Fonte: Laboratorio del Dr.B. Jill Venton - Università della Virginia
La spettroscopia ultravioletto-visibile (UV-Vis) è una delle tecniche analitiche più popolari perché è molto versatile e in grado di rilevare quasi tutte le molecole. Con la spettroscopia UV-Vis, la luce UV-Vis viene fatta passare attraverso un campione e viene misurata la trasmittanza della luce da parte di un campione. Dalla trasmittanza (T), l'assorbanza può essere calcolata come A=-log (T). Si ottiene uno spettro di assorbanza che mostra l'assorbanza di un composto a diverse lunghezze d'onda. La quantità di assorbanza a qualsiasi lunghezza d'onda è dovuta alla struttura chimica della molecola.
UV-Vis può essere utilizzato in modo qualitativo, per identificare gruppi funzionali o confermare l'identità di un composto abbinando lo spettro di assorbanza. Può anche essere usato in modo quantitativo, poiché la concentrazione dell'analita è correlata all'assorbanza usando la legge di Beer. La spettroscopia UV-Vis viene utilizzata per quantificare la quantità di DNA o proteine in un campione, per l'analisi dell'acqua e come rivelatore per molti tipi di cromatografia. La cinetica delle reazioni chimiche viene misurata anche con la spettroscopia UV-Vis prendendo ripetute misurazioni UV-Vis nel tempo. Le misurazioni UV-Vis sono generalmente prese con uno spettrofotometro. UV-Vis è anche un rivelatore molto popolare per altre tecniche analitiche, come la cromatografia, perché può rilevare molti composti.
Tipicamente, UV-Vis non è la tecnica di spettroscopia più sensibile, perché non molta luce viene assorbita su una breve lunghezza del percorso. Altre tecniche di spettroscopia come la fluorescenza hanno una sensibilità più elevata, ma non sono così generalmente applicabili, poiché la maggior parte delle molecole non sono fluorescenti. UV-Vis ha una sensibilità simile ad altre misurazioni di assorbanza, come la spettroscopia infrarossa.
La spettroscopia ultravioletto-visibile, o UV-Vis, è una delle tecniche analitiche più diffuse in laboratorio.
Nella spettroscopia UV-Vis, la luce viene fatta passare attraverso un campione a una lunghezza d'onda specifica nello spettro UV-Vis, o visibile. Se il campione assorbe parte della luce, non tutta la luce passerà attraverso o verrà trasmessa. La trasmissione è il rapporto tra l'intensità della luce trasmessa e la luce incidente ed è correlata all'assorbanza. L'assorbanza può essere utilizzata in modo quantitativo, per ottenere la concentrazione di un campione. Può anche essere utilizzato in modo qualitativo, per identificare un composto abbinando l'assorbanza misurata su un intervallo di lunghezze d'onda, chiamato spettro di assorbanza, ai dati pubblicati. Questo video introdurrà la spettroscopia UV-Vis e dimostrerà il suo utilizzo in laboratorio per determinare la concentrazione del campione e la cinetica di reazione.
Quando un fotone colpisce una molecola e viene assorbito, la molecola viene promossa dal suo stato fondamentale a uno stato di energia superiore. La differenza di energia tra i due è la banda proibita. L'energia del fotone deve corrispondere esattamente alla