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Isolement des bactéries fécales provenant d’échantillons de l’eau par Filtration
 

Isolement des bactéries fécales provenant d’échantillons de l’eau par Filtration

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Filtration sur membrane et la culture subséquente de bactéries collectés est une technique utile pour évaluer la qualité et la propreté d’une source d’eau.

La qualité des eaux destinée à une utilisation en milieu agricole, loisirs ou domestique est d’une grande importance, étant donné le risque de flambées de maladies d’origine hydrique. Si l’eau est contaminée par les matières fécales des animaux ou des humains, parasites pathogènes, bactéries ou virus peuvent se propager à de nouveaux hôtes lors de leur ingestion. Surveillance des sources d’eau pour ces organismes pathogènes est donc essentiel de s’assurer de la santé publique.

Le nombre et la variété de pathogènes fécale-orale qui peuvent être présentes dans une source d’eau fait il est impossible d’analyser pour chacun indépendamment et de manière régulière. Au lieu de cela, communes tests microbiologiques pour la qualité de l’eau utilisent des bactéries indicatrices coliformes. Pour plus d’informations sur ce processus, voir la vidéo de cette collection sur les bactéries indicatrices.

Cette vidéo va illustrer le processus de filtration sur membrane sur un échantillon d’eau environnement, montrent comment la culture de plusieurs types de bactéries fécales indicateur dont les coliformes totaux, coliformes fécaux et entercocci fécale et décrivent comment vérifier la présence de contamination fécale.

Technique de filtration sur membrane utilise une pression négative pour dessiner des échantillons d’eau à travers un filtre et piège les bactéries. Le filtre est une membrane spécialisée avec une taille moyenne de pore minimal de 0,45 μm qui permet la capture de bactéries, qui sont généralement autour de 1 μm de taille. Après filtration, la membrane est appliquée aux milieux de croissance d’agarose et incubée dans des conditions appropriées à la culture des micro-organismes de la cible.

Cette technique est idéale pour des sources de faible turbidité comme eau potable, les piscines, ou les lacs et les réservoirs. Eau forte teneur de matière particulaire peut entraîner encrassement ou colmatage du filtre, limitant le volume qui peut être traité. En outre, filtration sur membrane n’est pas pratique pour les sources d’eau contenant un grand nombre d’arrière-plan, ou non-coliformes, comme les eaux d’égout brute, car cela peut augmenter la difficulté de l’énumération des coliformes cible sur la culture et de l’incubation.

Une fois les échantillons bactériens ont été piégés dans le filtre, ils peuvent être transférés à des plaques de croissance afin de déterminer les types de bactéries indicatrices présents dans les échantillons d’eau. Placage sur différents types de média sélectionne pour différents types de bactéries et peut permettre une identification rapide.

Après croissance sur plaques spécifiques de culture, plus confirmation des identités de bactéries indicateur est réalisable à l’aide de techniques telles que la cueillette des colonies dans les milieux liquides et en utilisant des tubes de Durham au captage des gaz, qui devraient seulement être produites en présence de coliformes fécaux ou des coliformes totaux. En outre, les entérocoques fécaux présumés peuvent être confirmés par une combinaison d’une coloration de Gram positif, avec un essai de peroxyde d’hydrogène-catalase négative.

Maintenant que nous sommes familiers avec les principes qui sous-tendent la filtration sur membrane d’échantillons d’eau, examinons un comment cette procédure est effectuée.

Pour commencer la procédure, tout d’abord recueillir des échantillons d’eau provenant de sources d’eau test d’intérêt. S’assurer que les échantillons sont prélevés dans des bouteilles de 1 L stériles. Une fois la collection terminée, mettre les échantillons sur la glace et les transportent au laboratoire pour analyse microbienne.

Pour commencer l’analyse, tout d’abord stériliser un collecteur de filtration membranaire. Ensuite, raccorder la tubulure à une pompe à vide et un flacon de déchets de filtration contenant eau de Javel.

L’éthanol pince flamme-stériliser et enlever une membrane quadrillée stérile de l’emballage. Placez le filtre sur le centre de la zone de filtration membranaire du collecteur et placer un entonnoir filtre stérile sur l’unité, puis fixez en place.

Mesurer un volume d’eau d’essai dans l’entonnoir désiré. Appliquer un vide partiel pour dessiner l’échantillon d’essai à travers le filtre. Suspension des matériaux solides, y compris les bactéries et autres matières organiques, supérieure à 0,45 μm sera bloqué sur ou dans le filtre, tandis que les particules plus petites, les virus et de solides dissous passe bien que dans la fiole de déchets contenant du javellisant.

Après que l’échantillon est passé par le filtre, rincez l’intérieur de l’entonnoir avec 25 mL d’eau stérile 3 fois, permettant de traverser le filtre. Lors du rinçage final est terminé, débranchez l’aspirateur et enlever l’entonnoir de la tubulure.

