加算、1 から 9 まで動物を付けることができます。同様に、左耳に同じノッチ数を表しています。再度、さまざまな組み合わせが 90 から 10 の範囲をカバーします。右と左の耳介の中央の穴は、それぞれ 100 と 200 を表します。両方の穴を示す 300。したがって、たとえば、動物 173 にラベルを付ける場合は、君に 100、70、および「3 つ」ユニットの場所を表すトップ右の耳の切り込みを 1 つに総和左年 3 つのノッチのため右耳の中央に穴をパンチします。
今、市販の耳パンチの 3 つのスタイルを説明しましょう: はさみパンチ、親指パンチとレバー パンチ。これらの各は、それぞれ長所と短所をが。
親指パンチつまむ動きが耳組織をより簡単に収集できるように、エッペン チューブに収まるほど小さいです。人間工学に基づいて、レバー パンチは特に、古いラットの厚い耳の親指パンチよりも使いやすいです。はさみパンチは、手根管の疲労や怪我を避けるため、つまむ動きを必要はありません。
迅速かつ簡単な識別法である、にもかかわらず耳パンチいくつかの制限があります。まず、前述の耳パンチ コードあります 399 は、いくつかの大規模研究でこのメソッドの使用を制限することができる数の上限です。別の制限は、ほとんどの動物は、コードを読むために首筋に把握する必要があります、彼らが処理される時間が増えています。ラット時代、彼らの耳の皮膚が厚くなるし、動物に重要な苦痛を引き起こすことがなく耳の穿孔器を実行することは困難です。したがって、彼らが引き離される幼若ラットの耳パンチを実行することをお勧めします。、身分証明書を必要とする大人のラットの耳パンチを実行時に吸入麻酔の使用が考慮する必要があります。
耳に関するいくつかの背景情報があるパンチのコードと各種ツール、マウスでこのテクニックを実行する方法を学びましょう。
手順を開始する前にそのパンチお勧めツールあります消毒液で洗浄、アルコールですすぎ、乾燥まで徹底的に。それは最終的にそれらを鈍くなる耳パンチ、オートクレーブに入れることは避けてください。
まず、動物の実験的なコードと使用するパンチを決めます。173 のコードを使用して、ここでは例としてパンチをはさみみましょう。同じ手順は、他のコードやパンチに適用されます。準備ができたら、首筋に耳が簡単にアクセスできるようにそれを把握することにより、動物を抑制します。100 の穴を開始します。耳介余白からパンチの穴が表示されるように、パンチで右耳を配置します。次に、すぐにシザーを閉じ、しっかりと皮膚を切って圧力を適用されます。パンチを解放し、耳から削除します。引っ張るか、または耳をテアリングを防ぐためパンチのねじれを避けます。ノッチをするためには、コードの単位に、「3」の右の耳の上部にこの場合正しい場所で耳介の端にパンチを配置し同じことを行う - 迅速かつしっかりした圧力を適用し、それを削除するシザーを開き。外側の角と「70」コードを合計内側コーナ"50"に近い「20」ための 2 - 3 つのノッチをパンチする他の耳に同じ手順を繰り返します。
正しいコードを裏では動物を檻に追加する前に殴られたことを確認します。また、きれいに消毒剤でパンチ、アルコールですすぎ、錆を防ぐために徹底的にそれを乾燥します。
今、上に移り耳のタグ付け、マウスおよびラットの個体識別のための別の安価で容易に行う方法であります。さまざまな市販の耳タグがあります。これらが含まれます: 一連の数字と文字の組み合わせ、それらに刻まれたタグや文字や鮮やかな色の背景のバーコードとプラスチックのタグを金属。
金属タグの 1 つの欠点は、コードを読むために動物を拾う必要があります。対照的に、プラスチックのタグが、動物を扱うことがなく読みやすいです。プラスチック製のタグに別の利点は、mri との互換性です。タグは、マウスまたはラットの個々 の id を提供する、彼らは絶対ではありません。タグは、過剰グルーミング、皮膚炎や感染症により失われることが、不耐症のためタグを削除しようとすると、喧嘩、そして積極的な繁殖行動自己トラウマを与えた。いくつかの動物は、同じケージに収容されて、耳にタグの損失が面倒することができます。この問題を回避するために反対側の耳にパンチ コードなどタグの識別の二次形態を活用すべき。耳のタグを選択し他の耳に使用されるコード施設を標準化する必要があります、すべてのコードは、ケージのカードに示されている必要があります。
今いくつかの不幸な結果を持つことができます不適切な位置決め、耳にタグを適切に適用する方法を学びましょう。次のアプリケーションでは、またタグ アプリケーションによる感染症の場合通常行われる耳タグの削除を議論します。
最初のステップは、識別される動物のための適切なタグを選択します。ここでは、マウスの手順をデモンストレーションするのに金属製のタグを使用します。必ず、特定のサイズと使用されて耳タグのスタイルに適して適用元を注文してください。そっと段ボール ホルダーからタグを削除、applier の切欠きの範囲上の穴端が置かれたので、applier にそれを方向づけます。タグの先の尖った端は切り込みの反対する必要があります。
