Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Analytical Chemistry

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

שיטת התוספת הסטנדרטית
 
Click here for the English version

שיטת התוספת הסטנדרטית

Overview

מקור: המעבדה של ד"ר פול באוור - אוניברסיטת פרדו

השיטה של תוספות סטנדרטיות היא שיטת ניתוח כמותית, אשר משמש לעתים קרובות כאשר המדגם של עניין יש רכיבים מרובים לגרום אפקטים מטריצה, שבו הרכיבים הנוספים עשויים גם להפחית או לשפר את אות ספיגת האנליטי. התוצאה היא טעויות משמעותיות בתוצאות הניתוח.

תוספות סטנדרטיות משמשות בדרך כלל כדי למנוע אפקטים מטריצה ממדידה, שכן ההנחה היא כי המטריצה משפיעה על כל הפתרונות באופן שווה. בנוסף, הוא משמש לתיקון הפרדות הפאזה הכימית המבוצעות בתהליך החילוץ.

השיטה מבוצעת על ידי קריאת עוצמת הניסיוני (במקרה זה פלואורסצנטי) של הפתרון הלא ידוע ולאחר מכן על ידי מדידת עוצמת הלא נודע עם כמויות שונות של תקן ידוע הוסיף. הנתונים מותווים כעוצמת פלואורסצנטיותלעומת כמות התקן שנוסף (הלא נודע עצמו, ללא תוספת סטנדרטית, מתוות על ציר ה- y). קו הריבועים הפחות מצטלב עם ציר ה-x בשלילי בריכוז הלא נודע, כפי שמוצג באיור 1.

Figure 1
איור 1. ייצוג גרפי של שיטת התוספת הסטנדרטית.

Principles

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

בניסוי זה, השיטה של תוספות סטנדרטיות מוצגת ככלי אנליטי. השיטה היא הליך לניתוח כמותי של מין ללא יצירת עקומת כיול טיפוסית. ניתוח תוספת סטנדרטית מתבצע על ידי מדידת עוצמה ספקטרוסקופית לפני ואחרי התוספת של aliquots מדויק של פתרון סטנדרטי ידוע של האנליטה.

ניסוי זה חוקר מינים שאינם פלואורסצנטיים על ידי תגובה להם באופן כזה כדי ליצור קומפלקס פלואורסצנטי. גישה זו משמשת בדרך כלל בחקירה של יונים מתכת. יונים מאלומיניום (Al3+) ייקבעו על ידי יצירת קומפלקס עם 8-הידרוקסיקווינולין (8HQ). Al3+ הוא מזורז על ידי 8HQ מפתרון מימי ולאחר מכן מופק לתוך כלורופורם; הפלואורסצנטיות של פתרון הכלורופורם נמדדת וקשורה לריכוז של פתרון Al3+ המקורי. רגישות בטווח החלק למיליון (ppm או מיקרוגרם/מ"ל) צפויה לניסוי זה.

התגובה היא

Reaction

כמות האלומיניום בכל מדגם במהלך ניסוי זה מחושבת כדלקמן:

ריק 0
לא ידוע + תקן 0 מ"ל Vלא ידוע(C לאידוע) = 25 מ"ל(C לאידוע)
לא ידוע + תקן 1 מ"ל Vלא ידוע(C לאידוע)+תקןV (CStandard) = 25 מ"ל (Cלא ידוע)+ 1 מ"ל(1 מיקרוגרם/מ"ל)
לא ידוע + 2 מ"ל רגיל Vלא ידוע(Cלאידוע)+ VStandard(CStandard) =25 מ"ל (Cלאידוע)+ 2 מ"ל(1 מיקרוגרם/מ"ל)
לא ידוע + 3 מ"ל רגיל Vלא ידוע(Cלא ידוע)+תקןV(CStandard)= 25 מ"ל (Cלאידוע)+ 3 מ"ל(1 מיקרוגרם/מ"ל)
לא ידוע + תקן 4 מ"ל Vלא ידוע(Cלא ידוע) +V Standard(CStandard) =25 מ"ל (Cלאידוע)+ 4 מ"ל(1 מיקרוגרם/מ"ל)