Ensuite, l’éthanol flamme-stériliser pince et retirez immédiatement la membrane filtrante de l’appareil. Placez-la sur la plaque de croissance approprié pour le microorganisme cible à l’aide d’un mouvement de roulis pour assurer un contact complet avec la surface et de ne pas emprisonner de bulles d’air.

Pour le traitement de chaque échantillon supplémentaire, désinfecter le collecteur en acier inoxydable et utiliser un entonnoir stérile pour éviter toute contamination croisée. Enfin, placer les plaques dans un incubateur pour la période d’incubation adéquate.

Après la période d’incubation, enlever les plaques de l’incubateur pour l’énumération. Si possible, effectuer le dénombrement des colonies sous grossissement de faible puissance à l’aide d’une source de lumière blanche froide. Pour déterminer les coliformes totaux, identifier et dénombrer les colonies qui apparaissent en rose à rouge foncé en couleur et ont un éclat de surface métallique, entièrement ou partiellement couvrant la colonie. Des colonies de coliformes totales atypiques peuvent apparaître mucoïde, rouge foncé, ou nucléées sans reflet.

Les colonies qui apparaissent bleu, incolore, blanc ou rose sans reflet sont considérés comme non-coliformes et ne devraient pas figurer dans le dénombrement des coliformes totaux.

Des colonies de coliformes les apparaîtront sous diverses nuances de bleu, et ceux-ci devraient être comptées comme une catégorie distincte. Les colonies de coliformes fécaux-non sont généralement gris à la crème de couleur et doivent également être enregistrés dans une catégorie individuelle. Enfin, les colonies d’entérocoques fécaux seront la gamme du rose au rouge foncé en couleur et devraient être comptées séparément.

Pour vérifier les colonies de coliformes totales, appliquer une boucle inoculer stérilisée et refroidie à une seule colonie d’intérêt. Transvaser la colonie sélectionnée dans un récipient en verre contenant le bouillon lauryl tryptose et un tube de Durham. Ensuite, placez les cultures dans un incubateur. La présence de la turbidité ainsi que la production de gaz capturée par le tube de Durham vérifie la colonie comme un coliformes totaux.

Pour une vérification de coliforme fécale, transférer aseptiquement colonies de couleur bleues dans les récipients en verre contenant du milieu stérile de EC et un tube de Durham. Placer les tubes inoculés dans un incubateur. Après incubation, trouble inocule en conjonction avec gaz production confirment la colonie d’être un coliforme fécal.

Pour confirmer les entérocoques fécaux, aseptiquement transfert présumé des colonies avec la morphologie correcte sur plaques de gélose cœur-cerveau et incuber. Ensuite, transférer la croissance d’une colonie isolée sur BHIA sur deux lames de verre stérile.

Ajouter 2 à 3 gouttes de peroxyde d’hydrogène 3 % à l’un des lames de verre. La production de gaz rapide indique une bactérie catalase positive tels que Citrobacter. Les bactéries entérocoques fécaux sont catalase négative ; par conséquent, aucune propagation n’est observée. Pour les colonies catalase-négatifs qui ne s’affichent pas bouillonnant, effectuer une coloration de Gram. Comme les entérocoques fécaux, ces devraient apparaître Gram positif, ovoïde en forme et être plus souvent groupées en paires ou courtes chaînes.

Pour trouver un de ces bactéries indicatrices à une source d’eau indique la présence d’une contamination. Si plus de 5 % des échantillons sont jugées être contaminés sur une période d’un mois, la source peut être considérée impropre à la consommation humaine.

Filtration sur membrane est couramment utilisée dans un certain nombre d’applications biologiques et micro-organismes indicateurs fécaux peuvent également être détectés par d’autres procédures expérimentales. Certaines de ces applications sont abordés ici.

Filtration sur membrane permet également au virus capture d’échantillons d’eau. Comme les virus seront généralement présents en très faibles quantités, des échantillons d’eau doivent être concentrés afin de les capturer pour l’analyse. Virus capturés peuvent être ensuite libérés les filtres et identifié à l’aide de techniques telles que l’infectivité essais sur culture de cellules ou PCR.

Filtration sur membrane est également utilisée dans la production d’eau ultra-pure pour usage industriel ou de laboratoire. Beaucoup d’industries ont besoin d’eau ultra-pure pour leurs processus opérationnels, et filtration sur membrane peut servir à éliminer les contaminants, y compris les métaux dissous indésirables et les sels de l’eau. Il peut également être utilisé dans le dessalement de l’eau salée pour produire l’eau potable.

Vous avez juste regardé introduction de Jupiter à l’identification des micro-organismes indicateurs dans l’eau par filtration sur membrane. Vous devez maintenant comprendre comment des échantillons d’eau filtre à membrane, comment la culture de plusieurs types de bactéries fécales indicateur de la membrane et comment ces organismes indicateurs confirment. Merci de regarder !

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