紫外-可见光谱法（UV-Vis）是实验室中最常用的分析技术之一。

在紫外-可见光谱法中，将特定波长的紫外光或可见光照射通过样品。如果样品吸收部分光线，则并非所有光都能通过或被透射。透射率是指透射光强度与入射光强度的比值，其与吸光度相关。吸光度可定量地用于测定样品的浓度，也可定性地通过将测量得到的一定波长范围内的吸光度（即吸光度光谱）与已发表的数据进行比对，从而鉴定化合物。本视频将介绍紫外-可见光谱法，并演示其在实验室中用于测定样品浓度和反应动力学的应用。

当一个光子撞击分子并被吸收时，该分子会从基态跃迁至更高的能级。这两个能级之间的能量差即为带隙。只有当光子的能量恰好与带隙相匹配时，光子才能被吸收。化学结构决定了带隙的大小；因此，每种分子都具有独特的吸收光谱。

吸光度遵循比尔定律，该定律指出吸光度等于摩尔衰减系数乘以光程长度和浓度。摩尔衰减系数与特定化合物对某一特定波长光的吸收能力有关。光程长度是指光通过样品所经过的距离，标准比色皿通常为 1 cm。如果已知吸光系数，可利用比尔定律计算样品浓度，也可使用标准曲线法。

紫外-可见光谱法常被称为一种通用技术，因为大多数分子都能在紫外-可见光波长范围内吸收光。紫外光范围为100–400 nm，可见光谱范围为400–700 nm。然而，大多数分光光度计并不在100–200 nm的远紫外区工作，因为该范围内的光源成本较高。大多数紫外-可见分光光度计在紫外区使用氘灯，其发光范围为170–375 nm；在可见光区使用钨丝灯，其发光范围为350–2,500 nm。

由于光源通常为具有宽波长范围的灯，因此需使用滤光片或单色器来选择特定的吸收波长。单色器是一种将光的波长在空间上分离的装置，然后在所需波长的光位置处设置出口狭缝。通过扫描单色器的波长范围，可以获得完整的吸收光谱。这使得该技术在定量和鉴定多种分子方面具有广泛应用。

在概述了紫外-可见光谱法的基本原理后，让我们来看一下实验室中一个简单的紫外-可见光谱实验。

开始测量前，先打开分光光度计，并让光源预热适当时间以使其稳定。

使用干净的比色皿加入样品溶剂制备空白样，然后用无绒纸擦拭外壁以去除任何指纹。

确保比色皿的磨砂面避开光路，并将其正确对齐后插入分光光度计中。盖紧盖子，防止环境光进入系统。

测量空白样品在单一波长或波长范围内的吸光度。记录或保存该吸光度值，因其必须从样品的吸光度中扣除。

接下来，弃去空白样，用待测样品冲洗比色皿两次。然后，向比色皿中加入约 ? 满的样品。再次擦拭比色皿外壁，确保其清洁且无指纹残留。

将比色皿以正确的方向放入分光光度计中，并盖好盖子。

在与空白样品相同的波长或波长范围内采集吸光度测量值或光谱。如果仪器未自动执行此操作，则减去空白光谱或测量值。

根据采集的吸收光谱，确定最大吸收值，即 ?max。

为了定量样品中分析物的含量，需使用一系列已知浓度的分析物建立标准曲线。有关如何