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Environmental Microbiology

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环境样品中的噬菌体的检测

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Click here for the English version.

病毒是负责很多疾病、 感冒和流感,肝炎和艾滋病毒的传染性生物粒子。

病毒是生物粒子组成的 DNA 或 RNA 的基因组,包裹在蛋白质的外衣,称为衣壳,有时与其他脂质信封里。病毒对他们自己,有没有代谢或生殖能力必须入侵活细胞和劫持其细胞的机械,使更多的自己的拷贝。

等细菌,原核细胞和真核细胞,如那些人类,可以由特定类的病毒感染。具体来说,噬菌体是感染细菌的病毒。例如,体内大肠杆菌噬菌是这些噬菌体感染大肠杆菌,一种常见的肠道细菌,其中有些菌株可导致食物中毒,和这是相对值的粪便污染的水供应。

噬菌体本身也不知道要在人类致病性,而是证据,他们是可靠的替代指标为致病肠道病毒也 fecally-传输但很难测定。相对快速和廉价的方法来枚举噬菌体的可用性使他们有吸引力的工具,用于评估的粪便污染环境样品中。

这个视频将介绍噬菌体枚举; 背后的原则显示协议为量化噬菌体,称为空斑法测定;最后,探讨几种环境科学应用程序的检测和计数的噬菌体和其他病毒。

噬菌体,像所有的病毒,必须寄生在活细胞,在此案例中的细菌,以重现。

噬菌体通过登陆和细菌细胞表面附着和其遗传物质注入细胞来做到。一旦进入细胞,病毒基因组复制和产生病毒衣壳蛋白组分,两个使用了宿主细胞的生化机制。一旦组装噬菌体颗粒,他们是来自细菌,经常主机的溶胞和发表迸发出来,杀死宿主细胞过程中。

广泛使用的方法,测定样品中的噬菌体浓度利用此裂解的活动。在这种技术,样品从噬菌体被混合细菌和软琼脂。这种混合物被倒到常规琼脂培养皿上作为衬底和顶部图层形式覆盖。

细菌是浓度较高时,他们形成一个连续的草坪。这种细菌应所得的文化,是在增长,以确保每个噬菌体感染的细菌是活着的日志阶段,允许噬菌体产生后代。

当噬菌体颗粒体感染并裂解细菌时,噬菌体后代会蔓延到附近的细菌细胞并引起持续感染。软琼脂法限制扩散的噬菌体颗粒。最终,将形成面积结算,称为斑块。

如果噬菌体被稀释到足够低的浓度,然后可以在细菌的草坪上观察离散的、 个别的斑块。这些可以计数和用于计算的空斑形成单位或 PFUs,每毫升的原始样品的噬菌体数量。

既然您已了解如何噬菌体感染细菌,这种活动如何可以用于噬菌体浓度测量,通过一个协议来使用空斑法测定枚举环境水样中的噬菌体吧。

一天之前进行化验,接种大肠杆菌株 ATCC 15597 成胨大豆肉汤在 250 毫升锥形瓶 100 毫升的殖民地。孵化用颤抖在 35 ° C 的一夜。

3 h 前测定,接种 1 毫升的过夜的大肠杆菌培养成新鲜的 100 毫升的肉汤。这种新文化放在震动的水浴温度 35 和 37 ° C 之间。这将确保当检测开始时,日志阶段的生长的细菌,是。

若要启动空斑法测定,做 10 倍和 100 倍系列稀释水样,使用 9 毫升的三缓冲区。

使用蒸汽浴室,融化的 0.7%软顶琼脂三 5 毫升管、 要么胨大豆或营养琼脂。一旦融化,放在水浴在 45 至 48 ° C 至少 15 分钟的琼脂的温度下降到 45 ° c。

软琼脂集落形成的第一管,加 1 毫升的事先准备好的日志阶段大肠杆菌文化和 1 毫升的稀释的水样。删除管水浴和轻轻地双手 2 3 s 混合悬浮液之间的岩石。

软琼脂倒入事先准备好的培养皿用胨大豆或营养琼脂。快速旋转板蔓延,确保它涵盖整个表面。

对于其他两个管,使用 1 毫升的每个稀释样品重复接种和电镀。

一旦顶级琼脂已经凝固,反转的菜肴和 48 小时,37 ℃ 培养他们。

孵育后数瘟疫在每个印版上。从计数,计算原始样品中的噬菌体浓度

例如,如果从 10 倍稀释板中获得了 9 斑块,是 9 倍 10 除以 1 毫升或 90 PFUs/mL 的原水样本中大肠杆菌的。

现在,您已经看到如何执行噬菌斑化验的让我们看看如何斑块检测可以用于枚举噬菌体和其他类型的病毒从各种来源。

斑块基于检测的方法可以用于隔离从不同的环境样品,如土壤的噬菌体。在此示例中,研究人员首先收集噬菌体从土壤的过滤。噬菌体被用于感染常见土壤细菌节杆菌在空斑法测定。噬菌体被拿从个别斑块和到新的琼脂平板,有条纹,然后叠加与细菌包含顶级琼脂。噬菌体浓度减小沿长度的条纹,可能得到离散的斑块,由一个单一类型的噬菌体,有可能形成。然后可以拿这些个别的斑块进一步分析内的噬菌体。

除了噬菌体,也可以与其他感染哺乳动物的病毒,包括那些,如流行性感冒,执行斑块检测。为此,哺乳动物细胞首先长大了作为单分子膜在组织培养皿中。媒体包含病毒然后添加到要允许感染发生之前与固定化凝胶状琼脂糖等介质覆盖单元格, 的单元格。以后可能会持续两周的潜伏期,受感染的细胞是固定和染色,使斑块可视化,进行清点。

最后,除了环境所提供的样品,斑块化验是有益用于检测和枚举从受感染的个人组织样品中的病毒。在这里,研究人员获得和同质化的肺组织从小鼠感染与 γ 疱疹病毒。这包含病毒的匀浆然后用于感染哺乳动物细胞培养。然后可以计数斑块数目估计为感染的肺组织中病毒滴度。

你刚看了朱庇特的视频在环境样品中的噬菌体的检测。现在,您应该了解的基本生物学,噬菌体、 如何执行空斑法测定,定量测定环境样品中的噬菌体和斑块检测方法如何用于研究噬菌体和其他环境或临床样品中的病毒。一如既往,感谢您收看 !

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