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. הכנת ריאגנטים

  1. פתרון Al3+ סטנדרטי ל-100 ppm: המיס 0.9151 גרם אלומיניום חנקתי (Al(NO3)3•9H2O) לבקבוק נפחי של 1-L עם מי DI.
  2. פתרון 8HQ בחומצה אצטית 1 M (2% wt/vol): הוסף 2.0 גרם של 8-הידרוקסיקווינולין לבקבוק נפחי של 100 מ"ל.
  3. בזהירות להוסיף 5.74 מ"ל חומצה אצטית קרחונית לבקבוק 100 מ"ל, ולאחר מכן לדלל לסימן עם מים DI. זה מאפשר 8-hydroxyquinoline להתמוסס בשלב מימי.
  4. 1 M NH4+/NH3 חוצץ (pH ~ 8): הוסף 20 גרם של אצטט אמוניום (NH4OAc) לבקבוק 100 מ"ל.
  5. הוסף 7 מ"ל של 30% אמוניום הידרוקסיד לבקבוק 100 מ"ל זה, ונדלל לסימן עם מי DI. זה עוזר לנטרל את החומצה בתמיסת 8HQ בשילוב.
  6. ריאגנטים אחרים כוללים נתרן גופרתי נטול מים (Na2SO4)וכלורופורם (ציון מפרט).

2. הכנת הדגימות

  1. הכן פתרון Al3+ סטנדרטי בגודל 1.00 ppm על-ידי הוספת 1.0 מ"ל מפתרון Al3+ של מלאי 100-ppm עם פיפטה לבקבוק נפחי של 100 מ"ל.
  2. הניחו שישה משפכים מפרידים בגודל 125 מ"ל על הטבעות שנמצאות על דוכן טבעת גדול הממוקם בשכונה. הם צריכים להיות מתויגים כדלקמן: BL, 0, 1, 2, 3, 4. ודא שכל כלי הזכוכית נקיים בקפידה, שכן קשה להשיג תוצאות כמותיות אם חרוזים קטנים של כלורופורם נדבקים לקירות כלי הזכוכית.
  3. הוסף 25.00 מ"ל של פתרון Al3+ הלא ידוע לחמשת משפכי ההפרדה המסומנים בתווית 0, 1, 2, 3 ו- 4. בדוגמה זו, הריכוז הלא ידוע הוא 0.110 עמודים לדקה.
  4. הוסף 0, 1.00, 2.00, 3.00 ו- 4.00 מ"ל של פתרון Al3+ סטנדרטי בגודל 1.00-ppm, בהתאמה, ל- 5 משפכים עם פיפטה של 1 מ"ל.
  5. הכן ריק על-ידי הוספת 25.00 מ"ל של מים מזוקקים למשפך המפריד המסומן BL.
  6. הוסף 1.0 מ"ל של פתרון 8-הידרוקסיקווינולין עם פיפטה לכל אחד מששת הפתרונות.
  7. הוסף 3.0 מ"ל של פתרון חיץ עם פיפטה לכל אחד מששת הפתרונות.
  8. לחלץ כל פתרון פעמיים עם 10 מ"ל של כלורופורם, רועד במרץ במשך 1 דקות בכל פעם. זכור מדי פעם לפרוק את המשפך המפריד כדי לשחרר הצטברות לחץ. (הערה: מיצוי טוב מתרחש רק כאשר יש הרבה מגע נוזלי נוזלי בין השלבים).
  9. לאסוף את הכלורופורם ב 100 מ"ל נקי, יבש תווית. לכלורופורם יש צפיפות של קרוב ל 1.5 גרם / ס"מ3, אז זה השכבה התחתונה. לא צריך להיות זכר של צבע צהוב עזב בשלב מימי לאחר החילוץ המלא.
  10. מעבירים את תמצית הכלורופורם המשולבת מכל כוב לבקבוקון נפחי בגודל 25 מ"ל ומדלדלים לסימן עם כלורופורם. הקפידו להניח פקקים בכל בקבוק נפחי כדי למנוע מכלורופורם להתאדות.
  11. הוסף ~ 1 גרם של נתרן גופרתי נטול מים (Na2SO4) לכל אחד מששת כוסות 100 מ"ל מהשלב 2.9. נתרן גופרתי מסייע להסיר כל עקבות של מים שעשויים להיות נוכחים בתמצית הכלורופורם.
  12. העבר את הפתרונות בחזרה למכסות המכובדות שלהם. מערבבים בזהירות כדי להקל על התייבשות של כל מים במדגם.
  13. דקאנט תמציות כלורופורם לתוך תא פלואורימטר קוורץ (הערה: כלורופורם יהיה להמיס תא פוליסטירן פלסטיק).

