Overview
来源: 凯斯图尔特, RVT, RLATG, CMAR;瓦莱丽. 施罗德, RVT, RLATG。圣母大学, 在
在实验室小鼠和大鼠中有许多常用的复合用药路线。然而, 协议可能需要使用不太常用的路线: 心内、脚和复古轨道注射。专业培训对于这些程序的成功执行至关重要。为获得机构动物保育和使用委员会 (IACUC) 批准, 可能需要提供这些路线的理由。
Principles
心内管理已用于各种应用, 包括发展的动物模型的骨肿瘤转移, 以及检查的影响, 直接心内分娩的结果心肌梗塞。这个过程通常是通过使用超声波来引导针进入心脏的正确位置。 2 然而, 当正确地使用适当的地标时, 这个过程可以执行, 不用超声形象化.
由于程序的侵入性, 在 IACUC 协议中使用心内注射必须具有科学合理性。只有一个生存注射应该被允许。这一程序要求使用普通麻醉药, 无论是吸入或注射, 根据组织内建立的准则。针的选择应该是最小的尺寸, 使材料的粘度得以注入;通常使用27-30 口径的针。注塑量范围从100和 #181; l 到最多300和 #181; l.
在小鼠尾部静脉注射, 既具有挑战性, 也常常不成功。静脉用药的另一条途径是通过逆行眶丛。虽然这项技术需要训练和技能的执行, 研究表明, 有一个更高的成功率与后侧尾静脉注入的复古眶注射。 3、4、5 在手术过程中, 需要进行麻醉以防止鼠标移动。一般的吸入麻醉通过一个钟罩或一个感应室连接到一个精密的汽化器是有效的。然而, 如果吸入将被使用, 请注意, 动物将开始迅速恢复一旦它被从会议厅中移除, 所以你必须准备进行注射。当进行多项注射时, 推荐使用局部眼麻醉 (丁卡因或丙).
鼠和鼠的眼眶静脉结构不同。小鼠有多个血管的窦或汇合, 包括眶静脉、背鼻静脉、下睑静脉和颞浅静脉, 以填补眼眶周围的空间。在鼠眶区, 有一个网络或神经丛的血管。与所有注射, 选择的针应该是最小的大小可能;一般为27-30 口径针。虽然有大量的报告, 最大的音量是150和 #181; L 每只眼睛。 3、4、5 建议每只眼睛注射一次, 每只眼睛两针用于生存程序。另外, 注射之间至少应该有一天的间隔。对于 nonsurvival 程序, 容量可达500和 #181; 我可以被管理.
尽管有争议, 但一些研究仍需要使用脚垫作为注射点。经足底注射后, 某些小鼠的抗体应答明显比注射到跗关节时强。 6 必须密切监视所有动物的疼痛迹象, 食物消耗水平和正常移动。脚的自残可能发生在脚被毁坏的程度。这是慢性疼痛的征兆。任何动物示范自残应立即呼吁兽医工作人员的注意.
脚测量应在出现明显肿胀的情况下每天进行。端点必须根据 IACUC 的指导方针到位。一般来说, 当病变或肿瘤干扰动物和 #39 的能力, 走动或到达食物和水时, 动物必须被安乐死。可注入脚的最大音量为50和 #181;建议注射用29-30 口径针.
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Procedure
1. 心内注射
- 地标和定位: 将鼠标或鼠置于右侧侧卧床 (左侧朝上) 或背卧床, 并识别地标。
- 将心脏的位置与肘部的点和胸骨的左侧大致水平.
- 在肘点处的肋骨之间插入针.
- 在背部卧床的动物中, 将针头插入与表平行的胸部.
- 在侧卧床的动物中, 将针插入垂直于表的胸部.
- 文章的注入
- 确保在将针头插入心脏后, 针的移动极少, 以防止肌肉被撕裂并导致心包囊出血, 因为这会影响心脏功能.
- 吸入注射器以确定适当的放置位置。注射器的中心经常有一闪血.
- 握住注射器, 以便在针头定位在心脏后, 不将手放在注射器上进行注射.
- 以缓慢而稳定的方式注入文章.
- 缓慢取出针头以减少出血.
- 感染呼吸窘迫、癫痫、青紫、长期共济失调或其他与注射创伤有关的后遗症的小鼠必须由兽医工作人员评估, 并根据他们的建议进行安乐死.
图1。小鼠心内注射.
2. 静脉注射利用逆行眶丛
- 注入地标和定位
- 将动物放在侧面卧床的平坦表面上.
- 将针插入45和 #176 的眼睛内侧眼角; 角对鼻子.
- 针的深度必须足够穿透结膜组织, 并在眼球轨道后面和眼丛中前进。当放置针时, 它不应该碰到轨道后面的骨头.
- 将食指放在头部顶端, 拇指放在下巴上.
- 轻轻地向后和向下拉以收紧皮肤并凸出眼球.
- 注意不要将压力施加在气管上, 并限制气流.
- 注入
- 将针放在眼睛后面, 而不是 intra-ocularly.
