Administração Composta III

Às vezes, diferentes abordagens experimentais exigem o uso de rotas menos comumente empregadas de administração composta em roedores. Intradérmico, intranasal e intracraniano são três dessas rotas alternativas que os pesquisadores biomédicos usam em laboratórios hoje.

Como o nome sugere, intradérmico está entregando compostos nas camadas externas da dermis. A Intranasal está colocando a solução nas nares do animal. E intracraniano envolve inserir a agulha diretamente no cérebro do roedor.

O treinamento especializado é essencial para a realização desses procedimentos com sucesso. Aqui, primeiro ilustraremos as considerações para cada um desses métodos e, em seguida, vamos demonstrar as técnicas que ajudarão você a aprender os procedimentos, garantindo a segurança do animal e o sucesso do experimento.

Vamos começar com a discussão de quando essas rotas são geralmente empregadas e coisas que se deve ter em mente antes de começar a executar essas técnicas de administração especializadas.

As injeções intradérmicas são usadas para entregar um artigo no espaço entre a epiderme e a derme Esta rota é geralmente reservada para a avaliação de inflamação, diagnóstico de fluxo sanguíneo cutâneo ou reações alergênicas a um antígeno. Semelhante a outras rotas, a solução intradérmica também deve ser preparada utilizando a técnica estéril. E deve ser fisiologicamente tamponado para ter um pH neutro, a fim de evitar necrose tecidual no local da injeção. Um sistema sem cubos com uma agulha calibre 25-30 é frequentemente usado para esta injeção. Este sistema ajuda na preservação do volume de administração, que está na faixa de 50-100 microliters por local de injeção. O excesso de injeção pode resultar em necrose ou vazamento de composto indesejável devido à pressão.

A rota intranasal é frequentemente escolhida para a entrega local de vacinas ou spray descongestionante, bem como a entrega sistêmica e CNS. A mucosa que reveste a cavidade nasal tem um rico suprimento de vasos sanguíneos e nervos que permitem uma rápida absorção sistêmica e direcionamento direto ao SNC. Este é um método não invasivo que requer treinamento mínimo e habilidade, e equipamento simples - uma micropipette calibrada e algumas dicas descartáveis. Os volumes de administração para ratos não devem exceder 40-100 microlitres dados em 6-10 microliteres-drops. E para camundongos, o volume total máximo é de 24 microliters dados em 3-4 microliter-drops.

Embora a anestesia não seja necessária para este procedimento, ela tem algumas vantagens sobre a administração intranasal em animais conscientes 1) facilita a colocação adequada do composto nas nares, garantindo dosagem precisa 2) elimina a possibilidade de o animal morder o equipamento de dosagem 3) garante que não haja lesão no tecido nasal do animal, olhos, ou pele facial devido ao empurrão da cabeça, e 4) animal é menos propenso a cheirar e pulverizar o composto das nares após a administração.

Injeções intracranianas em camundongos adultos e ratos empregam o uso de equipamentos estereotaxicos, que é descrito em um vídeo na coleção "Essenciais da Neurociência". O equipamento garante o posicionamento adequado e a profundidade correta da injeção. Aqui, vamos nos concentrar na entrega intracraniana em camundongos e ratos neonatais em que o crânio é fino o suficiente para injetar diretamente através dele, e pode ser muito frágil para suportar o dispositivo estereotaxico. Os principais objetivos desta técnica são entregar agentes farmacológicos cns diretamente ao CNS, e evitar os efeitos encontrados através de qualquer rota sistêmica. O medidor de agulha, comprimento e volume de administração são determinados com base na espécie e na idade dos filhotes. Note que à medida que a idade do animal aumenta, o número de medidor diminui, o comprimento da agulha necessário aumenta, e o volume máximo recomendado de administração também aumenta.

Com essa informação de fundo em mente, vamos nos aprofundar nos procedimentos desses métodos de injeção. A primeira é a técnica de administração intradérmica. Este procedimento deve ser realizado em animais anestesiados. Reveja outro vídeo desta coleção para entender os procedimentos de indução e manutenção da anestesia.

Uma vez que o animal é anestesiado, raspe o local da injeção usando uma navalha elétrica ou um creme depilatório. Com uma gaze umedecida pela água, remova completamente o cabelo persistente do local. Em seguida, com outra gaze pad, aplique uma solução antisséptica tópica na área raspada. Para a administração, estabilize primeiro a pele no local da injeção, esticando-a entre o polegar e o dedo indicador.

Agora coloque a agulha bisbida sobre a pele e insira-a suavemente logo após o bisel para que a abertura seja entre a epiderme e as camadas de derme. Em seguida, injete lentamente e note que ele cria uma bolha na pele. Se a agulha for inserida muito profundamente, então nenhuma bolha será formada. Depois de injetar, faça uma pausa para permitir que a pele se estique e ajuste e, em seguida, retire a agulha lentamente. Não puxe para trás no êmbolo a qualquer momento, pois você desenharia o tecido e causaria trauma no local da injeção. Além disso, não limpe ou limpe o local da injeção, pois isso pode causar o vazamento da substância injetada. Ao realizar múltiplas injeções, certifique-se de espaça-las o suficiente para que os blebs não se sobreponham uns aos outros.