3. בחירת אורך הגל של העירור

קבעו את אורכי הגל של העירור והפליטה על-ידי הפעלת סריקות, ואז פשוט קראו ותעדו את עוצמת הפלואורסצנטיות של כל הדגימות בערכים אלה. רוחבי הפס של העירור והפליטה מוגדרים מראש ב- 5 ננומטר. המתחם נספג ב UV הקרוב, כך אורך גל העירור צריך להיות על 385 ננומטר. בתחילה, לפקח על פלואורסצנטיות ב 500 ננומטר בענף הפליטה.

  1. בפלורימטר, ודא כי מאווררי הקירור הפנימיים והחצונים בפלורימטר מופעלים לפני הפעלת מנורת הקסנון. מנורת הקסנון מתחממת מאוד, ודורשת קירור מתמשך.
  2. הפעל את המתח הגבוה (HV) לגלאי PMT ל- 400 V.
  3. פתח את שני התריסים.
  4. פתח את תוכנית רכישת הנתונים במחשב, כאן זה "100nmFluorScan".
  5. מקם את הפתרון "מדגם + 2 מ"ל הוסיף" (2) לתא קוורץ לשימוש לקביעת אורכי הגל העירור והפליטה הטובים ביותר.
  6. עם אורך גל הפליטה שנקבע בתחילה על 500 ננומטר, להפעיל סריקת עירור מ 335-435 ננומטר עם מהירות סריקה של 2 ננומטר / s.
  7. מתוך עלילת הפלואורסצנטיות המתקבלת, קבע את אורך הגל המרבי של עירור פלואורסצנטיות (EXλmax)והגדר את המכשיר לערך זה.

4. בחירת אורך גל הפליטה

  1. הגדר את אורך הגל פליטת פלואורימטר ל 450 ננומטר.
  2. הגדר את טווח אורך הגל של הפליטה כדי להפעיל סריקה של 100 ננומטר מ 450-550 ננומטר.
  3. כדי להתחיל את הסריקה, לחץ על כפתור "התחל ניסיון" בתוכנית באותו זמן של לחיצה על כפתור "START" בלוח הקדמי של הפלורימטר.
  4. מתוך עלילת הפלואורסצנטיות המתקבלת, קבעו את אורך הגל המרבי של פליטת פלואורסצנטיות(EMλmax)והגדירו את המכשיר לערך זה(איור 2).

Figure 2
איור 2. קביעת EXλmax אופטימלי ו- EMλmax אורכי גל.

5. מדידת הפלואורסצנטיות של הדגימות

  1. כל הדגימות מופעלות ב- EMλmax וב- EXλmax. סריקות אינן נחוצות עבור כל מדגם, אלא רק את ערך הפלואורסצנטיות בתנאים אלה. החל מדגם מדלל ביותר (ריק), למקם בתא קוורץ ולאחר מכן בכלי. הקלט את עוצמת הפלואורסצנטיות במחשבון המעבדה.
  2. חזור על הפעולה עבור כל הדגימות האחרות.
  3. זכור שיש להפחית את העוצמה היחסית הריקה מהעוצמה היחסית של כל פתרון לפני יצירת תרשים הכיול.

6. יצירת עלילת התוספת הסטנדרטית

  1. התווה את עוצמת הפלואורסצנטיות לעומת מיקרוגרם של Al3+ הוסיף.
  2. קבע את הערך הפחות ריבועי של התוויית התוצאה, ורשום הן את השיפוע והן את היירוט.
  3. קבע את הμg של Al3+ במדגם הלא ידוע מהמשוואה מיקרוגרם של Al3+ = -b/m
  4. בידיעה כי אלומיניום לא ידוע היה נפח של 25.0 מ"ל הוסיף לכל מדגם, לקבוע את הריכוז של אלומיניום לא ידוע.