- 确保针的运动一旦插入到后轨道丛中, 或者血管会破裂造成出血, 并使药物流失到眼球后面的组织中。握住注射器, 这样, 一旦针被定位在后轨道丛中, 手就不会在注射器上重新定位.
- 不要用注射器吸气, 因为你会将血管折叠起来.
- 以缓慢而稳定的方式注入文章.
- 取出针头并将光压施加到眼睛以控制出血并提供止血.
- 经验丰富、结膜炎或其他与注射创伤有关的后遗症的小鼠必须由兽医工作人员评估, 并根据其建议进行治疗或安乐死
图2。小鼠眼眶内注射.
3. 脚注射液
- 为了克制, 将动物放在一只后腿隔离的管束中, 并通过抓住窒息的皮肤来伸展。
- 用水或酒精擦拭脚, 以便在注射之前清除碎片.
- 在注射部位的后足中心形成一个小气泡。为了避免血管的长度运行的脚, 注入刚刚从中线平行的血管.
图3。小鼠和大鼠脚注射液.
心内, 复古轨道和脚是一些专门的注射方法, 生物医学研究员使用的实验, 需要通过这些不典型的路线交付化合物.
心腔注射将该化合物传递到左心室, 使物质直接进入动脉循环。复古轨道路线是一种替代尾静脉注射, 并用于交付化合物进入静脉循环。和脚注射涉及皮下管理的文章进入动物和 #39; s 后足。这段视频将说明这些特殊注射技术的考虑、程序和应用.
让与 #39; s 从一些背景信息开始, 在开始这些管理过程之前应考虑的事项.
心内管理通常是通过使用超声波来引导针进入心脏的正确位置。然而, 如果正确地使用适当的地标, 管理可以执行, 不用超声形象化。请注意, 该程序要求使用普通麻醉药, 并且每只动物只允许一次注射以进行生存程序。一般情况下, 注射用27-30 针, 最大管理量分别为100和300升小鼠和大鼠.
对于通过逆行轨道路径进行静脉注射, 应对眼眶静脉结构有一个合理的了解。一只老鼠有一个窦, 那里有几道静脉--眶、背鼻、下睑和颞浅的会聚。而在大鼠, 有一个网络或几个静脉丛。注射直接在鼻窦或丛中进行。像心内, 这一过程也需要使用全身麻醉, 每只眼睛每天只注射一针, 每只眼睛的生存程序, 建议。与所有注射一样, 最小尺寸的针应选择-一般27-30 计-和建议的最大音量是150和 #956; L 每只眼睛.
尽管有争议, 但一些研究仍需要使用脚注射液, 通常与炎症和肿瘤生长有关。请注意, 注射只能在一只脚上进行, 绝不是双向的。脚的测量应在明显的肿胀发生后每天进行。建议注射29-30 口径针头, 建议的最大音量为50和 #956;在注射之后, 所有的动物都必须严密监视, 以观察疼痛、进食量和正常移动的迹象。通常情况下, 当病变或肿瘤干扰动物和 #39; 走动或到达食物和水的能力时, 动物必须被安乐死.
现在让 & #39; s 学习注射过程, 从心腔注射开始。我们将演示程序老鼠, 但大鼠的地标和协议是相似的.
第一步是准备注射器。召回29口径针和1毫升注射器是适合小鼠。心腔注射最大容积为100升。在绘制溶液时, 在柱塞和注塑材料之间留出少量的空气。这是为了让血液进入注射器, 因为它是放在心脏.
启动时, 使用吸入或注射麻醉剂麻醉动物。回顾在本系列的另一视频中保持全身麻醉的注意事项。接下来, 在一个绝缘的平台上将动物置于背卧床位置。然后, 将前肢绑在平台上, 并将一条胶带横过臀部上方的腹部。这是为了进一步稳定的动物, 并避免任何运动, 一旦针头已插入。接下来, 用棉签, 湿动物和 #39 的胸部与70% 酒精.
要精确定位注射部位, 首先找到剑和柄胸骨。然后, 找到两个地标之间的中点。1-2 mm 离开这一点, 是针插入的地标。使用棉签, 应用聚维酮碘标记针插入部位.
注入, 将针垂直于表, 并将其插入深度约2毫米。然后, 对柱塞施加非常轻微的背压。鲜红的含氧血应该进入注射器中枢, 这证实了正确的位置。将注射器放在同一个位置, 并在30至60秒的过程中缓慢而稳步地注入材料。快速注射可导致细胞结块和动脉堵塞, 由于物质的温度明显低于体温, 或心室扩张和心律失常, 系统受到冲击.
一旦材料清除了注射器, 慢慢地, 小心地移除针头, 没有任何侧向运动, 因为这会损害心脏肌肉。然后立即松开前腿和腹部的带子, 将动物置于一个干净的笼子里, 并将其置于有足够深度的寝具中, 作为隔热层。请注意, 这个恢复笼的一半是在一个加热源和麻醉动物位于笼的加热一侧。这可以防止体温过低, 当动物从麻醉中恢复时, 它就能够根据需要从加热的一侧移开.
下一步, 让 & #39; 我们学习了利用大鼠逆行眶丛进行静脉注射的方法。同样, 我们将在鼠标上演示程序, 但大鼠的地标和协议是相似的.