Em seguida, vamos aprender o procedimento de administração intranasal em animais conscientes e anestesiados.

Para animais acordados, contenha-os esmagando a pele na nuca e, em seguida, segure o animal em uma posição vertical com a cabeça imobilizada. Tenha cuidado para não restringir o peito, pois isso pode impedir a capacidade do animal de respirar fundo o suficiente para atrair o líquido para os pulmões. Usando uma micropipette, administre parte da solução colocando uma pequena gota de líquido na abertura nasal. O animal vai inalar a gota. Repita este processo, alternando entre as duas aberturas nasais até que todo o volume a ser administrado tenha sido dado. Recordação - o volume total de administração não deve exceder 24 μl e 100 μl em camundongos e ratos, respectivamente.

Para camundongos e ratos anestesiados, coloque o animal em posição de recumbência dorsal. Esta posição é ideal para a entrega de CNS, pois permite uma melhor absorção do composto. Gire a cabeça do animal e administre metade do composto diretamente em um lado da abertura nasal, cronometrando-a com inalação. Então, gire a cabeça do animal para a próxima administração. Após 2 respirações ou mais, administre o volume restante na segunda abertura nasal. Após a administração completa, devolva o animal de volta à sua gaiola.

Em seguida, vamos rever o procedimento de administração intracraniana para camundongos e ratosneonatais. Antes de iniciar o procedimento, coloque a gaiola com os filhotes e a represa em uma almofada de aquecimento elétrica definida para baixo. Certifique-se de que uma parte da gaiola está fora da almofada de aquecimento. Isto é para prevenir hipotermia e, ao mesmo tempo, permitir que a represa se afaste do calor se ela desejar. Em seguida, selecione um medidor de agulha apropriado para a idade do animal. Lembre-se, o medidor de agulha; comprimento da agulha, que é usado para controlar a profundidade da agulha durante a injeção intracraniana; e o volume da administração... todos variam com a idade e espécie do animal.

O comprimento é ajustado usando um protetor. Para preparar este protetor, meça a agulha correta contra sua tampa e faça uma marca. Em seguida, coloque uma segunda marca na tampa para indicar onde ela será cortada. A distância entre as duas marcas é o comprimento da agulha desejado. Então, corte a tampa com uma lâmina de barbear. Não use tesouras, pois elas esmagarão a tampa e não produzirão um corte de nível limpo. Este é o "protetor de agulhas". Descarte a agulha usada para criar o protetor, pois não é mais estéril, e, em vez disso, insira uma nova agulha no protetor e certifique-se de que o comprimento correto seja exposto. Em seguida, usando uma agulha diferente presa à seringa adequada, desenhe a substância de injeção. Uma agulha diferente é usada para fazer isso, porque a colocação na rolha irá embotar significativamente essas agulhas de bitola fina, o que não é ideal para administração intracraniana. Em seguida, coloque a seringa cheia na agulha com o protetor. Agora o sistema está pronto para uma injeção.

Para filhotes com mais de 10 dias de idade, administre anestesia por inalação. Filhotes com menos de 10 dias de idade não precisam ser anestesiados. Para realizar a injeção, primeiro localize o local, que é 5 mm atrás do olho e aproximadamente 3 mm fora da linha média do crânio. Em seguida, insira a agulha na profundidade permitida pelo protetor de agulha. Então, injete de forma lenta e constante para evitar traumas no cérebro. Remova a agulha imediatamente e com muito cuidado para evitar lesões no tecido cerebral. Por fim, coloque o animal de volta com a represa para permitir a recuperação adequada.

Agora vamos rever alguns experimentos que estão sendo conduzidos em laboratórios hoje que utilizam essas rotas incomuns de administração.

Uma injeção intradérmica é frequentemente usada para estudar a reação inflamatória da pele. Neste experimento, os pesquisadores usaram esse método para injetar um alérgeno em um ouvido e uma substância neutra no ouvido oposto de um rato pré-sensibilizado. Em seguida, eles entregaram um corante azul no sistema circulatório do animal para examinar as mudanças na permeabilidade vascular devido à injeção de alérgeno.

Como mencionado anteriormente, uma das aplicações da administração intranasal é a administração da administração. Aqui, os cientistas usaram essa rota para fornecer uma vacina contra gripe atenuada geneticamente modificada ao vivo no tipo selvagem e camundongos transgênicos e estudaram imunidade mucosa através da produção de um tipo específico de células T.

Por fim, essas pesquisas biomédicas usaram a administração intracraniana para implantar células cancerígenas em camundongos imunocomprometidos, a fim de criar um modelo de tumor cerebral humano. A eficácia da injeção foi então analisada utilizando-se um sistema de imagem in vivo.

Você tem jus assistiu o vídeo de JoVE sobre alguns dos métodos especiais de administração composta em ratos e ratos de laboratório. Agora você deve entender quando esses procedimentos são úteis, as considerações que você deve ter em mente antes e ao executar essas técnicas, e as etapas processuais essenciais para garantir que a administração tenha um impacto mínimo na saúde do animal e nos dados experimentais a serem coletados. Como sempre, obrigado por assistir!