השיטה של תוספת סטנדרטית היא טכניקת ניתוח כמותית המשמשת למזעור אפקטי מטריצה המפריעים לאותות מדידה של ניתוח.

ריכוזי רכיבים לא ידועים מובהרים לעתים קרובות באמצעות מגוון טכניקות אנליטיות, כגון ספקטרוסקופיית אור, ספקטרומטריית מסה ואלקטרוכימיה. עם זאת, המדידה יכולה להיות מושפעת מרכיבים אחרים במדגם, הנקראים המטריצה, ולגרום להפחתה או שיפור בשוגג של האות, הנקרא אפקטי מטריצה. אפקטים אלה יכולים להותות תוצאות ולגרום לשגיאות משמעותיות בניתוח.

השיטה של תוספת סטנדרטית יכולה לשמש כדי למזער את השפעות המטריצה על אותות מדידה. פעולה זו מבוצעת על ידי הוספת אמצעי אחסון מדויקים של פתרון ניתוח ידוע לדגימה.

וידאו זה יציג את היסודות של שיטת תוספת התקנים, ולהדגים כיצד לבצע את הטכניקה במעבדה באמצעות מדידת פלואורסצנטיות.

אפקטים מטריקס יכול להתעורר בדגימות מורכבות שבו מספר מולקולות אחרות אינטראקציה עם הניתוח. לדוגמה, זה יכול להתרחש כאשר מולקולות לאגד או להתאגד עם הניתוח, ובכך לשנות את יכולתו פלואורסצ'ה. או המטריצה עשויה לשנות את הכוח היוני של הפתרון הכולל, שינוי תכונות ספציפיות של הניתוח.

כדי לצמצם אפקטים אלה באמצעות שיטת התוספת הסטנדרטית, מתווסף טווח של אמצעי אחסון של פתרון סטנדרטי של ניתוח לאמצעי אחסון שווים של המדגם. אמצעי האחסון של הפתרון נעשים שווים באמצעות ממס.

לאחר מכן, האות נמדד עבור הדגימות עם ובלי התוספת הסטנדרטית. הנתונים מותווים כעוצמה לעומת כמות התקן שנוספה לדגימה, ולא כעקומת כיול קלאסית. הריכוז בפועל של הניתוח בכל בקבוקון נתון מוגדר על ידי המשוואה הבאה. התגובה האינסטרומנטלית תהיה שווה כמה קבוע פעמים את הריכוז של ניתוח. המשוואה המתקבלת מקבלת את הטופס הליניארי y=mx+b. לכן, כאשר העלילה משוערת לאפס ספיגה, היירוט שווה לריכוז הלא ידוע של המדגם.

עלילת האות חייבת להיות ליניארית מעל טווח הריכוז של הדאגה. כמו כן, ההפרעה לא צריכה להשתנות כמו היחס של ניתוח לשינויים מטריצה מדגם. לבסוף, המטריצה עצמה לא צריכה ליצור אותות מדידה בכוחות עצמה.

הניסוי הבא חוקר אלומיניום, מין שאינו פלואורסצנטי, על ידי תגובה עם 8-הידרוקסיקווינולין, או 8HQ, כדי ליצור את קומפלקס ALQ3 פלואורסצנטי.

הפלואורסצנטיות של קומפלקס האלומיניום בממס אורגני נמדדת, ולאחר מכן קשורה לריכוז פתרון האלומיניום המקורי. גישה זו נפוצה בניתוח של יונים מתכתיים.

כעת, לאחר שיסודות שיטת התוספת הסטנדרטית תוארו, ויסודות הניסוי מוסברים, בואו נבצע את הטכניקה במעבדה.

ראשית, להכין את פתרון מלאי אלומיניום 100-ppm במים, ולאחר מכן להשתמש בו כדי להכין פתרון סטנדרטי 1-ppm.