将适当的针头连接到选定的注射器并填充注射材料。记住, 通常你将使用27-30 测量针以最小的注射器可能和最大容量150升.
启动过程, 首先麻醉动物。然后, 把它放在一个平面上的横向卧床位置。现在把食指放在头的顶端, 拇指放在下巴上, 轻轻地向后拉。这是收紧皮肤和凸出眼球。注意不要在气管上施加压力并限制气流。如果计划多注射, 应用局部眼部麻醉, 如丁卡因或丙.
将针插入45和 #176 的眼睛内侧眼角; 角对鼻子。深度必须足以穿透结膜组织, 进入眼球轨道并进入鼻窦。它不应该在轨道的后面碰到骨头。为避免血管破裂, 请确保针头在插入后有最小的运动。不要吸气, 因为那会使血管坍塌。缓慢而稳定地注入文章。然后, 轻轻地取出针头, 用轻压到眼睛来控制出血并提供止血.
最后, 让和 #39; 脚注射法对小鼠和大鼠的评价。要开始, 附上适当的针和填装注射器与正确的容量。这个程序可以在有意识的动物中进行.
将动物置于束缚管中, 用一只后腿隔离, 并通过抓住窒息的皮肤来延长。用水或酒精擦拭脚, 在注射前清除碎片。为了避免血管的长度运行的脚, 注射地标是在中心, 但刚刚从中线, 更接近脚趾.
将针锥放在注射点上, 将其指向脚跟。缓慢、稳步地注射, 避免足部组织迅速扩张。这将导致脚膨胀, 因为注射材料填充, 皮下空间。在一个小动物和 #39; s 脚从注射的肿胀可以延伸到脚跟, 而在较大的动物, 它会更本地化.
注射后, 观察动物每日, 如果持续肿胀存在, 或如果有病变或肿瘤由于实验协议, 然后, 使用卡尺, 执行脚测量。这仪器测量脚厚度在毫米并且帮助定量肿胀.
现在让 & #39; s 讨论利用心腔、复古轨道和脚注射的几个例子.
心内管理的许多应用之一是肿瘤转移的动物模型的发展。在这里, 研究人员使用这一途径来注射具有骨定植倾向的肿瘤细胞。在接下来的几天里, 他们用 X 射线和荧光成像技术研究了骨骼中的肿瘤生长。在另一项研究中, 采用了回溯轨道路线来注射特定的抗体来标记中性粒细胞。然后, 在活体成像的帮助下, 科学家们能够追踪标记细胞的迁移模式.
最后, 研究者经常使用脚注射来分析炎症反应。在这项实验中, 研究人员从人体血液样本中分离出外周血单个核细胞, 并将其与不同的检测抗原混合, 并将溶液注入动物和 #39; 脚。最后, 他们进行足部测量, 以量化的肿胀反应, 由于不同的抗原.
您和 #39; 我只是看了朱庇特和 #39 的最后一集, 通常和专门的复合管理技术.
只是回顾一下, 在第一部分中我们回顾了最常见的肠外途径。在第二章中, 我们讨论了肠内和局部的程序。第三部分处理第一套非典型程序, 如皮内, 鼻腔, 和 intracranial 在新生儿。最后, 在这里, 我们讨论了三额外的路线, 生物医学研究人员在实验室用于特定目的.
看完本系列后, 您应该对不同的管理技术有更好的了解, 并且您还应该知道与这些协议有关的一般和具体的考虑, 一如既往, 感谢看!
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Applications and Summary
对动物的化合物进行管理可以对动物的福祉和实验数据的结果和科学价值产生重大影响。正确的分娩方式对实验的成功至关重要。必须考虑许多因素来确定最佳路线, 包括研究的科学目的、物质的 pH 值、所需的剂量量、物质的黏度以及动物的福祉。技术专长也是所有注塑方法的要求.
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References
- Morton, D.A., Jennings, M., Buckwell, A., Ewbank, R., Godfrey, C., Holgate, B., Inglis, I., James, R., Page, C., Sharman, I., Verschoyle, R., Westall, L., and Wilson, A.B. 2001. Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Members of the Joint Working Group on Refinement. Laboratory Animals. 35. 1-41
- Prendiville , T.W., Qing, M., Lin, Z., Zhou, P., He, A., and Pu, W.T. 2014. Ultrasound-guided Transthoracic Intramyocardial Injection in Mice. Journal of Visualized Experiments. 90 | e51566.
- Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H.D., Huizing, M., and Hoogstraten-Miller, S. 2001. Retro-orbital injection in mice. Lab Animal. 40:5. 155-171.
- Steel, C., Stephens, A., Hahto, S., Singletary, S., Ciavarra, R. 2008. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Anim. 37. 26-31.
- Timm, K.I. 1989. Orbital venous anatomy of the Mongolian gerbil, with comparison to the mouse, hamster, and rat. Laboratory Animal Science. 39:3. 262-265.
- Kamala, T. 2007. Hock immunization: a humane alternative to mouse footpad injections. Journal of Immunological Methods. 328. 204-214.