耳のタグを適用する準備ができたら、耳が簡単にアクセスできるように、動物を抑制します。動物は、後肢がケージの上やカウンター トップなど表面に休むことができる場合は苦労するより可能性があります。動物を拘束すると、一度位置を耳タグの深く耳のコンチャにので、タグ番号顔動物の背中。その後、しっかりとスクイズ applier を閉じる;耳のタグは、一緒に耳とロックを突き刺すでしょう。離すと、タグの耳が applier の落ちる。タグがきちんと置かれ、適用されることを確認します。動物の鼻に直面して耳タグ番号する場合は、耳の裏に耳介の基部にタグの点を配置し、場所のタグをロックするを絞る。
彼らはか耳の曲がりが発生、動物の移動を妨害または、ケージングの任意の部分をキャッチするよう、タグを配置する必要があります。あまりにもタグを配置した場合、耳の端に近いそれすることができます簡単に引き裂かれます。頭に余りに近く位置し、頸部の皮膚は炎症、痛み、および自己外傷につながることができますし、制限の動きを作成するタグでキャッチできます。金属タグすることができます炎症や耳の腫れが原因あります。これは多くの場合、耳介の感染症につながるし、すぐに治療は、タグの除去を含める必要があります。
タグを除去するために消毒液と綿棒を湿らせ、タグの周りから任意の残骸を削除する使用します。感染症の重症の場合、動物は麻酔する必要があります。その後、ワイヤー カッターを使用して、エッジからエッジへのタグのループの上部にカットします。重要なは、カットしないでください平らな面全体をタグを圧縮し、耳をつまんで、耳に損傷を与えると。止血剤を使用して、ゆっくりと耳の耳タグとガイドします。クリンプ エンドがトラウマとピアスの穴の拡大を引き起こしているを通過しませんので、うちタグをスリップします。タグがなくなって、防腐剤に浸した綿棒の棒で耳を拭くし、そのケージに動物を返します。耳からの膿性分泌物がある場合必要がありますフォロー アップ治療と評価のための獣医のスタッフとの協議をお勧めします。
今、耳タグとパンチを使用して実験動物をマークする方法を知っていると、これらの方法に役に立ついくつかの実験を確認してみましょう。耳パンチ コードを使用しての主な利点の 1 つは、パンチは繰り返し処理が原因で発生動物にストレスを減らす、遺伝子型の組織サンプルが兼ねることができます。ただし、PCR のサンプルを収集するため、パンチを使用する場合は、最初に残留の DNA または RNA を削除し、使用前にアルコールすすぎ 3 分以上の表面 decontaminant ソリューションで装置を吸収します。
実験が数日間持続する場合、同定法の重要性は更に増加します。たとえば、この実験で科学者はまず金属タグを使用して動物をラベルし、彼らはルシフェラーゼ蛋白を発現するトランスジェニック腫瘍細胞の懸濁液で坐骨神経を注入します。次に、癌の進行を定量化するために彼らは 1 つ、10、18 日ポスト噴射で生物発光を用いた動物をイメージしました。
2 つを一般的示すゼウスのプレゼンテーションは齧歯動物での識別方法を使用をちょうど見てきた: タグを耳し、耳をパンチ。今耳を理解する必要がありますコードをパンチ、市販の齧歯動物の耳のタグの種類を知っている、かなりの動物の不快感を引き起こすことがなくこれらの手順を正確に実行できる必要があります。
各テクニックは、その長所と短所は、あなたの実験の必要性に関連して考慮する必要がありますに注意してください。に加えてコストを考えると、技術の使いやすさと、動物に痛みのレベルはずいくつか主要な考慮事項の適切な識別方法を選択するときです。いつも見てくれてありがとう!
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Applications and Summary
適切な識別方法を選択するときは、多くの要因を審議する必要があります。各テクニックは、長所と短所が実験のニーズに関連して考慮する必要があります。コストは、他の要因と共に検討する必要があります、技術の使いやすさと、動物に不快感のレベルには、主要な考慮事項が必要があります。3, 4
少ないコスト、手順を簡単に行うための耳パンチ/ノッチ、マウスとラットで使用されます。399 に 100 の上限を持っているほとんどのコードで使用できるコードは限られています。耳パンチ コードを読み取る、ほとんどの動物は、首筋に把握する必要があります。しかし、パンチは、繰り返し処理から動物にストレスの少ないため、PCR 遺伝子の多型の同定と遺伝子型サンプリング、同時に達成できるための組織サンプルとして倍増できます。5
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References
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