לאחר מכן, הוסף 2 גרם של 8-הידרוקסיקווינולין, או 8HQ, לבקבוק נפחי של 100 מ"ל.

בזהירות להוסיף 5.74 מ"ל חומצה אצטית קרחונית, ולאחר מכן לדלל לסימן 100-ML עם מים deionized. שלב זה מאפשר ל- 8HQ להתמוסס בשלב המ מימי.

לאחר מכן, להכין את המאגר על ידי הוספת 20 גרם של אצטט אמוניום ו 7 מ"ל של 30% אמוניום הידרוקסיד לבקבוק מסומן 100 מ"ל לדלל. אמת את ה- pH עם מקל מחוון pH. חיץ זה מסייע לנטרל את החומצה בתמיסת 8HQ בשילוב.

ריאגנטים אחרים הדרושים כוללים נתרן סולפט נטול מים וכלורופורם כיתה ספקטרופוטומטרית.

עכשיו להכין את הדגימות, במקרה זה על ידי חילוץ המדגם מימי לתוך השלב האורגני באמצעות מיצוי נוזלי נוזלי. הניחו שישה משפכים נפרדים בגודל 125 מ"ל על טבעות העומדות על טבעת בתוך מכסה המנוע. ודא שכל כלי הזכוכית נקיים בקפידה, מכיוון שכלי זכוכית מלוכלכים יהפכו את התוצאות. תייג ברצף את המשפכים "ריקים", "0", "1", "2", "3" ו-"4".

באמצעות פיפטה, להוסיף 25 מ"ל של פתרון אלומיניום לא ידוע לכל אחד מחמשת משפכי ההפרדה שכותרתו "0" עד "4". הכן את הריק על ידי הוספת 25 מ"ל של מים דהויוניזציה למשפך שכותרתו "ריק".

לאחר מכן, הוסף 1, 2, 3 ו- 4 מ"ל מהפתרון הסטנדרטי של 1-ppm למשפכים המספריים המתאימים. אל תוסיף פתרון סטנדרטי למשפכים הריקים או ל- 0.

הוסף 1 מ"ל של פתרון 8HQ ו 3 מ"ל של פתרון חיץ לכל אחד מ 6 משפכים.

בצע מיצוי נוזלי נוזלי על ידי הוספת 10 מ"ל של כלורופורם לכל בקבוקון. לנער את המשפך במרץ, ומדי פעם לפרוק את המשפך כדי לשחרר הצטברות לחץ. מניחים את המשפך בחזרה לתוך הטבעת, ומאפשרים לשכבות הנוזליות להיפרד.

לאחר מכן, לאסוף את שלב כלורופורם נקי, יבש, ומסומן 100 מ"ל. מאז כלורופורם יש צפיפות גבוהה יותר מאשר מים, זה השכבה התחתונה במשפך.

מעבירים את תמצית הכלורופורם לבקבוק נפחי של 25 מ"ל, ומכסים כל בקבוקון כדי למנוע אידוי.

בצע מיצוי נוזלי שני על הפתרון מימי הנותר, על ידי הוספת 10 מ"ל של כלורופורם לכל משפך. לנער את המשפך, כמו קודם, כדי להעביר כל ניתוח שנותר לשלב כלורופורם. לא אמור להיות צבע צהוב עזב בשלב מימי העליון.

חזור על החילוץ השני עבור כל משפך, ולאחר מכן לאסוף את שלבי כלורופורם בכוסות מתויגות תואמות. יוצקים את הכלורופורם שנאסף לתוך הבקבוקונים הנפחיים המתאימים שלהם, ומטללים לסימן עם כלורופורם טרי.

כדי להסיר מי עקבות, להוסיף כ 1 גרם של נתרן סולפט נטול מים לכל אחד מששת 100-ML כוסות. העבר את הפתרונות בחזרה לתוך שלהם בהתאמה, מערבולת כדי להקל על התייבשות של המדגם.

דקאנט תמצית כלורופורם לתא פלואורימטר קוורץ.

הגדר את הפלורימטר על פי הוראות היצרנים והגדר את המתח ל- 400 V. לאחר מכן, פתח את תוכנית רכישת הנתונים במחשב.

השתמש במדגם 2 כדי לקבוע את אורכי הגל הטובים ביותר של עירור ופליטה. הגדר את אורך גל הפליטה ל 500 ננומטר, ולהפעיל סריקת עירור מ 335-435 ננומטר, עם מהירות סריקה של 2 ננומטר/ s.

ממזימת הפלואורסצנטיות, קבעו את אורך הגל המרבי להתרגשות. הגדר את המכשיר לערך אורך גל עירור זה, במקרה זה 399 ננומטר.

לאחר מכן, לקבוע את אורך גל הפליטה על ידי ביצוע סריקה מ 450-550 ננומטר. מתוך עלילת הפלואורסצנטיות המתקבלת, קבעו את אורך הגל המרבי והגדירו את אורך גל הפליטה, במקרה זה 520 ננומטר.

מדוד כל דגימה, כולל הריק בסוף העירור והפליטה שנבחר. הקלט כל קריאת עוצמת פלואורסצנטיות.

הפחת את הפלואורסצנטיות הנמדדת של המדגם הריק מכל אחת מ-5 הדגימות האחרות.

התווה את עוצמת הפלואורסצנטיות של כל אחת מחמש הדגימות לעומת כמות האלומיניום שנוספה לדגימה. קבע את ערך הריבועים הפחותים של התוויית התוצאה, ותיעד את השיפוע ויירט.

העלילה של עוצמת פלואורסצנטיות לעומת כמות אלומיניום שנוספה הניבה קו פחות מרובע כפי שמוצג. לאחר מכן ניתן לחשב את כמות האלומיניום במדגם באמצעות קו זה. מאז כמות לא ידוע נוסף היה 25 מ"ל, הערך שנקבע, 2.916 מיקרוגרם מחולק על ידי 25 מ"ל. זה נותן תוצאה סופית של 0.117 מיקרוגרם / מ"ל, או 0.117 ppm. זה די קרוב לערך הידוע של 0.110 ppm.

עכשיו, בואו נסתכל על כמה טכניקות אנליטיות אחרות שיכולות להיות תוצאות מוטות עקב אפקטים מטריצה.

ספקטרוסקופיית ספיגה אטומית היא שיטה אנליטית המודדת את ספיגת האור על ידי ניתוח מטרה בשלב הגזי. עבור רוב הדגימות, עקומת כיול פשוטה הנוגעת לספיגה לריכוז מדגם, יכולה לשמש כשיטה אמינה לכימות ריכוז לא ידוע.

עם זאת, טכניקה זו עלולה לאבד דיוק אם רכיבים אחרים של התערובת אינטראקציה עם ניתוח היעד לדכא או לשפר את הספיגה. ניתן להשתמש בשיטת התוספת הסטנדרטית במקרה זה כדי להסביר את ההשפעות של אינטראקציות אלה, במיוחד בדגימות שבהן לא ניתן להסיר את המטריצה לפני הניתוח.

כיול מכשירים ממלא תפקיד מכריע בדיוק המדידה. שיטת התוספת הסטנדרטית משמשת לעתים קרובות כדי לסייע בכיול של מכשירים כגון ICP-MS. ICP-MS היא שיטה השוואתית, כלומר המדידה של מדגם לא ידוע מבוססת על מדידה של תקן כימי.

לפיכך, אי הוודאות של מדידה של לא ידוע לא יכול להיות טוב יותר מאשר חוסר הוודאות של הכיול. לפיכך, ניתן להשתמש בשיטת התוספת הסטנדרטית ליצירת עקומת כיול מדויקת יותר מהשיטה הרגילה, וחשבון אינטראקציות מטריצה במדגם.

מולקולות ביולוגיות רבות מנותחות באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים, או HPLC. HPLC היא טכניקה המפרידה ומנתחת תערובות מורכבות המבוססות על תכונות מולקולה כגון קוטביות, מטען וגודל. הזמן שבו הניתוח עוזב את העמודה מאפשר למשתמש לזהות כל רכיב בתערובת.

מולקולות ביולוגיות יכולות לעתים קרובות לקיים אינטראקציה בתערובת, והן מושפעות מאוד מהמטריקס שבו הן מושעות. לעתים קרובות, השיטה של חיבור סטנדרטי משמשת ליצירת עקומת כיול המסבירה את ההשפעות האלה.

הרגע צפית בהקדמה של JoVE לשיטת התוספת הסטנדרטית. עכשיו אתה צריך להבין כיצד לבצע את הטכניקה כדי להסביר את אפקטי מטריצה בניתוח מדגם.

תודה שצפיתם!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

סריקה של אורך גל העירור בין 335-435 הראתה את הספיגה הגבוהה ביותר ב-399 ננומטר, כך שמונוכרומט העירור נקבע לערך זה. לאחר מכן בוצעה סריקת הפליטה בין 450 ל-550 ננומטר, והאות החזק ביותר נמצא ב-520 ננומטר. אלה הם אורכי הגל המשמשים לכל הדגימות.

לדוגמה עוצמת פלואורסצנטיות עוצמת פלואורסצנטיות מתוקנת
ריק 0.008 0.000
לדוגמה 0.128 0.120
דוגמה + 1 מ"ל 0.167 0.159
דוגמה + 2 מ"ל 0.220 0.212
דוגמה + 3 מ"ל 0.260 0.252
דוגמה + 4 מ"ל 0.290 0.282

חלקה של פלואורסצנטיות (איור 3) לעומת מיקרוגרם של Al3 + הוסיף (איור 4) הניב קו ריבועי פחות של:

עוצמת פלואורסצנטיות = 0.0417 x (מיקרוגרם של Al3+ הוסיף) + 0.1216

כמות Al3+ = -(Y-Int)/שיפוע = -0.1216/0.0417 = -2.916 מיקרוגרם /מ"ל

מאז כמות לא ידוע הוסיף היה 25 מ"ל, אז ערך 2.916 מיקרוגרם / מ"ל צריך להיות מחולק על ידי 25.

ריכוז אלומיניום לא ידוע = 2.916 מיקרוגרם / מ"ל / 25.0 מ"ל = 0.117 מיקרוגרם / מ"ל = 0.117 ppm
שהוא די קרוב לערך בפועל של 0.110 ppm (6.4% שגיאה).

Figure 3
איור 3. פלואורסצנטיות של הדגימות.

Figure 4
איור 4. התוויית הכיול של התוספת הסטנדרטית.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Applications and Summary

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

השיטה של תוספות סטנדרטיות היא לעתים קרובות הטכניקה המשמשת כאשר נדרשות תוצאות כמותיות מדויקות, המשמשת בניתוח אנליטי כגון ספיגה אטומית, ספקטרוסקופיית פלואורסצנטיות, ICP-OES וכרומטוגרפיה של גז. זה משמש לעתים קרובות כאשר ישנם רכיבים אחרים במדגם של עניין שגורם גם הפחתה או שיפור של הספיגה הרצויה לתוצאות כמותיות. כאשר זה המקרה, אי אפשר פשוט להשוות את אות הניתוחים לסטנדרטים באמצעות הגישה המסורתית של עקומת הכיול. למעשה, הערכת אפקט מטריצה צריכה להיות חלק הכרחי של הליך האימות.

דוגמה נוספת שבה ניתן להשתמש בנתוספות סטנדרטיות היא בעת חילוץ כסף מפסולת צילום ישנה. הפסולת מכילה חלידים כסופים, וניתן לחלץ אותה כך שניתן יהיה להחזיר את הכסף. על ידי ספייק "פסולת" לא ידוע עם כמויות ידועות של כסף, שיטה זו יכולה לחזות את כמות הכסף המתקבלת מסרט הצילום.

עובדים החשופים למפעלי ייצור בנזן נבדקים לעתים קרובות כדי לוודא שהם נמצאים בבטחה מתחת לרמות המקובלות של בנזן. השתן שלהם נבדק לכימיקל, וזו המטריצה הביולוגית. כמו כן, כמות דיכוי הניתוח משתנה עבור אנשים שונים, כך שערכת כיול אחת לא תעבוד. בשיטת התוספת הסטנדרטית, כל עובד יכול להיבדק ולהעריך במדויק.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter